生物制品的制備ppt課件-免費(fèi)閱讀
【正文】 用于制備生產(chǎn)用的工作代工程菌種。但是 Ap抗性由于目的基因插入 Ap抗性基因而消失，故在含 Ap選擇平板上培養(yǎng)時(shí)不能生長(zhǎng)，篩選這樣的大腸桿菌進(jìn)行擴(kuò)增，即可得到可表達(dá)目的基因產(chǎn)物的工程菌。作為載體，質(zhì)?？梢越蛹{中等大小的 DNA片斷，如小于 10kb的 DNA；如果大于 10kb的 DNA插入質(zhì)粒，將大大降低重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)量。 用逆轉(zhuǎn)錄酶制備 cDNA（又稱 cDNA法） 化學(xué)合成目的基因 利用磷酸二酯法、磷酸三酯法等方法合成。它催化超氧負(fù)離子歧化為 H2O2。目前僅利用了其中的 I（纖維蛋白原）、 II（免疫球蛋白）和 V（白蛋白） 3個(gè)組分， III和 IV，目前基本未加以利用。 ?白蛋白（ albumin）又稱清蛋白，白蛋白是血漿蛋白中含量最高（ ～ %）、分子量最小、分子數(shù)最多的一類蛋白質(zhì)。 ② 是用特殊試劑沉淀某種氨基酸 ， 如用鄰二甲苯 4磺酸與亮氨酸形成不溶性鹽沉淀 ， 再用氨水分解 ， 使亮氨酸游離出來 。 七、氨基酸類制品的分離純化方法 （ isolation and depuration of Aa） （ 1）氨基酸的生產(chǎn)方法 （ production of Aa） ?蛋白質(zhì)水解法 （ protein hydrolysis）： 水解法有酸水解（ acid hydrolysis）、堿水解（base hydrolysis）和酶水解（ enzyme hydrolysis）三種。 常用的溶劑有組合溶劑 ， 醇是其中的主要成分 ， 此外還有氯仿 、甲醇 、 水等 。 45倍體積的乙醇可以使任何結(jié)締組織中的粘多糖完全沉淀 。 高 RNA含量酵母 搖瓶發(fā)酵 種子培養(yǎng)物 連續(xù)發(fā)酵 發(fā)酵液 過濾 酵母菌體 NaOH 20℃攪拌 破壁 氨水處理 離心 上清液 沉淀蛋白 三氯乙酸 酸調(diào)pH 核酸粗品 乙醇洗滌 干燥 RNA干品 五 、 糖類制品的分離純化方法 （ Isolation and depuration of sugar ） 由于各種糖類制品的性質(zhì)和原料來源不同 ， 沒有統(tǒng)一規(guī)范的提取和純化工藝 。 ?，可用于和 載體相連，同時(shí)又不影響配基與生物分子之間的親和力。 ?維生素與結(jié)合蛋白。 ?3）親和層析的基本原理 （ Mechanism of Affinity Chromatography） ?① 親和的一對(duì)分子中的一方以共價(jià)鍵形式與不溶性載體相連作為 固定相吸附劑 。 利用電學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分離的方法有 離子交換柱層析法 （ionexchange chromatography ） 、 電 泳 法 （electrophoresis ） 、 等電聚焦法 （ isoelectric focusing） 等 。其中膜分離法可用于生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級(jí)和脫鹽。 ② 考慮提取溶劑的 用量 及提取 次數(shù) 、 提取時(shí)間 。 二、生物制品的提取（ extraction） (1)生物組織與細(xì)胞的破碎 （ obtrude of tissue and cell）：生物制品大部分存在于生物組織或細(xì)胞中，要提高提取率，破碎過程是非常重要的。 該方法適用于所有生物原料 。 （ 2）原料的預(yù)處理與保存： ① 動(dòng)物原料 ： 采集后要立即處理，去除結(jié)締組織、脂肪組織等，并迅速冷凍貯存 。 ③ 防腐劑保鮮 。 （ 2） 提取 （ extraction） 生物組織與細(xì)胞破碎后要立即進(jìn)行提取 。常用的有鹽析法（ salting out）、有機(jī)溶劑沉淀法（ anic solvent precipitation）、等電點(diǎn)沉淀法（ isoelectric precipitation）、與靶物質(zhì)結(jié)合沉淀法（如抗體 — 抗原）（ target banding precipitation）等。 它們具有 等電點(diǎn) ， 在離開等電點(diǎn)的 pH時(shí)便會(huì)帶正或負(fù)電荷 。 ?基質(zhì)（ matrix）： 亦稱為載體（ vector），是構(gòu)成固定相的骨架 。 ?DNA與互補(bǔ) DNA或 RNA（ cDNA、mRNA)。 ?在溫和的條件下 能與配基共價(jià)偶聯(lián)。 四、核酸類制品的分離純化方法 （ Isolation and depuration of nucleic acid ） ?核酸類藥物生產(chǎn)方法主要有 提取法和發(fā)酵法。 又如用酶處理法可提取與蛋白質(zhì)結(jié)合的多糖 。 六 、 脂類制品的分離純化方法 （ isolation and depuration of lipoid） （ 1） 提取方法 （ extraction ） 脂類自然狀態(tài)下是以結(jié)合形式存在的 。 ?離 子 交 換 層 析 法 （ Ion exchange chromatography） : 脂質(zhì)分子的存在有非解離 、 兩性離子和酸式解離三種狀態(tài) 。 ?化學(xué)合成與酶促合成法 化學(xué)合成法 一般得到的是 DL— 型氨基酸 ， 尚需要對(duì)異構(gòu)體拆分； 酶促合成法 也是酶工程在醫(yī)藥工業(yè)上的應(yīng)用 ， 優(yōu)點(diǎn)是技術(shù)工藝簡(jiǎn)單， 轉(zhuǎn)化率高 ， 副產(chǎn)物少和易提純等 。 第二節(jié) 人體來源生物制品制備實(shí)例 （ Example of biopreparation application to human） 一、人血漿白蛋白制劑的制備（ preparation of human blood plasma albumin） ?（ 1）結(jié)構(gòu)和性質(zhì) （ structure and character） ?人
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