《生物制品的制備》ppt課件-預(yù)覽頁
【正文】 ② 微生物原料的對數(shù)期； ③ 動物原料的年齡與性別 。 該方法適用于所有生物原料 。該法適用于原料少而價值高 、 有機溶劑對活性物質(zhì)沒有破壞作用的原料 ， 如腦垂體等 。 二、生物制品的提取（ extraction） (1)生物組織與細胞的破碎 （ obtrude of tissue and cell）：生物制品大部分存在于生物組織或細胞中，要提高提取率，破碎過程是非常重要的。 ⑤ 自溶法或酶解法 ， 用得較少 。 ② 考慮提取溶劑的 用量 及提取 次數(shù) 、 提取時間 。原理是使蛋白質(zhì)膠體顆粒破壞，從而沉淀蛋白質(zhì)。其中膜分離法可用于生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級和脫鹽。 (3)按分子所帶電荷進行分離的方法 氨基酸 、 多肽 、 蛋白質(zhì) 、 酶均為兩性電解質(zhì) 。 利用電學(xué)性質(zhì)進行分離的方法有 離子交換柱層析法 （ionexchange chromatography ） 、 電 泳 法 （electrophoresis ） 、 等電聚焦法 （ isoelectric focusing） 等 。 ?配基（ ligand） ： 被固定在基質(zhì)上的分子稱為配基，配基和基質(zhì)是以共價鍵結(jié)合的。 ?3）親和層析的基本原理 （ Mechanism of Affinity Chromatography） ?① 親和的一對分子中的一方以共價鍵形式與不溶性載體相連作為 固定相吸附劑 。 （ Fig1. Mechanism of AC） （ Fig2. Mechanism of AC） 抗原 專一抗體 基質(zhì) 具有特異性親和作用的生物分子 ?4）配基的種類 (sorts of ligand) ?抗原與抗體。 ?維生素與結(jié)合蛋白。 ?具有惰性，盡量減少非專一性吸附。 ?，可用于和 載體相連，同時又不影響配基與生物分子之間的親和力。 ③ 洗脫（ Elution） 選擇適當?shù)臈l件，將吸附在親和介質(zhì)上的目的物解吸下來（見下圖）。 高 RNA含量酵母 搖瓶發(fā)酵 種子培養(yǎng)物 連續(xù)發(fā)酵 發(fā)酵液 過濾 酵母菌體 NaOH 20℃攪拌 破壁 氨水處理 離心 上清液 沉淀蛋白 三氯乙酸 酸調(diào)pH 核酸粗品 乙醇洗滌 干燥 RNA干品 五 、 糖類制品的分離純化方法 （ Isolation and depuration of sugar ） 由于各種糖類制品的性質(zhì)和原料來源不同 ， 沒有統(tǒng)一規(guī)范的提取和純化工藝 。 如從軟骨中分離提取硫酸軟骨素 （ chondroitin sulfate） ， 就是用堿處理進行降解 。 45倍體積的乙醇可以使任何結(jié)締組織中的粘多糖完全沉淀 。洗脫可用 NaC1溶液進行梯度洗脫。 常用的溶劑有組合溶劑 ， 醇是其中的主要成分 ， 此外還有氯仿 、甲醇 、 水等 。洗脫一般是采用極性逐漸增大的洗脫液來進行，非極性的先流出，極性的后流出 。 七、氨基酸類制品的分離純化方法 （ isolation and depuration of Aa） （ 1）氨基酸的生產(chǎn)方法 （ production of Aa） ?蛋白質(zhì)水解法 （ protein hydrolysis）： 水解法有酸水解（ acid hydrolysis）、堿水解（base hydrolysis）和酶水解（ enzyme hydrolysis）三種。 ?發(fā)酵法 （ fermentation） ： 菌株經(jīng)過發(fā)酵后 ， 從培養(yǎng)液中提純氨基酸 。 ② 是用特殊試劑沉淀某種氨基酸 ， 如用鄰二甲苯 4磺酸與亮氨酸形成不溶性鹽沉淀 ， 再用氨水分解 ， 使亮氨酸游離出來 。 常用的離子交換劑為強酸型陽離子交換樹脂 ， 洗脫主要用 pH梯度洗脫 。 ?白蛋白（ albumin）又稱清蛋白，白蛋白是血漿蛋白中含量最高（ ～ %）、分子量最小、分子數(shù)最多的一類蛋白質(zhì)。 ?從人體中分離的白蛋白有兩種： 一種是從健康人血漿中分離制得的人血清白蛋白，另一種是從健康產(chǎn)婦胎盤中分離制得的胎盤白蛋白。目前僅利用了其中的 I（纖維蛋白原）、 II（免疫球蛋白）和 V（白蛋白） 3個組分， III和 IV，目前基本未加以利用。用于炎癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、慢性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎及放射治療后的炎癥等。它催化超氧負離子歧化為 H2O2。 A、限制性內(nèi)切酶切取目的基因 B、用逆轉(zhuǎn)錄酶制備 cDNA（又稱 cDNA法） C、化學(xué)合成目的基因 用來分離原核基因的方法。 用逆轉(zhuǎn)錄酶制備 cDNA（又稱 cDNA法） 化學(xué)合成目的基因 利用磷酸二酯法、磷酸三酯法等方法合成。 在獲取目的基因后，應(yīng)首先考慮所得基因是否是所需要的目的基因。作為載體，質(zhì)?？梢越蛹{中等大小的 DNA片斷，如小于 10kb的 DNA；如果大于 10kb的 DNA插入質(zhì)粒，將大大降低重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)量。 一般通過抗性基因的酶切位點插入抗性基因中，從而導(dǎo)致抗性基因的失活。但是 Ap抗性由于目的基因插入 Ap抗性基因而消失，故在含 Ap選擇平板上培養(yǎng)時不能生長，篩選這樣的大腸桿菌進行擴增，即可得到可表達目的基因產(chǎn)物的工程菌。 二、下游技術(shù) 工程菌種的代次、保存和檢定 工程菌發(fā)酵及產(chǎn)物表達 目的基因產(chǎn)物（目的蛋白）的分離純化 原始代工程菌種 ： 經(jīng)過基因重組后建立的工程菌為原始代工程菌種，又稱 原始代種子批 對原始代工程菌種應(yīng)采取凍干方法低溫保存。 用于制備生產(chǎn)用的工作代工程菌
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