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雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡-文庫吧資料

2024-10-03 01:02本頁面
  

【正文】 到了。2. 建立LogFL1LogFL2(最好用FL3)雙參數(shù)點(diǎn)圖并分析以上光散射圖中設(shè)門的細(xì)胞;保證98%的細(xì)胞處于在X、Y 軸Log 1 為邊界的左下象限中心區(qū)域。 根據(jù)未處理細(xì)胞空白對(duì)照和經(jīng)Annexin V、PI 分別細(xì)胞染色后的單染對(duì)照的分析設(shè)定十字門的位置。建議在實(shí)驗(yàn)開始階段分析經(jīng)Annexin V、PI 分別單染的細(xì)胞來調(diào)整熒光補(bǔ)償去除光譜重疊。使用流式細(xì)胞儀正確分析Annexin VEGFP/PI 雙染的細(xì)胞前要求儀器的熒光補(bǔ)償來去除兩種染料激發(fā)光之間的疊加。 流式細(xì)胞儀激發(fā)光波長(zhǎng)采用Ex.= 488nm雙波長(zhǎng)激發(fā),Em.= 510 nm檢測(cè)EGFP熒光(FL1 channel)和575 nm的發(fā)射檢測(cè)PI。C 避光條件下孵育5分鐘。C 避光條件下孵育15分鐘。3. 用400ul 1X Binding Buffer 懸浮細(xì)胞,濃度大約為1 X 106 cells/ml。(貼壁細(xì)胞用不含EDTA的胰酶消注意:Annexin VEGFP和碘化丙啶染液應(yīng)該避光存放和使用。因此將AnnexinV 與PI 匹配使用,就可以將亡早
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