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雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡(完整版)

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【正文】細(xì)胞應(yīng)可分成三個(gè)亞群：活細(xì)胞僅有很低的熒光強(qiáng)度，凋亡細(xì)胞有較強(qiáng)的綠色熒光，壞死細(xì)胞（包括極晚期凋亡細(xì)胞）有綠色和紅色熒光雙重染色。5. 加入10ul PI 后輕輕混勻于28176。今天用Annexin VEGFP/PI雙染法檢測(cè)樹突狀細(xì)胞的凋亡情況，存有下面幾個(gè)問題：正式上樣檢測(cè)時(shí)應(yīng)該從對(duì)照管開始，也就是說前面用作儀器條件調(diào)試的還要重新走樣。在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine, PS）位于細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)，但在細(xì)胞凋亡的早期，PS 可從細(xì)胞膜的內(nèi)側(cè)翻轉(zhuǎn)到細(xì)胞膜的表面，暴露在細(xì)胞外環(huán)境中。C 避光條件下孵育5分鐘。使用流式細(xì)胞儀正確分析Annexin VEGFP/PI 雙染的細(xì)胞前要求儀器的熒光補(bǔ)償來去除兩種染料激發(fā)光之間的疊加。2. 建立LogFL1LogFL2（最好用FL3）雙參數(shù)點(diǎn)圖并分析以上光散射圖中設(shè)門的細(xì)胞；保證98%的細(xì)胞處于在X、Y 軸Log 1 為邊界的左下象限中心區(qū)域。如果這個(gè)調(diào)節(jié)沒有有效地去除FL1 的陽性信號(hào)，此時(shí)要降低FL1 PMT 的電壓。將垂直的FL1 標(biāo)尺設(shè)定在緊靠Annexi

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