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雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡(更新版)

  

【正文】 n V 單位的地方。在此條件下可能會(huì)識(shí)別出兩群細(xì)胞,一是位于散點(diǎn)圖的右下方(ANN+/PI)還有就是右上方(ANN+/PI+)。如果有顆粒出現(xiàn)在上端象限則說明有熒光滲漏;此時(shí)FL1的熒光被FL2(或FL3)PMT檢測(cè)到了。建議在實(shí)驗(yàn)開始階段分析經(jīng)Annexin V、PI 分別單染的細(xì)胞來調(diào)整熒光補(bǔ)償去除光譜重疊。(貼壁細(xì)胞用不含EDTA的胰酶消本試劑盒采用重組人Annexin VEGFP融合蛋白作為熒光探針,利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。 原理:碘化丙啶有毒,應(yīng)小心保存和使用,注意個(gè)人保護(hù)。4. 在細(xì)胞懸浮液中加入5ul Annexin VEGFP,輕輕混勻后于28176。4. 檢測(cè)PI 單染的細(xì)胞并檢查FL1FL2(或FL3)散點(diǎn)圖,保證在右上和右下象限內(nèi)沒有顆粒。過度補(bǔ)償可以從陽(yáng)性細(xì)胞十分貼近從標(biāo)這一現(xiàn)象觀察出來。注:在陰性群體門以外的細(xì)胞可被識(shí)為Annexin V 或Annexin V 和PI 陽(yáng)性的細(xì)胞。對(duì)照組細(xì)胞體積太少,根本不夠調(diào)試細(xì)胞團(tuán)位置(FSC和SSC參數(shù))、自身熒光和熒光補(bǔ)償?shù)?br />
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