【正文】 于藥品， FDA的 CAC特別提出了一套評估方案，包括 給藥原理 和實驗設(shè)計 客戶必須提交與實驗計劃給藥途徑一致的 預(yù)試驗結(jié)果 ，此外還需提交遺傳毒理學(xué)數(shù)據(jù)，人類給藥和暴露劑量，蛋白結(jié)合信息，人體和動物中代謝物的數(shù)據(jù) 在試驗開始前，無任何其他機構(gòu)定期審查方案 如果 FDA與客戶意見一致或客戶同意接受美國 FDA的建議，無論研究結(jié)果如何， FDA都認為劑量的選擇適當 美國 FDA致癌評估委員會（ CAC） 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗 毒理學(xué)監(jiān)測 攝食量 體重 臨床癥狀 六個月后進行觸診腫塊，一般每周一次，但可以低于此頻率。 組數(shù)和每組動物數(shù) 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗 104周大鼠口服給藥致癌實驗 * 若賦形劑不常用，可增加一個對照組； 因為有中期剖檢和毒代用動物數(shù)量增加 Note：根據(jù) ICH指導(dǎo)原則，對于長期用藥， 6個月毒理試驗加一個兩年致癌性試 驗足夠了，無需 12個月的毒理試驗。 基本原理 體內(nèi) Piga基因突變試驗 體內(nèi) Piga基因突變試驗 體內(nèi) Piga基因突變試驗 藥物遺傳毒性評價的指導(dǎo)原則 1 遺傳毒性試驗方法的研究 2 藥物致癌性評價的概要 3 傳統(tǒng)和替代致癌試驗的研究 4 4 主要內(nèi)容 藥物致癌性評價的概要 藥物致癌性試驗的指導(dǎo)原則 2. ICH 指導(dǎo)原則 S1A：藥物致癌試驗的必要性 S1B：藥物致癌試驗 S1C：藥物只要試驗的劑量選擇 S1C(R)：藥物致癌試驗劑量選擇的附件 1. SFDA指導(dǎo)原則（國食藥監(jiān)注 [2023]129號） 《 藥物致癌試驗必要性的技術(shù)指導(dǎo)原則 》 Technical guidance on the need for carcinogenicity studies for pharmaceuticals （等同于 ICH S1A） 藥物致癌性評價的概要 致癌性試驗指南 藥物致癌性評價的概要 ICH S1A 和 SFDA指導(dǎo)原則 致癌試驗要求 持續(xù)使用 6個月以上的藥物或頻繁、周期性、間歇性使用的藥物； 如果有致癌傾向，一些短期使用藥物也要做致癌試驗， 某些劑型或輸藥系統(tǒng)會導(dǎo)致體內(nèi)藥物長期暴露的 時間窗要求 批準上市 之前要做致癌試驗； 一些特殊關(guān)注的群體（如嬰幼兒）則需要在批準（ IV期臨床）前做 用于嚴重甚至威脅生命的疾病的藥物可以在臨床批準（ IV期臨床） 后做（沒滿意的可替代療法；特定人群如腫瘤病人較短的生存期； 視適應(yīng)癥不同等情況而定） 藥物致癌性評價的概要 以下情況不需要致癌試驗 明確的基因型致癌物 假定此類藥物具有跨種屬致癌性 經(jīng)眼睛用藥和皮膚用藥 藥物無明顯的結(jié)構(gòu)警示和全身暴露 藥物經(jīng)過鹽、酸或某些治療性基因改變 改變之前的試驗數(shù)據(jù)已存在 改變后的 PK、 PD和毒性沒有明顯改變 用于治療危及生命的疾病或患者存活期較短（ ＜ 23年） 生物制劑（蛋白療法）通常不要求致癌試驗 — case by case（ ICH S6） ICH S1A 和 SFDA指導(dǎo)原則 遺傳毒性和致癌性的相關(guān)性 1. 基因型與非基因型致癌物的致癌性 2. Ames陽性的致突變劑中， 80%具有致癌性 3. 由 2年動物致癌試驗證實呈陽性的致癌物中， 50%具有遺傳毒性 Correlation is not perfect! 2. 藥物體外遺傳毒性試驗的陽性率偏高 (Snyder et al. –Mutat Res. 2023, 488: 15169) 25%上市藥物具有遺傳毒性結(jié)果 在體外染色體損傷試驗中證實陽性的藥物，在致癌試驗中大部分呈陰性 在體外染色體損傷試驗中，高于治療濃度的藥物呈陽性，通常與細胞毒性有關(guān) 3. 藥物的遺傳毒性和致癌性不完全相符的其他原因 體內(nèi)組織修復(fù)功能 適應(yīng)性反應(yīng) 遺傳多態(tài)性 器官及系統(tǒng)之間相互作用等因素 遺傳毒性和致癌性的相關(guān)性 藥物遺傳毒性評價的指導(dǎo)原則 1 遺傳毒性試驗方法的研究 2 藥物致癌性評價的概要 3 傳統(tǒng)和替代致癌性試驗的研究 4 4 主要內(nèi)容 致癌性試驗研究 先導(dǎo)物研發(fā) 靶點篩選 候選物篩選 I 期臨床 III期臨床 II期臨床 IV期臨床 傳統(tǒng)兩年嚙齒類動物致癌試驗 起始于上世紀 60年代，首先用于檢測工業(yè)化學(xué)物質(zhì)的致癌性 現(xiàn)用于檢測大多數(shù)慢性藥物的致癌性 非傳統(tǒng)嚙齒類動物致癌試驗 – 轉(zhuǎn)基因動物 1997年開始用于檢測新藥的致癌性（ ICH S1B） 目前尚未用于首要和工業(yè)化合物的致癌性檢測 GLP致癌性研究 ? 大鼠 ? 小鼠 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗 嚙齒類每個品系都有其病變背景并容易自發(fā)腫瘤，因此背景數(shù)據(jù)和經(jīng)驗非常重要。 piga突變導(dǎo)致細胞表面 GPI錨蛋白缺陷。 三色 FCM自動化 MN檢測系統(tǒng)符合IWGT的標準 FCM體內(nèi)微核自動化檢測 基本滿足分子生物學(xué)和組合化學(xué)的大量候選化合物的毒性篩選 快速、高通量 靈敏、客觀 機制研究 無種屬選擇性 三色 FCM vs 顯微鏡檢 ? 既可以檢出染色體斷裂劑，也可以檢出非整倍體誘導(dǎo)劑； ? 研究量效關(guān)系和毒性閾值。 體外雙核微核 濃度設(shè)置 陰性對照組 /溶劑對照組； 受試物至少三個濃度組 陽性對照組； 體外雙核微核試驗 方法 細胞復(fù)蘇、培養(yǎng)； 受試物處理； 收獲細胞，滴片 空氣干燥，染色 (+CytB) (+CytB) 體外雙核微核試驗 讀片分析 胞漿分裂阻斷增值指數(shù)（ CBPI） －細胞毒性 雙核微核率 （ 1000～ 2023個雙核） 體外雙核微核試驗 給藥染毒 采集血樣（～ 100?l） － 80℃ 至少固定 3d 離心 (300g,10min,4℃ ) buffer洗脫 孵育標記 FCM檢測 4℃ , 30min RT/37℃ , 30min S2R1推薦的試驗方法 FCM體內(nèi)微核自動化檢測 FCM體內(nèi)微核自動化檢測 ?甲醇（ %） ?－ 80℃ ?至少固定 3d ?AntiCD71FITC ?AntiCD61PE ?PI ?RNase ?生物標準品 —伯氏瘧原蟲感染的紅細胞模仿 MN ?調(diào)節(jié) PMT電壓 ?調(diào)節(jié)補償 血樣固定 標記染色 質(zhì)控 FCM體內(nèi)微核自動化檢測 圖 1 利用 CD71()樣品和瘧原蟲生物標準品建立 FCM檢測小鼠外周血 MN的模板。 小鼠淋巴瘤細胞試驗（ MLA） 小鼠淋巴瘤細胞試驗（ MLA） 試驗結(jié)果的判定 ? 各處理組的 MF值呈 濃度依賴性升高 ，判定為陽性； ? MF值 ≥陰性對照值 +126， 判定為陽性。這是 TK基因突變試驗?zāi)軌驒z出基因突變和染色體畸變兩類終點，并能在一定程度上對 二者加