【正文】 剩下的一個有功能的等位基因的突變會誘導(dǎo)腫瘤的快速發(fā) 生。在與 GPI錨合成有關(guān)的基因中，只有 piga位于 X染色體上，其他基因都位于常染色體上，故 GPI錨缺陷表型幾乎等同于 piga突變。但關(guān)于兩類集落產(chǎn)生的確切機(jī)制及其意義，還有待進(jìn) 一步的研究。在平皿中生長的抗性突變細(xì)胞集落呈近似正態(tài)分布，根據(jù)實驗結(jié)果可計算克隆效率（ cloning efficiency， CE）和突變率（ mutation frequency， MF）等指標(biāo)。 Ames試驗 結(jié)果觀察和判定 計數(shù)突變菌落數(shù)－致突變性 觀察背景菌斑－毒性 判斷是否具有致突變性 Ames試驗 假設(shè)的證明 無組氨酸的 VB平皿 7個克隆來自 0對照平皿 劃線 7個克隆 來自 1000 ug/皿處理組 劃線 全部生長 : 克隆為組氨酸 回復(fù)突變克隆 無生長： 克隆 不是 組氨酸 回復(fù)突變克隆 Ames試驗 —案例 1 ?測試系統(tǒng) 哺乳動物細(xì)胞： CHL, CHO 人外周血淋巴細(xì)胞 ?細(xì)胞核型 遺傳毒性試驗的技術(shù)要點 3 2 染色體畸變試驗 (CA) 劑量設(shè)置 ?陰性對照組 /溶劑對照組； ?受試物至少三個劑量組； ?陽性對照組； 染色體畸變試驗 方法 ?細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)； ?受試物處理； ?加入秋水仙素，使細(xì)胞停止于分裂中期； ?收獲細(xì)胞，滴片 ?空氣干燥，染色 染色體畸變試驗 ?包括代謝活化和非代謝活化條件 ?在處理后 6和 24小時收獲細(xì)胞 ?代謝活化條件下，受試物處理時間為 3小時 染色體畸變試驗 處理條件 讀片分析 ?有絲分裂指數(shù)－毒性 ?染色體結(jié)構(gòu)畸變 ?染色體數(shù)目畸變 染色體畸變試驗 ?試驗系統(tǒng) 小鼠淋巴瘤 L5178Y TK+/細(xì)胞 ?既能夠檢測點突變，也能夠檢測出大的染色體損傷 ?自發(fā)突變率高，需要定期清除自發(fā)突變。藥物遺傳毒性和致癌性研究現(xiàn)狀和動向 2023/1/16 1 常 艷 國家上海新藥安全評價研究中心 藥物遺傳毒性評價的指導(dǎo)原則 1 遺傳毒性試驗方法的研究 2 藥物致癌性評價的概要 3 傳統(tǒng)和替代致癌試驗的研究 4 4 主要內(nèi)容 遺傳毒性評價的指導(dǎo)原則 SFDA 中國國家食品藥品監(jiān)督管理局 ICH 人用藥物注冊技術(shù)規(guī)定國際協(xié)調(diào)組織 OECD 經(jīng)濟(jì)合作發(fā)展組織 EMEA 歐洲藥品評價局 US FDA 美國藥監(jiān)局 US EPA 美國環(huán)境保護(hù)署 MHLW 日本厚生勞動省 其他世界性的政府法規(guī)部門 藥物研發(fā)監(jiān)管的主要藥政實體 OECD、 EPA可供參考的遺傳毒性指導(dǎo)原則 遺傳毒性試驗的指導(dǎo)原則 SFDA 體外： 2項試驗 ? 細(xì)菌回復(fù)突變試驗（ Ames） —— Required ? 染色體畸變試驗（ CA） OR ? 小鼠淋巴瘤細(xì)胞 tk基因突變試驗（ MLA） ? 體內(nèi)： 1項試驗 ? 微核試驗（ MN） —— Required 《藥物遺傳毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》 ZH GPT 21, 2023 等同于 ICH S2B ICH S2A+S2B FDARedbook Redbook 2023: ShortTerm Tests for Geic Toxicity July 2023 Redbook 2023: Bacterial Reverse Mutation Test Redbook 2023: In vitro Mammalian Chromosomal Aberration Test Redbook 2023: Mouse Lymphoma Thymidine Kinase Gene Mutation Assay Redbook 2023: Mammalian Erythrocyte Micronucleus Test FDACDER FDACDER EMEA EMEA EMEA Step 2 Step 1 Step 3 Step 4 2023 2023 2023 2023~2011 ? ICH SC 同意啟動修訂工作 ? 2023. 10 ICH EWG 討論籌劃修訂方法 ? 2023. 05 對修訂內(nèi)容達(dá)成一致意見，開始起草S2(R1) ? 2023. 10 完成起草的 S2(R1) ? 2023. 02 簽署 S2(R1)，完成step 2 ? 2023. 06 審議意見，回答公共注釋 ? 2023. 11 未按期開會（未獲得彗星試驗數(shù)據(jù)） ? ? 體內(nèi)試驗單次和重復(fù)給藥方案都接受 ? FDA對 取消體外細(xì)胞試驗或降低最高濃度和細(xì)胞毒性 提出異議 ? S2(R1)正式頒布 遺傳毒性標(biāo)準(zhǔn)組合試驗的修訂 2023~2011 ICH S2A+S2B=S2(R1) S2R1 的修訂宗旨： ?減少體外哺乳動物細(xì)胞試驗的假陽性 ?動物試驗 3R原則（替代、減少和優(yōu)化） In vivo： 建議整合入重復(fù)給藥毒性實驗中 每次實驗不必使用平行的陽性對照 應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測 ICH S2A+S2B=S2(R1) 遺傳毒性標(biāo)準(zhǔn)組合試驗的修訂 S2B S2R1 選擇一 選擇二 細(xì)菌回復(fù)突變試驗 （ with repeat） 細(xì)菌回復(fù)突變試驗 （ No repeat） 細(xì)菌回復(fù)突變試驗 （ No repeat） 體外哺乳動物細(xì)胞試驗： CA / MLA 10mM Cell growth:?50% / RTG: ? 80% 體外哺乳動物細(xì)胞試驗： CA / MLA / MN 1mM ≤50%/ ≥80% 無 體外哺乳動物細(xì)胞試驗 體內(nèi)微核試驗 （單獨一項且是急性毒性試驗） 體內(nèi)微核試驗 （整合至一般毒理試驗中） 一項體內(nèi)微核試驗 + 一項體內(nèi)不同檢測終點 /組織試驗（肝 Comet試驗） （整合至一般毒理試驗中或聯(lián)合在同一個試驗） 整合試驗的最高劑量和暴露 ICH S2(R1)修訂小結(jié) S2A和 S2B整合入一個指導(dǎo)原則中； 提供可選擇的遺傳毒性試驗組合； 減少 體外哺乳動物細(xì)胞試驗不相關(guān)的陽性； 體內(nèi)遺傳毒性試驗可以 整合 入重復(fù)給藥毒性試驗中； 無需每一項體內(nèi)試驗都設(shè)同步的陽性對照； 體外細(xì)菌突變試驗無需重復(fù)試驗。 3 小鼠淋巴瘤細(xì)胞試驗（ MLA） 遺傳毒性傳統(tǒng)試驗方法 Thymidine Kinase (TK): 233 amino acids Coded by the autosomal tk gene tk gene: Situated at the distal end of the qarm of chromosome 11 (mouse) or chromosome 17 (