cr質(zhì)控及問題分析ppt課件-文庫吧資料
2025-05-11 12:06本頁面
【正文】 式 PCR（ NestPCR） ? 遞減 PCR（ TouchDown PCR） ? 熱啟動 PCR（ HotStart PCR） ? 使用 PCR增強劑 策略之一巢式 PCR PF1 PR1 PF2 PR2 ? 巢式 PCR的使用降低了擴增多個靶位點的可能性，因為同多套引物都互補的靶序列很少。所用離心管及加樣槍頭等均應(yīng)一次性使用。 PCR體系 問題、原因分析及其解決方案 提高 PCR反應(yīng)特異性的策略 臨床 PCR檢測的常見問題 實時熒光 PCR定量 檢測的 關(guān)鍵 問題 PCR體系內(nèi)的常見問題、原因分析及其對策 PCR標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系 ? DNA模板 ? 引物 ? 反應(yīng)緩沖液 ? Mg 2＋ 濃度 ? dNTPs ? dH2O ? 耐熱聚合酶 反應(yīng)體系對 PCR擴增的影響 DNA模板 純 度 蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)會抑制 PCR反應(yīng) 完整性 模板降解會導(dǎo)致 PCR擴增無產(chǎn)物 濃 度 加量過多導(dǎo)致非特異性擴增增加 引 物 特異性 長度適當(dāng)、避免二級結(jié)構(gòu)和二聚體 PD 完整性 避免反復(fù)凍融 濃 度 應(yīng)適當(dāng) ,過高導(dǎo)致非特異性增加 , 過低則擴增產(chǎn)物 太少 反應(yīng)體系對 PCR擴增的影響 ?過高非特異性嚴(yán)重 ?過低無擴增產(chǎn)物 ?濃度適當(dāng) ?避免反復(fù)凍融 ?pH值適當(dāng) ?避免污染 ? pH值 ,鹽離子濃度 ?穩(wěn)定劑 ,增強劑 反應(yīng)緩沖液 dNTPs dH2O Mg 2＋ 濃度 如何選擇最合適的 DNA聚合酶 PCR用耐熱DNA聚合酶 Taq酶 pfu酶 Hotstart Taq酶 混合酶 Taq plus Long Taq Taq platinum 特異性
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