《cr質控及問題分析》ppt課件-文庫吧
2025-04-20 12:06 本頁面
【正文】 體 PD 完整性 避免反復凍融 濃 度 應適當 ,過高導致非特異性增加 , 過低則擴增產物 太少 反應體系對 PCR擴增的影響 ?過高非特異性嚴重 ?過低無擴增產物 ?濃度適當 ?避免反復凍融 ?pH值適當 ?避免污染 ? pH值 ,鹽離子濃度 ?穩(wěn)定劑 ,增強劑 反應緩沖液 dNTPs dH2O Mg 2＋ 濃度 如何選擇最合適的 DNA聚合酶 PCR用耐熱DNA聚合酶 Taq酶 pfu酶 Hotstart Taq酶 混合酶 Taq plus Long Taq Taq platinum 特異性 基因組擴增、 RTPCR 保真性 基因篩選、測序、克隆 長片段擴增 構建基因圖譜、測序等 擴增效率 復雜模板擴增 （ GC含量高、二級結構） PCR試劑盒 復雜模板擴增、大規(guī)?；驒z測 如何選擇最合適的 DNA聚合酶 根據(jù) PCR實驗需求 PCR常見問題之一 無擴增產物 現(xiàn)象：正對照有條帶，而樣品則無 M 1 2 正對照 原 因 ? 模板含有抑制物，含量低 ? 引物設計不當或者發(fā)生降解 ? 反應條件：退火溫度太高，延伸時間太短 ? 純化模板或者使用試劑盒提取模板 DNA或加大模板的用量 ? 重新設計引物 （避免鏈間二聚體和鏈內二級結構） 或者換一管新引物 ? 降低退火溫度、延長延伸時間 對策 PCR常見問題之二 非特異性擴增 現(xiàn)象： PCR擴增后出現(xiàn)的條帶與預計的大小不一致，或大或小，或者同時出現(xiàn)特異性擴增帶與非特異性擴增帶。 原 因 對策 ? 引物特異性差 ? 模板或引物濃度過高 ? 退火溫度偏低 ? 循環(huán)次數(shù)過多 ? 重新設計引物或者使用巢式
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