cr質(zhì)控及問題分析ppt課件(已修改)
2025-05-17 12:06 本頁面
【正文】 PCR質(zhì)量控制 及常見問題分析、對(duì)策 臨床檢驗(yàn)技術(shù)歷經(jīng)了 一 、 化學(xué)試劑檢驗(yàn) 二 、 酶促生化檢驗(yàn) 三 、 抗原 抗體免疫反應(yīng) 等三個(gè)主要技術(shù)階段 四 、 近年來人類基因組計(jì)劃的完成也推動(dòng)了臨床檢驗(yàn)進(jìn)入 基因檢測(cè) 分子診斷 時(shí)代 酶免 + 快速診斷 ,55%20%生化檢測(cè) , 10 %分子檢測(cè) 05 年10% ， 10 年增至20% ，并不斷取代酶免檢測(cè)酶免+快速診斷血糖檢測(cè)生化檢測(cè)分子檢測(cè)血糖 檢測(cè) 一 ? PCR技術(shù) 最根本特征 二 ? PCR系統(tǒng)外的質(zhì)量控制 三 ? PCR體系內(nèi)的常見問題 、 原因分析及對(duì)策 : 靶 A+試劑 B 信號(hào) C, 均為信號(hào)相加模式 。 : 1,2,4,8230(109) 2n 靶分子 指數(shù)增加 模式 。 PCR極高擴(kuò)增放大倍數(shù)亦帶來非特異性過度放大 ! 1. 硬件建設(shè) : 2. 軟件控制 : 標(biāo)準(zhǔn)操作 SOP, 人員操作培訓(xùn) ,質(zhì)量追蹤體系。 分室 /分區(qū)實(shí)驗(yàn)室 , 安全柜 ,儀器 ,螺蓋管 /膠膜 96孔板 , PCR反應(yīng)液加礦物油封閉 ,UDG酶消除氣霧膠。 PCR體系 問題、原因分析及其解決方案 提高 PCR反應(yīng)特異性的策略 臨床 PCR檢測(cè)的常見問題 實(shí)時(shí)熒光 PCR定量 檢測(cè)的 關(guān)鍵 問題 PCR體系內(nèi)的常見問題、原因分析及其對(duì)策 PCR標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系 ? DNA模板 ? 引物 ? 反應(yīng)緩沖液 ? Mg 2＋ 濃度 ? dNTPs ? dH2O ? 耐熱聚合酶 反應(yīng)體系對(duì) PCR擴(kuò)增的影響 DNA模板 純 度 蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)會(huì)抑制 PCR反應(yīng) 完整性 模板降解會(huì)導(dǎo)致 PCR擴(kuò)增無產(chǎn)物 濃 度 加量過多導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增增加 引 物 特異性 長(zhǎng)度適當(dāng)、避免二級(jí)結(jié)構(gòu)和二聚
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