cr引物設(shè)計(jì)及相關(guān)軟件使用(已修改)
2025-01-24 07:49 本頁面
【正文】 PCR引物設(shè)計(jì)及相關(guān)軟件使用 重慶大學(xué)生物工程學(xué)院 楊應(yīng)斌 主要內(nèi)容 ?背景 ?PCR引物設(shè)計(jì)原則 ?常用 PCR引物設(shè)計(jì)軟件 ?Primer Premier 介紹 ?Oligo 介紹 ?在線 Primer3 介紹 PCR 聚合酶鏈反應(yīng) (Polymerase Chain Reaction ,PCR)是 80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究的目的基因或某一 DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬乃至百萬倍 ,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的 DNA供分析研究和檢測(cè)鑒定。 PCR ?引物設(shè)計(jì)是 PCR 技術(shù)中至關(guān)重要的一環(huán)。使用不合適的 PCR 引物容易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗：表現(xiàn)為擴(kuò)增出目的帶之外的多條帶（如形成引物二聚體帶），不出帶或出帶很弱，等等?，F(xiàn)在 PCR 引物設(shè)計(jì)大都通過計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行?？梢灾苯犹峤荒０逍蛄械教囟ňW(wǎng)頁，得到設(shè)計(jì)好的引物，也可以在本地計(jì)算機(jī)上運(yùn)行引物設(shè)計(jì)專業(yè)軟件。 引物設(shè)計(jì)的原則 ?引物與模板的序列要緊密互補(bǔ) ?引物與引物之間避免形成穩(wěn)定的二聚體或發(fā)夾結(jié)構(gòu) ?引物不能在模板的非目的位點(diǎn)引發(fā) DNA 聚合反應(yīng) (即錯(cuò)配 )。 影響因素 ?如引物長(zhǎng)度（ primer length），產(chǎn)物長(zhǎng)度（ product length） ?序列 Tm 值 (melting temperature) ?引物與模板形成雙鏈的穩(wěn)定性 (internal stability, 用 ?G 值反映 )，形成引物二聚體 (primer dimer)及發(fā)夾結(jié)構(gòu)（ duplex formation and hai
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