微生物學(xué)目的與要求內(nèi)容-文庫吧資料
2025-04-13 03:30本頁面
【正文】 ml，搖勻后放室溫靜止45分鐘，觀察結(jié)果，并確定血（球）凝（集）效價。第10孔不加尿囊液作為對照。 2．將尿囊液在試管中作1∶5稀釋。 （一）血凝效價的滴定【材料】 收獲的尿囊液（病毒懸液）、32孔有機(jī)玻璃板。五、血凝抑制試驗 血凝抑制試驗系利用血凝素特異性抗體與病毒表面相應(yīng)血凝素相互作用，使病毒血凝現(xiàn)象抑制的試驗。4．取出細(xì)胞在低倍顯微鏡下觀察，注意種毒與對照二管的細(xì)胞形態(tài)，排列等。2．，細(xì)胞瓶放平，使其接觸整個細(xì)胞層，置37℃作用1小時，使病毒吸附到細(xì)胞上。（三） 細(xì)胞培養(yǎng)接種病毒的方法及病變觀察（示教）【材料】單層細(xì)胞培養(yǎng)管、營養(yǎng)液、Hanks溶液、無菌毛細(xì)滴管和腺病毒稀釋液。4．將胰蛋白酶倒掉，再加入原量的生長液，用10毫升吸管吹打分散細(xì)胞。2．％胰蛋白酶，37℃孵育1分鐘?！静牧稀繂螌蛹?xì)胞培養(yǎng)瓶，營養(yǎng)液，％胰蛋白酶溶液，無菌吸管，無菌細(xì)胞瓶。HeLa細(xì)胞來自子宮頸癌，Hep－2細(xì)胞來自喉癌，而KB細(xì)胞來自上腭癌。HeLa細(xì)胞對脊髓灰質(zhì)炎三型病毒，腺病毒及大多數(shù)實(shí)驗室適應(yīng)的ECHO病毒都敏感。有一些傳代細(xì)胞對病毒敏感范圍較廣，曾被利用作病毒的分離和鑒定。（二） 傳代細(xì)胞培養(yǎng)法從人及動物組織，特別是腫瘤組織，經(jīng)過多次傳代可建立傳代細(xì)胞系。4．每一細(xì)胞培養(yǎng)管，注入細(xì)胞懸液1毫升，蓋好瓶塞，并將瓶略加搖動，橫臥于有槽木架上，使細(xì)胞均勻平鋪于管壁。由于胰酶的作用可使大量細(xì)胞游離，液體變混。依同法再洗滌2次，將血球充分洗去。【方法】1．用碘酒消毒雞胚蛋氣室外殼，并將它直立于蛋架上，以鑷子將雞胚取出放入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，去頭爪及內(nèi)臟。人類病毒，用人或猴的組織細(xì)胞較敏感，但這不是絕對的，如地鼠腎細(xì)胞較人腎細(xì)胞對流行性乙型腦炎病毒敏感。細(xì)胞的選擇主要依據(jù)組織細(xì)胞對病毒的敏感性。細(xì)胞培養(yǎng)法多應(yīng)用于病毒的分離培養(yǎng)，進(jìn)行血清中和試驗及制造疫苗和抗原等方面。 羊膜腔接種方法適用于一些呼吸道病毒，如流感病毒、副流感病毒及流行性腮腺炎病毒等的分離。 7．冰箱取出雞胚，碘酒消毒雞蛋氣室端，撕去膠布并將蛋殼窗口擴(kuò)大，用小鑷子撕破卵膜及絨毛尿囊膜，然后用毛細(xì)管吸出尿囊液棄去，尿囊液吸完后，左手持鑷子鑷住羊膜腔，右手以毛細(xì)吸管插入羊膜腔吸取羊水，一般羊水可吸出一毫升左右。 6．自注射后次日起逐日檢查雞胚的生活情況，2日以內(nèi)死亡者多為非特異性損傷而致死；2日后死亡者視為特異性死亡，流感或副流感病毒10－3稀釋注射時，一般不引起死亡。用過的注射器煮沸消毒處理。 4．用無菌1毫升注射器抽取少許流感病毒液體，將雞蛋直立于照明燈或檢蛋燈上，針頭自窗口對著雞胚直下，穿過絨毛尿囊膜，羊膜腔、推動注射器，～，針頭刺入時注意勿傷及雞胚本身，最好從小雞的頸部空隙中插入。 2．接種前檢查雞胚生活情況，并用鉛筆畫出天然氣室和胚胎的位置，然后用磨蛋器沿天然氣室的邊緣和胚胎位置近處，鋸一方形小窗（每邊約1厘米許，如圖103）。絨毛尿囊膜羊水卵白卵黃囊尿囊液圖102 雞胚絨毛尿囊膜上接種（三）羊膜腔接種法（錄像）【材料】副流感病毒10－3稀釋液、9～10日齡雞胚、滅菌液體石蠟、其余同《尿囊腔接種法》。8．左手用小鑷子鑷起絨毛尿囊膜，右手用小剪順卵殼四周剪下絨毛尿囊膜放入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，并用無菌生理鹽水洗滌1～2次，再將膜張開，膜上牛痘斑就看得更為清楚。6．孵育于37℃溫箱，每日觀察生活情況，接種10－3稀釋的牛痘苗后的雞胚一般不死亡，但也可能在3天之后發(fā)生死亡，如發(fā)現(xiàn)死亡則立即放入普通冰箱，如不死亡則培養(yǎng)4～5日后放入普通冰箱，等待觀察檢查。5．用小鑷子通過火焰滅菌，稍待冷卻后將三角形窗口的卵膜撕去、暫時蓋以無菌培養(yǎng)皿防止污染，然后用消毒注射器吸取牛痘苗懸液（10－3稀釋液，內(nèi)加適量的鏈霉素及青霉素），揭去培養(yǎng)皿，～，注畢后窗口用膠布封口，封口前膠布用碘酒消毒，并通過火焰，燒去余碘。角度自上往下壓迫卵膜一個小口，這樣不致?lián)p傷絨毛尿囊膜。注意：已磨好之雞胚必須于1～2小時內(nèi)接種，否則絨毛尿囊膜易與卵殼粘著。【方法】1．選用10～13日齡雞胚，在照蛋燈上照視觀察是否活胚蛋，用鉛筆劃下絨毛尿囊膜發(fā)育的界限。尿囊接種法適用于某些呼吸道病毒，如流感病毒、副流感病毒、新城雞瘟病毒等的培養(yǎng)，惟分離培養(yǎng)不如羊膜腔接種法陽性率高。 7．收獲尿囊液之前取出雞胚，用碘酒消毒氣室端，并用鑷子擊破氣室端卵殼，沿氣室邊緣小心打開一大缺口，然后用小鑷子撕去卵膜及撕破絨毛尿囊膜，最后用毛細(xì)管吸取尿囊液，一般可吸得4～5毫升。 6．注射后次日，逐日觀察雞胚生活情況，孵育48～72小時后移入4℃冰箱。封口前膠布用碘酒消毒，并通過火焰燒去余碘。交角，～，～（圖101）。 3．用大頭針通過火焰消毒后刺穿氣室端所開小孔的卵膜，這樣可避免在注射時液體回流出來。絨毛尿囊膜區(qū)血管豐富，在照視時呈現(xiàn)紅色，幾乎占據(jù)雞蛋的二分之一。 【方法】 1. 選用10～12日齡雞胚，在照蛋燈上照視觀察雞胚是否存活，根據(jù)如下：①小血管是否清晰；②胚胎是否活動，觀察小雞的眼睛黑點(diǎn)是否移動；③蛋白一邊和胎盤一邊是否界限分明，蛋白一邊較亮，胎盤一邊暗紅色，如果胎盤一邊發(fā)黑或蒼白都表示胚蛋已死亡。根據(jù)不同病毒和不同目的采用合適的接種方法。 雞胚和實(shí)驗動物一樣，為一整體動物，有神經(jīng)血管的分布及臟器的構(gòu)造；雞胚的組織分化程度低，病毒易于繁殖，感染了病毒的膜結(jié)構(gòu)和液體
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