【正文】 室的邊緣和胚胎位置近處，鋸一方形小窗（每邊約1厘米許，如圖103）。尿囊接種法適用于某些呼吸道病毒，如流感病毒、副流感病毒、新城雞瘟病毒等的培養(yǎng)，惟分離培養(yǎng)不如羊膜腔接種法陽性率高。根據(jù)不同病毒和不同目的采用合適的接種方法。 4. 小白鼠慢慢蘇醒，在飼養(yǎng)盒中逐日開始發(fā)病，發(fā)病的癥狀常為毛聳、咳嗽、不食、甚至死亡。在病毒學(xué)研究中，動(dòng)物接種時(shí)為避免動(dòng)物本身可能帶有病毒，多采用實(shí)驗(yàn)室自己繁殖的動(dòng)物?！痉椒ā浚ㄒ唬┎《镜碾婄R照片（示教） 觀察腺病毒、皰疹病毒的電鏡照片，注意其形態(tài)結(jié)構(gòu)、大小、排列、及其包膜的形成。左手握小瓶，右手抓住小白鼠，將其頭部塞入瓶口，進(jìn)行全身麻醉。動(dòng)物一般在3～4天后開始發(fā)病，食欲減退，活動(dòng)遲鈍，毛聳，震顫，慢慢發(fā)展為麻痹，癱瘓而死亡。用過的注射器用煮沸法消毒，雞胚放入35～37℃培養(yǎng)。7．將感染病毒的雞胚自冰箱中取出，用碘酒消毒人工氣室面，然后用鑷子撕去膠布并將卵殼的三角形窗口擴(kuò)大，以便剪取絨毛膜，此時(shí)在明亮處可清楚地看到牛痘斑，呈白色點(diǎn)狀，有時(shí)融合成一堆或一片。 卵黃囊氣室卵白羊水尿囊液圖 103羊膜腔接種法四、病毒細(xì)胞培養(yǎng)法及病變觀察（錄像）細(xì)胞培養(yǎng)法是目前培養(yǎng)病毒應(yīng)用最廣的一種培養(yǎng)方法，其優(yōu)點(diǎn)是（1）經(jīng)濟(jì)適用，結(jié)果正確且敏感；（2）較實(shí)驗(yàn)動(dòng)物易于控制。這種細(xì)胞能無限地傳代，但并不是所有的組織細(xì)胞都能建立傳代細(xì)胞。3．取出單層細(xì)胞瓶，蓋緊后置37℃孵箱中培養(yǎng)1～2天。若1個(gè)血凝單位為1∶640，則4個(gè)血凝單位為1∶因此殼和殼膜不是簡(jiǎn)單的覆蓋，而是本身具有維持內(nèi)部生命的功能。 【方法】 病人急性期的漱口液 （抗生素處理） 活雞胚培養(yǎng)（羊膜腔接種） 孵育35℃ 72小時(shí) 收獲羊水進(jìn)行血凝滴定 （＋） （－） 血凝抑制試驗(yàn)與 盲傳雞胚，方法同上，如又為 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)定型 陰性則須再盲傳一次，一共三次 ，仍為陰性則報(bào)告陰性 （一）分離①標(biāo)本處理：采集之標(biāo)本保存于冰壺內(nèi)，及時(shí)進(jìn)行分離，如不能進(jìn)行分離則需保存于－20℃以下，漱口液經(jīng)低速沉淀后，吸取上清液1毫升，～。H2O（） H2O 50ml鄰苯二胺（臨用時(shí)加） 60mg30％H2O2（臨用時(shí)加） 15ml⑤終止液（2M硫酸） 濃硫酸 22ml 蒸餾水 188ml寧可累死在路上，也不能閑死在家里！寧可去碰壁，也不能面壁。 3．ELISA試劑：①包被液和稀釋液， Na2CO3－NaHCO3緩沖液Na2CO3 NaHCO3 加蒸餾水至1000ml 該液應(yīng)保存于4℃，一次配制應(yīng)用期不宜超過10天。 原液甲 1份 原液乙 1份 雙蒸水 18份以9磅10分鐘滅菌，此溶液存于4℃冰箱，可使用1個(gè)月。未受精之雞蛋于4日后僅見模糊卵黃黑影，無雞胚跡象?？? 號(hào)12345678910生 理 鹽 水（ml）尿 囊 液（ml）+ *++++++++病 毒 稀 釋 度1∶1 01∶2 01∶4 01∶8 01∶1601∶3201∶6401∶12801∶2560對(duì) 照補(bǔ) 充 液（ml）（生 理 鹽 水）各 ％ 雞 紅 細(xì) 胞懸 液（ml ）各 *為1∶5稀釋尿囊液 結(jié)果觀察：凡出現(xiàn)凝集者，紅細(xì)胞平鋪孔底，呈倒張的傘狀，邊緣有卷起的趨向。5．用生長(zhǎng)液按原量3～4倍稀釋，即一瓶細(xì)胞能傳3～4瓶。經(jīng)四層紗布過濾后的細(xì)胞懸液，低速離心沉淀（1000轉(zhuǎn)/分以內(nèi)）5分鐘，吸取上清液，沉淀物加入適量營(yíng)養(yǎng)液，用白細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行計(jì)數(shù)，使成每毫升含50～80萬細(xì)胞懸液以作單層細(xì)胞培養(yǎng)。收獲病毒之前將雞胚移入普通冰箱18～24小時(shí)，將雞胚凍死，以減少收獲時(shí)的出血。4．立即用橡皮乳頭在天然氣室一端小孔吸氣2～3次，目的將天然氣室的空氣吸去，而上面所開的洞口進(jìn)入空氣，形成一個(gè)人工氣室，可在照蛋燈上照視一下，看天然氣室是否消失，如未消失則尚需再吸氣數(shù)次（圖102）。 4．將雞胚橫臥于蛋架上，用無菌1毫升注射器抽取病毒液體，針頭于卵殼成30176。 2. 取出小白鼠，左手將小白鼠固定，固定時(shí)用大拇指和食指捏住小白鼠的頭部，左手手掌輕輕按住小白鼠的體部。 注意：推注時(shí)遇阻力且皮下隆起發(fā)白時(shí)，表示針頭不在血管內(nèi)應(yīng)拔出重新進(jìn)針；如針頭在血管內(nèi)，推注時(shí)不感阻力，且可看到血管中血液由