微生物學(xué)目的與要求內(nèi)容-全文預(yù)覽
【正文】 第7孔。此時的稀釋度即為1個血凝單位。1． 自第10孔起，％ ml，搖勻后放室溫靜止45分鐘，觀察結(jié)果，并確定血（球）凝（集）效價。 2．將尿囊液在試管中作1∶5稀釋。五、血凝抑制試驗 血凝抑制試驗系利用血凝素特異性抗體與病毒表面相應(yīng)血凝素相互作用，使病毒血凝現(xiàn)象抑制的試驗。2．，細(xì)胞瓶放平，使其接觸整個細(xì)胞層，置37℃作用1小時，使病毒吸附到細(xì)胞上。4．將胰蛋白酶倒掉，再加入原量的生長液，用10毫升吸管吹打分散細(xì)胞?！静牧稀繂螌蛹?xì)胞培養(yǎng)瓶，營養(yǎng)液，％胰蛋白酶溶液，無菌吸管，無菌細(xì)胞瓶。HeLa細(xì)胞對脊髓灰質(zhì)炎三型病毒，腺病毒及大多數(shù)實驗室適應(yīng)的ECHO病毒都敏感。（二） 傳代細(xì)胞培養(yǎng)法從人及動物組織，特別是腫瘤組織，經(jīng)過多次傳代可建立傳代細(xì)胞系。由于胰酶的作用可使大量細(xì)胞游離，液體變混?！痉椒ā?．用碘酒消毒雞胚蛋氣室外殼，并將它直立于蛋架上，以鑷子將雞胚取出放入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，去頭爪及內(nèi)臟。細(xì)胞的選擇主要依據(jù)組織細(xì)胞對病毒的敏感性。 羊膜腔接種方法適用于一些呼吸道病毒，如流感病毒、副流感病毒及流行性腮腺炎病毒等的分離。 6．自注射后次日起逐日檢查雞胚的生活情況，2日以內(nèi)死亡者多為非特異性損傷而致死；2日后死亡者視為特異性死亡，流感或副流感病毒10－3稀釋注射時，一般不引起死亡。 4．用無菌1毫升注射器抽取少許流感病毒液體，將雞蛋直立于照明燈或檢蛋燈上，針頭自窗口對著雞胚直下，穿過絨毛尿囊膜，羊膜腔、推動注射器，～，針頭刺入時注意勿傷及雞胚本身，最好從小雞的頸部空隙中插入。絨毛尿囊膜羊水卵白卵黃囊尿囊液圖102 雞胚絨毛尿囊膜上接種（三）羊膜腔接種法（錄像）【材料】副流感病毒10－3稀釋液、9～10日齡雞胚、滅菌液體石蠟、其余同《尿囊腔接種法》。6．孵育于37℃溫箱，每日觀察生活情況，接種10－3稀釋的牛痘苗后的雞胚一般不死亡，但也可能在3天之后發(fā)生死亡，如發(fā)現(xiàn)死亡則立即放入普通冰箱，如不死亡則培養(yǎng)4～5日后放入普通冰箱，等待觀察檢查。角度自上往下壓迫卵膜一個小口，這樣不致?lián)p傷絨毛尿囊膜。【方法】1．選用10～13日齡雞胚，在照蛋燈上照視觀察是否活胚蛋，用鉛筆劃下絨毛尿囊膜發(fā)育的界限。 7．收獲尿囊液之前取出雞胚，用碘酒消毒氣室端，并用鑷子擊破氣室端卵殼，沿氣室邊緣小心打開一大缺口，然后用小鑷子撕去卵膜及撕破絨毛尿囊膜，最后用毛細(xì)管吸取尿囊液，一般可吸得4～5毫升。封口前膠布用碘酒消毒，并通過火焰燒去余碘。 3．用大頭針通過火焰消毒后刺穿氣室端所開小孔的卵膜，這樣可避免在注射時液體回流出來。 【方法】 1. 選用10～12日齡雞胚，在照蛋燈上照視觀察雞胚是否存活，根據(jù)如下：①小血管是否清晰；②胚胎是否活動，觀察小雞的眼睛黑點是否移動；③蛋白一邊和胎盤一邊是否界限分明，蛋白一邊較亮，胎盤一邊暗紅色，如果胎盤一邊發(fā)黑或蒼白都表示胚蛋已死亡。 雞胚和實驗動物一樣，為一整體動物，有神經(jīng)血管的分布及臟器的構(gòu)造；雞胚的組織分化程度低，病毒易于繁殖，感染了病毒的膜結(jié)構(gòu)和液體中，含有大量病毒；雞胚來源充足，操作簡單、通常本身是無菌的，對接種的病毒不產(chǎn)生抗體為其優(yōu)點，但除產(chǎn)生痘皰的病毒及引起雞胚死亡的病毒外，通常不產(chǎn)生特異性的感染指征，必須利用第二個試驗系統(tǒng)來測定病毒的增殖。 5. 注射完畢，將用過得注射器放入煮針鍋內(nèi)煮沸消毒。 【方法】 1. ，去除注射器內(nèi)的氣泡。 （三）小白鼠腦內(nèi)接種（錄像）【材料】腦炎病毒（小白鼠腦脊髓炎病毒）懸液。 3. 用左手將小白鼠握在手掌中，大拇指及食指抓住小白鼠耳部使其頭部朝前并呈仰臥位置，另一手取事先吸有病毒懸液的吸管，慢慢滴出一點于滴管口而不使其自然掉落，呈懸滴狀。 【方法】 1. 首先將沾有乙醚的棉球放入一清潔小玻瓶內(nèi)。右手持注射器，于彎處進(jìn)針靜脈。至于接種的途徑應(yīng)根據(jù)病毒的嗜性決定，例如腦炎病毒以腦內(nèi)注射最敏感。二、 病毒動物接種法 實驗動物在病毒學(xué)研究中有四方面用途：①分離鑒定病毒，如乙腦病毒；②連續(xù)傳代通過，以減弱有毒株對人的致病力，如狂犬病病毒；③制備抗血清；④病毒致病機(jī)理的研究。病毒感染細(xì)胞所產(chǎn)生的包涵體，其特征基本是固定的，故對病毒性疾病的診斷具有一定價值。. . . . .實驗十 病毒的形態(tài)學(xué)診斷、培養(yǎng)方法和血清學(xué)試驗?zāi)? 的（一）觀察病毒包涵體，并掌握其診斷意義。（四）掌握病毒學(xué)中主要血清學(xué)反應(yīng)的原理（五）熟悉病毒血凝抑制試驗的測定過程內(nèi) 容（一）病毒的形態(tài)學(xué)診斷1. 病毒的電鏡照片（示教）2. 狂犬病毒包涵體（示教）3. 麻疹病毒包涵體（示教）（二）病毒的培養(yǎng)法（錄像） 1. 病毒的動物接種法 2. 病毒雞胚培養(yǎng)法 3. 病毒的組織培養(yǎng)法 （三）血凝抑制試驗（操作）一、 病毒的形態(tài)學(xué)診斷 病毒形態(tài)學(xué)研究方法可分為兩種：一種是應(yīng)用電子顯微鏡技術(shù)，觀察其大小，形態(tài)及排列特征，以幫助診斷；另一種是應(yīng)用光學(xué)顯微鏡通過涂片染色或切片染色，觀察包涵體。 （三）麻疹病毒包涵體（示教） 用高倍鏡或油鏡觀察經(jīng)麻疹病毒培養(yǎng)后，HE染色的人胚或羊膜細(xì)胞標(biāo)本片，注意包涵
化學(xué)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1