微生物學(xué)目的與要求內(nèi)容-全文預(yù)覽
【正文】 第7孔。此時(shí)的稀釋度即為1個(gè)血凝單位。1． 自第10孔起，％ ml，搖勻后放室溫靜止45分鐘，觀察結(jié)果，并確定血（球）凝（集）效價(jià)。 2．將尿囊液在試管中作1∶5稀釋。五、血凝抑制試驗(yàn) 血凝抑制試驗(yàn)系利用血凝素特異性抗體與病毒表面相應(yīng)血凝素相互作用，使病毒血凝現(xiàn)象抑制的試驗(yàn)。2．，細(xì)胞瓶放平，使其接觸整個(gè)細(xì)胞層，置37℃作用1小時(shí)，使病毒吸附到細(xì)胞上。4．將胰蛋白酶倒掉，再加入原量的生長(zhǎng)液，用10毫升吸管吹打分散細(xì)胞?！静牧稀繂螌蛹?xì)胞培養(yǎng)瓶，營(yíng)養(yǎng)液，％胰蛋白酶溶液，無(wú)菌吸管，無(wú)菌細(xì)胞瓶。HeLa細(xì)胞對(duì)脊髓灰質(zhì)炎三型病毒，腺病毒及大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)的ECHO病毒都敏感。（二） 傳代細(xì)胞培養(yǎng)法從人及動(dòng)物組織，特別是腫瘤組織，經(jīng)過(guò)多次傳代可建立傳代細(xì)胞系。由于胰酶的作用可使大量細(xì)胞游離，液體變混?！痉椒ā?．用碘酒消毒雞胚蛋氣室外殼，并將它直立于蛋架上，以鑷子將雞胚取出放入無(wú)菌培養(yǎng)皿內(nèi)，去頭爪及內(nèi)臟。細(xì)胞的選擇主要依據(jù)組織細(xì)胞對(duì)病毒的敏感性。 羊膜腔接種方法適用于一些呼吸道病毒，如流感病毒、副流感病毒及流行性腮腺炎病毒等的分離。 6．自注射后次日起逐日檢查雞胚的生活情況，2日以內(nèi)死亡者多為非特異性損傷而致死；2日后死亡者視為特異性死亡，流感或副流感病毒10－3稀釋注射時(shí)，一般不引起死亡。 4．用無(wú)菌1毫升注射器抽取少許流感病毒液體，將雞蛋直立于照明燈或檢蛋燈上，針頭自窗口對(duì)著雞胚直下，穿過(guò)絨毛尿囊膜，羊膜腔、推動(dòng)注射器，～，針頭刺入時(shí)注意勿傷及雞胚本身，最好從小雞的頸部空隙中插入。絨毛尿囊膜羊水卵白卵黃囊尿囊液圖102 雞胚絨毛尿囊膜上接種（三）羊膜腔接種法（錄像）【材料】副流感病毒10－3稀釋液、9～10日齡雞胚、滅菌液體石蠟、其余同《尿囊腔接種法》。6．孵育于37℃溫箱，每日觀察生活情況，接種10－3稀釋的牛痘苗后的雞胚一般不死亡，但也可能在3天之后發(fā)生死亡，如發(fā)現(xiàn)死亡則立即放入普通冰箱，如不死亡則培養(yǎng)4～5日后放入普通冰箱，等待觀察檢查。角度自上往下壓迫卵膜一個(gè)小口，這樣不致?lián)p傷絨毛尿囊膜?！痉椒ā?．選用10～13日齡雞胚，在照蛋燈上照視觀察是否活胚蛋，用鉛筆劃下絨毛尿囊膜發(fā)育的界限。 7．收獲尿囊液之前取出雞胚，用碘酒消毒氣室端，并用鑷子擊破氣室端卵殼，沿氣室邊緣小心打開(kāi)一大缺口，然后用小鑷子撕去卵膜及撕破絨毛尿囊膜，最后用毛細(xì)管吸取尿囊液，一般可吸得4～5毫升。封口前膠布用碘酒消毒，并通過(guò)火焰燒去余碘。 3．用大頭針通過(guò)火焰消毒后刺穿氣室端所開(kāi)小孔的卵膜，這樣可避免在注射時(shí)液體回流出來(lái)。 【方法】 1. 選用10～12日齡雞胚，在照蛋燈上照視觀察雞胚是否存活，根據(jù)如下：①小血管是否清晰；②胚胎是否活動(dòng)，觀察小雞的眼睛黑點(diǎn)是否移動(dòng)；③蛋白一邊和胎盤(pán)一邊是否界限分明，蛋白一邊較亮，胎盤(pán)一邊暗紅色，如果胎盤(pán)一邊發(fā)黑或蒼白都表示胚蛋已死亡。 雞胚和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一樣，為一整體動(dòng)物，有神經(jīng)血管的分布及臟器的構(gòu)造；雞胚的組織分化程度低，病毒易于繁殖，感染了病毒的膜結(jié)構(gòu)和液體中，含有大量病毒；雞胚來(lái)源充足，操作簡(jiǎn)單、通常本身是無(wú)菌的，對(duì)接種的病毒不產(chǎn)生抗體為其優(yōu)點(diǎn)，但除產(chǎn)生痘皰的病毒及引起雞胚死亡的病毒外，通常不產(chǎn)生特異性的感染指征，必須利用第二個(gè)試驗(yàn)系統(tǒng)來(lái)測(cè)定病毒的增殖。 5. 注射完畢，將用過(guò)得注射器放入煮針鍋內(nèi)煮沸消毒。 【方法】 1. ，去除注射器內(nèi)的氣泡。 （三）小白鼠腦內(nèi)接種（錄像）【材料】腦炎病毒（小白鼠腦脊髓炎病毒）懸液。 3. 用左手將小白鼠握在手掌中，大拇指及食指抓住小白鼠耳部使其頭部朝前并呈仰臥位置，另一手取事先吸有病毒懸液的吸管，慢慢滴出一點(diǎn)于滴管口而不使其自然掉落，呈懸滴狀。 【方法】 1. 首先將沾有乙醚的棉球放入一清潔小玻瓶?jī)?nèi)。右手持注射器，于彎處進(jìn)針靜脈。至于接種的途徑應(yīng)根據(jù)病毒的嗜性決定，例如腦炎病毒以腦內(nèi)注射最敏感。二、 病毒動(dòng)物接種法 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在病毒學(xué)研究中有四方面用途：①分離鑒定病毒，如乙腦病毒；②連續(xù)傳代通過(guò)，以減弱有毒株對(duì)人的致病力，如狂犬病病毒；③制備抗血清；④病毒致病機(jī)理的研究。病毒感染細(xì)胞所產(chǎn)生的包涵體，其特征基本是固定的，故對(duì)病毒性疾病的診斷具有一定價(jià)值。. . . . .實(shí)驗(yàn)十 病毒的形態(tài)學(xué)診斷、培養(yǎng)方法和血清學(xué)試驗(yàn)?zāi)? 的（一）觀察病毒包涵體，并掌握其診斷意義。（四）掌握病毒學(xué)中主要血清學(xué)反應(yīng)的原理（五）熟悉病毒血凝抑制試驗(yàn)的測(cè)定過(guò)程內(nèi) 容（一）病毒的形態(tài)學(xué)診斷1. 病毒的電鏡照片（示教）2. 狂犬病毒包涵體（示教）3. 麻疹病毒包涵體（示教）（二）病毒的培養(yǎng)法（錄像） 1. 病毒的動(dòng)物接種法 2. 病毒雞胚培養(yǎng)法 3. 病毒的組織培養(yǎng)法 （三）血凝抑制試驗(yàn)（操作）一、 病毒的形態(tài)學(xué)診斷 病毒形態(tài)學(xué)研究方法可分為兩種：一種是應(yīng)用電子顯微鏡技術(shù)，觀察其大小，形態(tài)及排列特征，以幫助診斷；另一種是應(yīng)用光學(xué)顯微鏡通過(guò)涂片染色或切片染色，觀察包涵體。 （三）麻疹病毒包涵體（示教） 用高倍鏡或油鏡觀察經(jīng)麻疹病毒培養(yǎng)后，HE染色的人胚或羊膜細(xì)胞標(biāo)本片，注意包涵
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