微生物學(xué)目的與要求內(nèi)容(已改無錯(cuò)字)
2023-05-08 03:30:10 本頁(yè)面
【正文】 然后吸取1∶ ml加入到第1孔，混勻后（吹吸3次）， ml移入第2孔，如此對(duì)倍稀釋直至第9孔， ml，棄入消毒缸內(nèi)。第10孔不加尿囊液作為對(duì)照。 3．自第10孔起， ml。1． 自第10孔起，％ ml，搖勻后放室溫靜止45分鐘，觀察結(jié)果，并確定血（球）凝（集）效價(jià)。孔 號(hào)12345678910生 理 鹽 水（ml）尿 囊 液（ml）+ *++++++++病 毒 稀 釋 度1∶1 01∶2 01∶4 01∶8 01∶1601∶3201∶6401∶12801∶2560對(duì) 照補(bǔ) 充 液（ml）（生 理 鹽 水）各 ％ 雞 紅 細(xì) 胞懸 液（ml ）各 *為1∶5稀釋尿囊液 結(jié)果觀察：凡出現(xiàn)凝集者，紅細(xì)胞平鋪孔底，呈倒張的傘狀，邊緣有卷起的趨向。凝集特別顯著者為＋＋＋＋，次之為＋＋＋，凝集清楚可見者為＋＋，稍呈凝集者為＋；陰性者血球沉于孔底中心，呈鈕扣狀。 血凝效價(jià)：指呈現(xiàn)＋＋凝集時(shí)病毒的最高稀釋度。此時(shí)的稀釋度即為1個(gè)血凝單位。若1個(gè)血凝單位為1∶640，則4個(gè)血凝單位為1∶ （二）血凝抑制試驗(yàn) 【材料】 4個(gè)血凝單位的病毒液，1∶5稀釋的抗血清，32孔有機(jī)玻璃板， ml移液器，移液頭，％雞紅細(xì)胞懸液，生理鹽水 【方法】 按下表進(jìn)行，其操作程序?yàn)椋?1．將有機(jī)玻璃板孔從1～10號(hào)進(jìn)行編號(hào)，從第一孔起直至第9孔。 2．于第1孔和第8孔中各加入1∶。，如此作對(duì)倍稀釋直至第7孔。第8孔為血清對(duì)照。 3． 4個(gè)血凝單位的病毒液。 4．稍加振搖后，％，室溫靜置45分鐘，觀察結(jié)果。 孔 號(hào)1234567血 清 對(duì) 照病 毒 對(duì) 照紅 細(xì) 胞對(duì) 照生 理 鹽 水（ml）抗 血 清 （ml）＋ *＋＋＋＋＋＋ ＋ * 血 清 稀 釋 度1∶101∶201∶401∶801∶16 01∶3 201∶6404 個(gè) 血 凝 單 位 病 毒（ml）各 ％ 雞 紅 細(xì) 胞 懸 液（ml）各 *為1∶5稀釋的抗血清結(jié)果：紅 細(xì) 胞 對(duì) 照 孔 ，血球沉于孔底中心，呈鈕扣狀，表明紅細(xì)胞無自凝現(xiàn)象；病毒對(duì)照孔，呈現(xiàn)＋＋＋＋凝集，表明病毒血凝功能正常；血清對(duì)照孔，血球沉于孔底中心，呈鈕扣狀，表明血清中無凝集因子；測(cè)定孔中，如血球沉于孔底中心，呈鈕扣狀，表明血清中有相應(yīng)的血凝抑制抗體，為陽(yáng)性孔；反之凝集者為陰性孔。血凝抑制效價(jià)：呈完全血凝抑制時(shí)的最高血清稀釋度。附錄：附錄：1．雞胚的準(zhǔn)備和發(fā)育過程 病毒的雞胚培養(yǎng)，多采用來亨雞卵，其優(yōu)點(diǎn)為卵殼色白而薄，易于照視，如不能得到，一般家雞卵也可應(yīng)用。孵育溫度通常在38～39℃之間，相對(duì)濕度40～60％。孵育4～5天后即可在檢蛋燈上檢查雞胚受精與否及發(fā)育情況。未受精之雞蛋于4日后僅見模糊卵黃黑影，無雞胚跡象。活的雞胚于4日后即可見清晰之血管小網(wǎng)，中有剛剛發(fā)育之胚胎，自4～5天以后逐日檢查胚胎生活情況，逐日增大之雞胚則可見到清楚之絨毛尿囊膜上的血管及活動(dòng)之胚胎。 受精卵在通過輸卵管時(shí)，已開始分裂，當(dāng)產(chǎn)卵時(shí)已在卵黃中形成細(xì)胞，名為胚點(diǎn)，在適宜溫度下即能繼續(xù)分裂發(fā)育，形成中、外、內(nèi)三胚層，逐步發(fā)育成各種器官。 雞胚的最外層為石灰質(zhì)之卵殼，上有細(xì)孔以行氣體交換，下層為殼膜，很容易與孵殼分開，殼膜的功能是使氣體分子和液體分子在內(nèi)外兩方面進(jìn)行交換，因此在孵育雞胚時(shí)需要一定的濕度和氣流，如果濕度太低，雞胚就容易脫水，引起雞胚死亡，氣流同樣是重要的，孵育時(shí)如空氣不流通，亦可造成雞胚的死亡。因此殼和殼膜不是簡(jiǎn)單的覆蓋，而是本身具有維持內(nèi)部生命的功能。氣室的功能是呼吸和調(diào)節(jié)壓力，殼膜之下為血管豐富的絨毛尿囊膜，外為絨毛膜，系外胚層形成，內(nèi)為尿囊膜，由內(nèi)胚層形成，兩膜結(jié)合之間為中胚層，因此絨毛尿囊膜是尿囊膜在生長(zhǎng)發(fā)育過程中與絨毛膜相連而成，血管較多，起著胚胎呼吸器官的功能，氧氣的交換是在膜的血管內(nèi)通過卵殼孔而進(jìn)行的。雞胚孵育至第3天即出現(xiàn)尿囊，為直腸腹側(cè)部分的膨出物，尿囊腔是胚胎的排泄器官，內(nèi)含尿囊液，初為透明液體，是單純生理鹽水溶液，以后尿囊液中尿酸鹽迅速增加，胚胎發(fā)育到第12～13天，尿囊液開始變得渾濁，若將其冷卻即可見有沉淀物形成，主要是尿酸鹽類。因此，在制備流感病毒抗原時(shí)，通常用鹽水將尿液加以稀釋后放4℃?zhèn)溆茫@樣可減少尿酸鹽的沉淀，尿液量在雞胚發(fā)育的第11至13天最高，平均為6～。 羊膜為胚胎最內(nèi)層包被，系由外胚層組成，羊膜腔盛有羊水，胎體浸泡于其中，羊水在起初是單純的生理鹽水，后來則蛋白質(zhì)含量增加，羊水量平均為1毫升左右。 卵黃囊附著于胚胎，卵黃囊膜系由內(nèi)胚層的細(xì)胞組成，對(duì)培養(yǎng)病毒有重要作用，內(nèi)包有卵黃，為胚胎之養(yǎng)料，卵白位于卵之銳端，為胚胎發(fā)育晚期之養(yǎng)料。 2．Hanks溶液配制，先配成下列甲、乙兩種原液。 原液甲： NaCl 160克 KCl 8克
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