【正文】 12H2O 20g KH2PO4 Tween－20 加蒸餾水至 1000ml③酶標(biāo)羊抗人抗體用洗滌液（不加Tween－20，改加1％兔血清）稀釋。 4．％胰蛋白酶溶液配制 胰酶 Hanks使用液 1000毫升 青霉素 10毫升（最終濃度100單位/毫升） 鏈霉素 10毫升（最終濃度100單位/毫升） 加胰酶和抗生素于Hanks液中，震蕩使其溶解，加壓過濾除菌，分裝，－20℃低溫備用，一瓶最好用一次，不宜反復(fù)凍融。 受精卵在通過輸卵管時(shí)，已開始分裂，當(dāng)產(chǎn)卵時(shí)已在卵黃中形成細(xì)胞，名為胚點(diǎn)，在適宜溫度下即能繼續(xù)分裂發(fā)育，形成中、外、內(nèi)三胚層，逐步發(fā)育成各種器官。 血凝效價(jià)：指呈現(xiàn)＋＋凝集時(shí)病毒的最高稀釋度?！痉椒ā?．取已長成單層細(xì)胞的培養(yǎng)瓶二只，用無菌毛細(xì)滴管吸去管中液體，用Hanks溶液洗二次。置37℃溫箱孵育，一般4小時(shí)，細(xì)胞附著于管壁，48小時(shí)可長成單層，此時(shí)即可調(diào)換營養(yǎng)液，接種病毒。 8．滴定羊水的病毒血凝效價(jià)。用過的注射器煮沸消毒。 5．注射完結(jié)用膠布封口。 4. 右手拿注射器在小白鼠顳部（眼與耳根連線的中點(diǎn)略偏耳朵的方向）刺入，進(jìn)入顱腔，進(jìn)針2～3毫米，不要插得太深，～。（二）小白鼠鼻內(nèi)接種（錄像） 【材料】 小白鼠、流感病毒鼠肺適應(yīng)株病毒懸液、無菌小試管、無菌毛細(xì)管、麻醉用乙醚、棉球及小玻瓶。（四）掌握病毒學(xué)中主要血清學(xué)反應(yīng)的原理（五）熟悉病毒血凝抑制試驗(yàn)的測定過程內(nèi) 容（一）病毒的形態(tài)學(xué)診斷1. 病毒的電鏡照片（示教）2. 狂犬病毒包涵體（示教）3. 麻疹病毒包涵體（示教）（二）病毒的培養(yǎng)法（錄像） 1. 病毒的動(dòng)物接種法 2. 病毒雞胚培養(yǎng)法 3. 病毒的組織培養(yǎng)法 （三）血凝抑制試驗(yàn)（操作）一、 病毒的形態(tài)學(xué)診斷 病毒形態(tài)學(xué)研究方法可分為兩種：一種是應(yīng)用電子顯微鏡技術(shù)，觀察其大小，形態(tài)及排列特征，以幫助診斷；另一種是應(yīng)用光學(xué)顯微鏡通過涂片染色或切片染色，觀察包涵體。至于接種的途徑應(yīng)根據(jù)病毒的嗜性決定，例如腦炎病毒以腦內(nèi)注射最敏感。 （三）小白鼠腦內(nèi)接種（錄像）【材料】腦炎病毒（小白鼠腦脊髓炎病毒）懸液。 【方法】 1. 選用10～12日齡雞胚，在照蛋燈上照視觀察雞胚是否存活，根據(jù)如下：①小血管是否清晰；②胚胎是否活動(dòng)，觀察小雞的眼睛黑點(diǎn)是否移動(dòng)；③蛋白一邊和胎盤一邊是否界限分明，蛋白一邊較亮，胎盤一邊暗紅色，如果胎盤一邊發(fā)黑或蒼白都表示胚蛋已死亡?！痉椒ā?．選用10～13日齡雞胚，在照蛋燈上照視觀察是否活胚蛋，用鉛筆劃下絨毛尿囊膜發(fā)育的界限。 4．用無菌1毫升注射器抽取少許流感病毒液體，將雞蛋直立于照明燈或檢蛋燈上，針頭自窗口對(duì)著雞胚直下，穿過絨毛尿囊膜，羊膜腔、推動(dòng)注射器，～，針頭刺入時(shí)注意勿傷及雞胚本身，最好從小雞的頸部空隙中插入?！痉椒ā?．用碘酒消毒雞胚蛋氣室外殼，并將它直立于蛋架上，以鑷子將雞胚取出放入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，去頭爪及內(nèi)臟?！静牧稀繂螌蛹?xì)胞培養(yǎng)瓶，營養(yǎng)液，％胰蛋白酶溶液，無菌吸管，無菌細(xì)胞瓶。 2．將尿囊液在試管中作1∶5稀釋。 孔 號(hào)1234567血 清 對(duì) 照病 毒 對(duì) 照紅 細(xì) 胞對(duì) 照生 理 鹽 水（ml）抗 血 清 （ml）＋ *＋＋＋＋＋＋ ＋ * 血 清 稀 釋 度1∶101∶201∶401∶801∶16 01∶3 201∶6404 個(gè) 血 凝 單 位 病 毒（ml）各 ％ 雞 紅 細(xì) 胞 懸 液（ml）各 *為1∶5稀釋的抗血清結(jié)果：紅 細(xì) 胞 對(duì) 照 孔 ，血球沉于孔底中心，呈鈕扣狀，表明紅細(xì)胞無自凝現(xiàn)象；病毒對(duì)照孔，呈現(xiàn)＋＋＋＋凝集，表明病毒血凝功能正常；血清對(duì)照孔，血球沉于孔底中心，呈鈕扣狀，表明血清中無凝集因子；測定孔中，如血球沉于孔底中心，呈鈕扣狀，表明血清中有相應(yīng)的血凝抑制抗體，為陽性孔；反之凝集者為陰性孔。 原液甲： NaCl 160克 KCl 8克 加入800毫升雙蒸水 MgSO4（二）鑒定①將已測定過血凝的尿囊液，用已知各亞型血清進(jìn)行抑制試驗(yàn)。拼一個(gè)春夏秋冬！贏一個(gè)無悔人生！早安！—————獻(xiàn)給所有努力的人.學(xué)習(xí)參考。再用眼科小鑷子撕破卵膜及絨毛尿囊膜，以便用毛細(xì)管吸取尿囊液，將尿囊液吸入中號(hào)試管內(nèi)。 卵黃囊附著于胚胎，卵黃囊膜系由內(nèi)胚層的細(xì)胞組成，對(duì)培養(yǎng)病毒有重要作用，內(nèi)包有卵黃，為胚胎之養(yǎng)料，卵白位于卵之銳端，為胚胎發(fā)育晚期之養(yǎng)料。 3． 4個(gè)血凝單位的病毒液。 （一）血凝效價(jià)的滴定【材料】 收獲的尿囊液（病毒懸液）、32孔有機(jī)玻璃板。HeLa細(xì)胞來自子宮頸癌，Hep－2細(xì)胞來自喉癌，而KB細(xì)胞來自上腭癌。人類病毒，用人或猴的組織細(xì)胞較敏感，但這不是絕對(duì)的，如地鼠腎細(xì)胞較人腎細(xì)胞對(duì)流行性乙型腦炎病毒敏感。 2．接種前檢查雞胚生活情況，并用鉛筆畫出天然氣室和胚胎的位置，然后用磨蛋器沿天然氣