微生物學(xué)目的與要求內(nèi)容-閱讀頁
2025-04-22 03:30本頁面
【正文】 ％雞紅細(xì)胞懸液、生理鹽水【方法】 按下表進(jìn)行，其操作程序?yàn)椋?1．將有機(jī)玻璃板孔從1～10號進(jìn)行編號，從第一孔起直至第10孔。然后吸取1∶ ml加入到第1孔，混勻后（吹吸3次）， ml移入第2孔，如此對倍稀釋直至第9孔， ml，棄入消毒缸內(nèi)。 3．自第10孔起， ml?？? 號12345678910生 理 鹽 水（ml）尿 囊 液（ml）+ *++++++++病 毒 稀 釋 度1∶1 01∶2 01∶4 01∶8 01∶1601∶3201∶6401∶12801∶2560對 照補(bǔ) 充 液（ml）（生 理 鹽 水）各 ％ 雞 紅 細(xì) 胞懸 液（ml ）各 *為1∶5稀釋尿囊液 結(jié)果觀察：凡出現(xiàn)凝集者，紅細(xì)胞平鋪孔底，呈倒張的傘狀，邊緣有卷起的趨向。 血凝效價(jià)：指呈現(xiàn)＋＋凝集時(shí)病毒的最高稀釋度。若1個(gè)血凝單位為1∶640，則4個(gè)血凝單位為1∶ 2．于第1孔和第8孔中各加入1∶。第8孔為血清對照。 4．稍加振搖后，％，室溫靜置45分鐘，觀察結(jié)果。血凝抑制效價(jià)：呈完全血凝抑制時(shí)的最高血清稀釋度。孵育溫度通常在38～39℃之間，相對濕度40～60％。未受精之雞蛋于4日后僅見模糊卵黃黑影，無雞胚跡象。 受精卵在通過輸卵管時(shí)，已開始分裂，當(dāng)產(chǎn)卵時(shí)已在卵黃中形成細(xì)胞，名為胚點(diǎn)，在適宜溫度下即能繼續(xù)分裂發(fā)育，形成中、外、內(nèi)三胚層，逐步發(fā)育成各種器官。因此殼和殼膜不是簡單的覆蓋，而是本身具有維持內(nèi)部生命的功能。雞胚孵育至第3天即出現(xiàn)尿囊，為直腸腹側(cè)部分的膨出物，尿囊腔是胚胎的排泄器官，內(nèi)含尿囊液，初為透明液體，是單純生理鹽水溶液，以后尿囊液中尿酸鹽迅速增加，胚胎發(fā)育到第12～13天，尿囊液開始變得渾濁，若將其冷卻即可見有沉淀物形成，主要是尿酸鹽類。 羊膜為胚胎最內(nèi)層包被，系由外胚層組成，羊膜腔盛有羊水，胎體浸泡于其中，羊水在起初是單純的生理鹽水，后來則蛋白質(zhì)含量增加，羊水量平均為1毫升左右。 2．Hanks溶液配制，先配成下列甲、乙兩種原液。7H2O 2克 MgCl2 原液乙： Na2HPO4 原液甲 1份 原液乙 1份 雙蒸水 18份以9磅10分鐘滅菌，此溶液存于4℃冰箱，可使用1個(gè)月。 4．％胰蛋白酶溶液配制 胰酶 Hanks使用液 1000毫升 青霉素 10毫升（最終濃度100單位/毫升） 鏈霉素 10毫升（最終濃度100單位/毫升） 加胰酶和抗生素于Hanks液中，震蕩使其溶解，加壓過濾除菌，分裝，－20℃低溫備用，一瓶最好用一次，不宜反復(fù)凍融。 【方法】 病人急性期的漱口液 （抗生素處理） 活雞胚培養(yǎng)（羊膜腔接種） 孵育35℃ 72小時(shí) 收獲羊水進(jìn)行血凝滴定 （＋） （－） 血凝抑制試驗(yàn)與 盲傳雞胚，方法同上，如又為 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)定型 陰性則須再盲傳一次，一共三次 ，仍為陰性則報(bào)告陰性 （一）分離①標(biāo)本處理：采集之標(biāo)本保存于冰壺內(nèi)，及時(shí)進(jìn)行分離，如不能進(jìn)行分離則需保存于－20℃以下，漱口液經(jīng)低速沉淀后，吸取上清液1毫升，～。③接種完畢后孵育35℃，72小時(shí)后收獲尿囊液。⑤自冰箱取出雞胚，放在蛋架上（一般是大頭朝上），用碘酒消毒氣室端卵殼，然后持鑷子小心擊破氣室端卵殼并打開之。⑥將尿囊液進(jìn)行血凝滴定，以測定是否有病毒生長。②將尿囊液與已知各型血清進(jìn)行補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)。③根據(jù)各個(gè)步驟的試驗(yàn)結(jié)果，判斷所分離的病毒屬于何種病毒。 3．ELISA試劑：①包被液和稀釋液， Na2CO3－NaHCO3緩沖液Na2CO3 NaHCO3 加蒸餾水至1000ml 該液應(yīng)保存于4℃，一次配制應(yīng)用期不宜超過10天。12H2O 20g KH2PO4 Tween－20 加蒸餾水至 1000ml③酶標(biāo)羊抗人抗體用洗滌液（不加Tween－20，改加1％兔血清）稀釋。H2O（） H2O 50ml鄰苯二胺（臨用時(shí)加） 60mg30％H2O2（臨用時(shí)加） 15ml⑤終止液（2M硫酸） 濃硫酸 22ml 蒸餾水 188ml寧可累死在路上，也不能閑死在家里！寧可去碰壁，也不能面壁。什么是奮斗？奮斗就是每天很難，可一年一年卻越來越容易。能干的人，不在情緒上計(jì)較，只在做事上認(rèn)真；無能的人！不在做事上認(rèn)真，只在情緒
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