微生物學目的與要求內容(文件)
【正文】 囊液（病毒懸液）、32孔有機玻璃板。第10孔不加尿囊液作為對照。凝集特別顯著者為＋＋＋＋，次之為＋＋＋，凝集清楚可見者為＋＋，稍呈凝集者為＋；陰性者血球沉于孔底中心，呈鈕扣狀。 （二）血凝抑制試驗 【材料】 4個血凝單位的病毒液，1∶5稀釋的抗血清，32孔有機玻璃板， ml移液器，移液頭，％雞紅細胞懸液，生理鹽水 【方法】 按下表進行，其操作程序為： 1．將有機玻璃板孔從1～10號進行編號，從第一孔起直至第9孔。 3． 4個血凝單位的病毒液。附錄：附錄：1．雞胚的準備和發(fā)育過程 病毒的雞胚培養(yǎng)，多采用來亨雞卵，其優(yōu)點為卵殼色白而薄，易于照視，如不能得到，一般家雞卵也可應用?；畹碾u胚于4日后即可見清晰之血管小網，中有剛剛發(fā)育之胚胎，自4～5天以后逐日檢查胚胎生活情況，逐日增大之雞胚則可見到清楚之絨毛尿囊膜上的血管及活動之胚胎。氣室的功能是呼吸和調節(jié)壓力，殼膜之下為血管豐富的絨毛尿囊膜，外為絨毛膜，系外胚層形成，內為尿囊膜，由內胚層形成，兩膜結合之間為中胚層，因此絨毛尿囊膜是尿囊膜在生長發(fā)育過程中與絨毛膜相連而成，血管較多，起著胚胎呼吸器官的功能，氧氣的交換是在膜的血管內通過卵殼孔而進行的。 卵黃囊附著于胚胎，卵黃囊膜系由內胚層的細胞組成，對培養(yǎng)病毒有重要作用，內包有卵黃，為胚胎之養(yǎng)料，卵白位于卵之銳端，為胚胎發(fā)育晚期之養(yǎng)料。H2O 2克 CaCl2 將上述二溶液混合后加雙蒸水至1000毫升，加2毫升氯仿作為防腐劑，保存于4℃冰箱。 3．營養(yǎng)液的配制 Hanks液 1000毫升 水解乳白蛋白 5克 ％之水解乳白蛋白溶液，分裝小瓶以9磅10分鐘滅菌，使用前再加入5～10％無菌牛血清，并調整pH（用NaHCO3溶液校正）。②取10～12日齡雞胚一只，接種于雞胚尿囊（初次分離多用羊膜腔接種，此處由于初學，羊膜腔接種難以掌握，暫以尿囊接種代替）。再用眼科小鑷子撕破卵膜及絨毛尿囊膜，以便用毛細管吸取尿囊液，將尿囊液吸入中號試管內。（一般補體結合試驗所用抗原多為可溶性抗原，具有型的特異性；血凝試驗中抗原為顆粒性，具有株的特異性；補體結合試驗所用的血清以豚鼠制備的免疫血清為宜）。②洗滌液（）NaCl 8gNa2HPO4是狼就要練好牙，是羊就要練好腿。拼一個春夏秋冬！贏一個無悔人生！早安！—————獻給所有努力的人.學習參考。不奮斗就是每天都很容易，可一年一年越來越難。④底物液（檸檬酸緩沖液） Na2HPO4（） C6H8O72．雞紅血球的制備 ％枸櫞酸鈉1ml，迅速混合，存放于4℃冰箱，時間不超過3天，使用前取紅細胞懸液加5～10倍體積生理鹽水洗滌3次，最后一次以2000轉/分的速度沉淀10分鐘，％懸液備用。（二）鑒定①將已測定過血凝的尿囊液，用已知各亞型血清進行抑制試驗。④孵育72小時后將雞胚置4℃冰箱過夜，目的是使雞胚凍死并不易在收獲尿囊液時出血，注意放入冰箱時必須使天然氣室（大頭）朝上。3．流感病毒的分離和鑒定過程： 【材料】 患者早期漱口液（用大管肉湯收集）、9～10日齡雞胚、1毫升注射器及針頭（16號）、抗生素（每毫升含青霉素2萬單位及2萬微克鏈霉素）、無菌小試管、吸管、％雞紅細胞、已知各型流感免疫血清。12H2O 304克 KH2PO4 加入800毫升雙蒸水 葡萄糖 20克 0．4％酚紅液 100毫升 加入雙蒸水使成1000毫升，加入2毫升氯仿作為防腐劑，保存于4℃冰箱，使用前按以下比例配成。 原液甲： NaCl 160克 KCl 8克 加入800毫升雙蒸水 MgSO4因此，在制備流感病毒抗原時，通常用鹽水將尿液加以稀釋后放4℃?zhèn)溆茫@樣可減少尿酸鹽的沉淀，尿液量在雞胚發(fā)育的第11至13天最高，平均為6～。 雞胚的最外層為石灰質之卵殼，上有細孔以行氣體交換，下層為殼膜，很容易與孵殼分開，殼膜的功能是使氣體分子和液體分子在內外兩方面進行交換，因此在孵育雞胚時需要一定的濕度和氣流，如果濕度太低，雞胚就容易脫水，引起雞胚死亡，氣流同樣是重要的，孵育時如空氣不流通，亦可造成雞胚的死亡。孵育4～5天后即可在檢蛋燈上檢查雞胚受精與否及發(fā)育情況。 孔 號1234567血 清 對 照病 毒 對 照紅 細 胞對 照生 理 鹽 水（ml）抗 血 清 （ml）＋ *＋＋＋＋＋＋ ＋ * 血 清 稀 釋 度1∶101∶201∶401∶801∶16 01∶3 201∶6404 個 血 凝 單 位 病 毒（ml）各 ％ 雞 紅 細 胞 懸 液（ml）各 *為1∶5稀釋的抗血清結果：紅 細 胞 對 照 孔 ，血球沉于孔底中心，呈鈕扣狀，表明紅細胞無自凝現(xiàn)象；病毒對照孔，呈現(xiàn)＋＋＋＋凝集，表明病毒血凝功能正常；血清對照孔，血球沉于孔底中心，呈鈕扣狀，表明血清中無凝集因子；測定孔中，如血球沉于孔底中心，呈鈕扣狀，表明血清中有相應的血凝抑制抗體，為陽性孔；反之凝集者為陰性孔。如此作對倍稀釋直至
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