微生物學(xué)目的與要求內(nèi)容-資料下載頁
2025-04-07 03:30本頁面
【正文】 加入800毫升雙蒸水 MgSO47H2O 2克 MgCl2H2O 2克 CaCl2 將上述二溶液混合后加雙蒸水至1000毫升，加2毫升氯仿作為防腐劑，保存于4℃冰箱。 原液乙： Na2HPO412H2O 304克 KH2PO4 加入800毫升雙蒸水 葡萄糖 20克 0．4％酚紅液 100毫升 加入雙蒸水使成1000毫升，加入2毫升氯仿作為防腐劑，保存于4℃冰箱，使用前按以下比例配成。 原液甲 1份 原液乙 1份 雙蒸水 18份以9磅10分鐘滅菌，此溶液存于4℃冰箱，可使用1個月。 3．營養(yǎng)液的配制 Hanks液 1000毫升 水解乳白蛋白 5克 ％之水解乳白蛋白溶液，分裝小瓶以9磅10分鐘滅菌，使用前再加入5～10％無菌牛血清，并調(diào)整pH（用NaHCO3溶液校正）。 4．％胰蛋白酶溶液配制 胰酶 Hanks使用液 1000毫升 青霉素 10毫升（最終濃度100單位/毫升） 鏈霉素 10毫升（最終濃度100單位/毫升） 加胰酶和抗生素于Hanks液中，震蕩使其溶解，加壓過濾除菌，分裝，－20℃低溫備用，一瓶最好用一次，不宜反復(fù)凍融。3．流感病毒的分離和鑒定過程： 【材料】 患者早期漱口液（用大管肉湯收集）、9～10日齡雞胚、1毫升注射器及針頭（16號）、抗生素（每毫升含青霉素2萬單位及2萬微克鏈霉素）、無菌小試管、吸管、％雞紅細胞、已知各型流感免疫血清。 【方法】 病人急性期的漱口液 （抗生素處理） 活雞胚培養(yǎng)（羊膜腔接種） 孵育35℃ 72小時 收獲羊水進行血凝滴定 （＋） （－） 血凝抑制試驗與 盲傳雞胚，方法同上，如又為 補體結(jié)合試驗定型 陰性則須再盲傳一次，一共三次 ，仍為陰性則報告陰性 （一）分離①標(biāo)本處理：采集之標(biāo)本保存于冰壺內(nèi)，及時進行分離，如不能進行分離則需保存于－20℃以下，漱口液經(jīng)低速沉淀后，吸取上清液1毫升，～。②取10～12日齡雞胚一只，接種于雞胚尿囊（初次分離多用羊膜腔接種，此處由于初學(xué)，羊膜腔接種難以掌握，暫以尿囊接種代替）。③接種完畢后孵育35℃，72小時后收獲尿囊液。④孵育72小時后將雞胚置4℃冰箱過夜，目的是使雞胚凍死并不易在收獲尿囊液時出血，注意放入冰箱時必須使天然氣室（大頭）朝上。⑤自冰箱取出雞胚，放在蛋架上（一般是大頭朝上），用碘酒消毒氣室端卵殼，然后持鑷子小心擊破氣室端卵殼并打開之。再用眼科小鑷子撕破卵膜及絨毛尿囊膜，以便用毛細管吸取尿囊液，將尿囊液吸入中號試管內(nèi)。⑥將尿囊液進行血凝滴定，以測定是否有病毒生長。（二）鑒定①將已測定過血凝的尿囊液，用已知各亞型血清進行抑制試驗。②將尿囊液與已知各型血清進行補體結(jié)合試驗。（一般補體結(jié)合試驗所用抗原多為可溶性抗原，具有型的特異性；血凝試驗中抗原為顆粒性，具有株的特異性；補體結(jié)合試驗所用的血清以豚鼠制備的免疫血清為宜）。③根據(jù)各個步驟的試驗結(jié)果，判斷所分離的病毒屬于何種病毒。2．雞紅血球的制備 ％枸櫞酸鈉1ml，迅速混合，存放于4℃冰箱，時間不超過3天，使用前取紅細胞懸液加5～10倍體積生理鹽水洗滌3次，最后一次以2000轉(zhuǎn)/分的速度沉淀10分鐘，％懸液備用。 3．ELISA試劑：①包被液和稀釋液， Na2CO3－NaHCO3緩沖液Na2CO3 NaHCO3 加蒸餾水至1000ml 該液應(yīng)保存于4℃，一次配制應(yīng)用期不宜超過10天。②洗滌液（）NaCl 8gNa2HPO412H2O 20g KH2PO4 Tween－20 加蒸餾水至 1000ml③酶標(biāo)羊抗人抗體用洗滌液（不加Tween－20，改加1％兔血清）稀釋。④底物液（檸檬酸緩沖液） Na2HPO4（） C6H8O7H2O（） H2O 50ml鄰苯二胺（臨用時加） 60mg30％H2O2（臨用時加） 15ml⑤終止液（2M硫酸） 濃硫酸 22ml 蒸餾水 188ml寧可累死在路上，也不能閑死在家里！寧可去碰壁，也不能面壁。是狼就要練好牙，是羊就要練好腿。什么是奮斗？奮斗就是每天很難，可一年一年卻越來越容易。不奮斗就是每天都很容易，可一年一年越來越難。能干的人，不在情緒上計較，只在做事上認真；無能的人！不在做事上認真，只在情緒上計較。拼一個春夏秋冬！贏一個無悔人生！早安！—————獻給所有努力的人.學(xué)習(xí)參考
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