【正文】 種方法適用于一些呼吸道病毒，如流感病毒、副流感病毒及流行性腮腺炎病毒等的分離。 4．用無(wú)菌1毫升注射器抽取少許流感病毒液體，將雞蛋直立于照明燈或檢蛋燈上，針頭自窗口對(duì)著雞胚直下，穿過(guò)絨毛尿囊膜，羊膜腔、推動(dòng)注射器，～，針頭刺入時(shí)注意勿傷及雞胚本身，最好從小雞的頸部空隙中插入。6．孵育于37℃溫箱，每日觀察生活情況，接種10－3稀釋的牛痘苗后的雞胚一般不死亡，但也可能在3天之后發(fā)生死亡，如發(fā)現(xiàn)死亡則立即放入普通冰箱，如不死亡則培養(yǎng)4～5日后放入普通冰箱，等待觀察檢查。【方法】1．選用10～13日齡雞胚，在照蛋燈上照視觀察是否活胚蛋，用鉛筆劃下絨毛尿囊膜發(fā)育的界限。封口前膠布用碘酒消毒，并通過(guò)火焰燒去余碘。 【方法】 1. 選用10～12日齡雞胚，在照蛋燈上照視觀察雞胚是否存活，根據(jù)如下：①小血管是否清晰；②胚胎是否活動(dòng)，觀察小雞的眼睛黑點(diǎn)是否移動(dòng)；③蛋白一邊和胎盤一邊是否界限分明，蛋白一邊較亮，胎盤一邊暗紅色，如果胎盤一邊發(fā)黑或蒼白都表示胚蛋已死亡。 5. 注射完畢，將用過(guò)得注射器放入煮針鍋內(nèi)煮沸消毒。 （三）小白鼠腦內(nèi)接種（錄像）【材料】腦炎病毒（小白鼠腦脊髓炎病毒）懸液。 【方法】 1. 首先將沾有乙醚的棉球放入一清潔小玻瓶?jī)?nèi)。至于接種的途徑應(yīng)根據(jù)病毒的嗜性決定，例如腦炎病毒以腦內(nèi)注射最敏感。病毒感染細(xì)胞所產(chǎn)生的包涵體，其特征基本是固定的，故對(duì)病毒性疾病的診斷具有一定價(jià)值。（四）掌握病毒學(xué)中主要血清學(xué)反應(yīng)的原理（五）熟悉病毒血凝抑制試驗(yàn)的測(cè)定過(guò)程內(nèi) 容（一）病毒的形態(tài)學(xué)診斷1. 病毒的電鏡照片（示教）2. 狂犬病毒包涵體（示教）3. 麻疹病毒包涵體（示教）（二）病毒的培養(yǎng)法（錄像） 1. 病毒的動(dòng)物接種法 2. 病毒雞胚培養(yǎng)法 3. 病毒的組織培養(yǎng)法 （三）血凝抑制試驗(yàn)（操作）一、 病毒的形態(tài)學(xué)診斷 病毒形態(tài)學(xué)研究方法可分為兩種：一種是應(yīng)用電子顯微鏡技術(shù)，觀察其大小，形態(tài)及排列特征，以幫助診斷；另一種是應(yīng)用光學(xué)顯微鏡通過(guò)涂片染色或切片染色，觀察包涵體。首先根據(jù)研究目的選擇動(dòng)物種類，對(duì)病毒致病機(jī)制的研究，則選擇愈接近人類的高等動(dòng)物（例如靈長(zhǎng)類）研究結(jié)果愈有價(jià)值；其次要注意動(dòng)物的年齡、性別和接種的途徑等各種因素，一般年幼的動(dòng)物比成年動(dòng)物對(duì)病毒的敏感性高。（二）小白鼠鼻內(nèi)接種（錄像） 【材料】 小白鼠、流感病毒鼠肺適應(yīng)株病毒懸液、無(wú)菌小試管、無(wú)菌毛細(xì)管、麻醉用乙醚、棉球及小玻瓶。解剖尸體可觀察到肺炎或血性病灶。 4. 右手拿注射器在小白鼠顳部（眼與耳根連線的中點(diǎn)略偏耳朵的方向）刺入，進(jìn)入顱腔，進(jìn)針2～3毫米，不要插得太深，～。（一）尿囊腔接種法（錄像） 【材料】 副流感病毒10－3稀釋液，10～12日齡雞胚、無(wú)菌1毫升注射器及7號(hào)針頭、電動(dòng)磨蛋器、檢蛋燈、彎頭小鑷子、蛋架、碘酒棉球、膠布、大頭針、無(wú)菌試管、無(wú)菌毛細(xì)吸管。 5．注射完結(jié)用膠布封口。羊水卵白氣室卵黃囊尿囊液圖 101 雞胚尿囊腔接種法（二）絨毛尿囊膜上接種法（錄像）【材料】牛痘苗病毒10－3稀釋液、10～13日齡雞胚、橡皮乳頭、眼科鑷子或小剪刀、無(wú)菌培養(yǎng)皿、無(wú)菌生理鹽水，其余同《尿囊腔接種法》。用過(guò)的注射器煮沸消毒。 3．用小鑷子挑去方形卵殼和撕去卵膜，再用無(wú)菌吸管，吸取石蠟油少許，滴入2滴，石蠟油在氣室面的卵膜上很快散開，使膜透明，這樣在雞蛋照明燈或檢蛋燈上，可清楚地觀察到整個(gè)雞胚。 8．滴定羊水的病毒血凝效價(jià)。（一） 原代細(xì)胞培養(yǎng)法【材料】9～10日齡雞胚、Hanks氏溶液、％胰酶溶液、無(wú)菌小剪、鑷子、無(wú)菌培養(yǎng)皿、毛細(xì)吸管、吸管、沉淀管、無(wú)菌細(xì)胞培養(yǎng)管（抗生素空瓶）、100毫升無(wú)菌玻璃瓶或三角燒瓶、備有四層紗布的玻璃漏斗。置37℃溫箱孵育，一般4小時(shí)，細(xì)胞附著于管壁，48小時(shí)可長(zhǎng)成單層，此時(shí)即可調(diào)換營(yíng)養(yǎng)液，接種病毒。由于傳代細(xì)胞有致腫瘤作用，目前僅用做病毒的分離鑒定及一些病毒學(xué)的研究而不能用于疫苗的生產(chǎn)?！痉椒ā?．取已長(zhǎng)成單層細(xì)胞的培養(yǎng)瓶二只，用無(wú)菌毛細(xì)滴管吸去管中液體，用Hanks溶液洗二次。 ml移液器、移液頭、小試管一支、％雞紅細(xì)胞懸液、生理鹽水【方法】 按下表進(jìn)行，其操作程序?yàn)椋?1．將有機(jī)玻璃板孔從1～10號(hào)進(jìn)行編號(hào)，從第一孔起直至第10孔。 血凝效價(jià)：指呈現(xiàn)＋＋凝集時(shí)病毒的最高稀釋度。 4．稍加振搖后，％，室溫靜置45分鐘，觀察結(jié)果。 受精卵在通過(guò)輸卵管時(shí)，已開始分裂，當(dāng)產(chǎn)卵時(shí)已在卵黃中形成細(xì)胞，名為胚點(diǎn)，在適宜溫度下即能繼續(xù)分裂發(fā)育，形成中、外、內(nèi)三胚層，逐步發(fā)育成各種器官。 2．Hanks溶液配制，先配成下列甲、乙兩種原液。 4．％胰蛋白酶溶液配制 胰酶 Hanks使用液 1000毫升 青霉素 10毫升（最終濃度100單位/毫升） 鏈霉素 10毫升（最終濃度100單位/毫升） 加胰酶和抗生素于Hanks液中，震蕩使其溶解，加壓過(guò)濾除菌，分裝，－20℃低溫備用，一瓶最好用一次，不宜反復(fù)凍融。⑥將尿囊液進(jìn)行血凝滴定，以測(cè)定是否有病毒生長(zhǎng)。12H2O 20g KH2PO4 Tween－20 加蒸餾水至 1000ml③酶標(biāo)羊抗人抗體用洗滌液（不加Tween－20，改加1％兔血清