微生物學目的與要求內(nèi)容-預覽頁
【正文】 體在細胞內(nèi)的位置、形態(tài)、染色性以及細胞融合情況。首先根據(jù)研究目的選擇動物種類，對病毒致病機制的研究，則選擇愈接近人類的高等動物（例如靈長類）研究結果愈有價值；其次要注意動物的年齡、性別和接種的途徑等各種因素，一般年幼的動物比成年動物對病毒的敏感性高。左手拇指捏住尾部的遠端，向下彎45176。（二）小白鼠鼻內(nèi)接種（錄像） 【材料】 小白鼠、流感病毒鼠肺適應株病毒懸液、無菌小試管、無菌毛細管、麻醉用乙醚、棉球及小玻瓶。 2. 用無菌毛細吸管吸取病毒懸液少許，連同毛細吸管插在無菌試管中備用。解剖尸體可觀察到肺炎或血性病灶。（4號）、煮針鍋、碘酊、棉簽。 4. 右手拿注射器在小白鼠顳部（眼與耳根連線的中點略偏耳朵的方向）刺入，進入顱腔，進針2～3毫米，不要插得太深，～。三、 病毒雞胚培養(yǎng)法 雞胚培養(yǎng)法常用于痘類病毒、粘病毒和皰疹病毒的分離、鑒定、制備抗原、生產(chǎn)疫苗以及研究病毒性質等。（一）尿囊腔接種法（錄像） 【材料】 副流感病毒10－3稀釋液，10～12日齡雞胚、無菌1毫升注射器及7號針頭、電動磨蛋器、檢蛋燈、彎頭小鑷子、蛋架、碘酒棉球、膠布、大頭針、無菌試管、無菌毛細吸管。 2. 用碘酒消毒注射入口和天然氣室端的蛋殼，再用電動磨蛋器于注射入口和天然氣室端的蛋殼上磨一小孔，勿傷及卵膜。 5．注射完結用膠布封口。注意雞胚必須直立，令氣室端朝上。羊水卵白氣室卵黃囊尿囊液圖 101 雞胚尿囊腔接種法（二）絨毛尿囊膜上接種法（錄像）【材料】牛痘苗病毒10－3稀釋液、10～13日齡雞胚、橡皮乳頭、眼科鑷子或小剪刀、無菌培養(yǎng)皿、無菌生理鹽水，其余同《尿囊腔接種法》。3．用分離針或大頭針通過火焰消毒，穿通天然氣室端所鋸小孔；并用分離針或大頭針輕輕劃破卵殼，露出三角形卵膜，最好將分離針或大頭針30176。用過的注射器煮沸消毒。絨毛尿囊膜上接種法，除適用于天花，牛痘等病毒外，尚適用于單純皰疹病毒和其它一些病毒，但其它一些病毒不如天花、牛痘、單皰疹病毒那樣具有明顯的病斑。 3．用小鑷子挑去方形卵殼和撕去卵膜，再用無菌吸管，吸取石蠟油少許，滴入2滴，石蠟油在氣室面的卵膜上很快散開，使膜透明，這樣在雞蛋照明燈或檢蛋燈上，可清楚地觀察到整個雞胚。雞胚放入35～37℃培養(yǎng)48～72小時。 8．滴定羊水的病毒血凝效價。很多組織細胞，包括雞胚、鼠胚、各種動物的腎組織細胞，人胚羊膜組織細胞或流產(chǎn)胎兒組織細胞（應在死后6小時內(nèi)采取，因時間過長，組織細胞生長成功率下降）等均可作細胞培養(yǎng)的來源。（一） 原代細胞培養(yǎng)法【材料】9～10日齡雞胚、Hanks氏溶液、％胰酶溶液、無菌小剪、鑷子、無菌培養(yǎng)皿、毛細吸管、吸管、沉淀管、無菌細胞培養(yǎng)管（抗生素空瓶）、100毫升無菌玻璃瓶或三角燒瓶、備有四層紗布的玻璃漏斗。3．用鑷子將組織塊放入無菌玻璃瓶或三角燒瓶內(nèi)，加入10～％胰酶溶液，37℃水浴20分鐘，中間搖動幾次。置37℃溫箱孵育，一般4小時，細胞附著于管壁，48小時可長成單層，此時即可調換營養(yǎng)液，接種病毒。如HeLa細胞，Hep－2細胞及KB細胞。由于傳代細胞有致腫瘤作用，目前僅用做病毒的分離鑒定及一些病毒學的研究而不能用于疫苗的生產(chǎn)。3．將細胞瓶倒放，細胞在上，胰酶在下，繼續(xù)孵育37℃5～10分鐘?！痉椒ā?．取已長成單層細胞的培養(yǎng)瓶二只，用無菌毛細滴管吸去管中液體，用Hanks溶液洗二次。注：為方便保存，此處觀察的細胞已經(jīng)過固定和染色。 ml移液器、移液頭、小試管一支、％雞紅細胞懸液、生理鹽水【方法】 按下表進行，其操作程序為： 1．將有機玻璃板孔從1～10號進行編號，從第一孔起直至第10孔。 3．自第10孔起， ml。 血凝效價：指呈現(xiàn)＋＋凝集時病毒的最高稀釋度。 2．于第1孔和第8孔中各加入1∶。 4．稍加振搖后，％，室溫靜置45分鐘，觀察結果。孵育溫度通常在38～39℃之間，相對濕度40～60％。 受精卵在通過輸卵管時，已開始分裂，當產(chǎn)卵時已在卵黃中形成細胞，名為胚點，在適宜溫度下即能繼續(xù)分裂發(fā)育，形成中、外、內(nèi)三胚層，逐步發(fā)育成各種器官。雞胚孵育至第3天即出現(xiàn)尿囊，為直腸腹側部分的膨出物，尿囊腔是胚胎的排泄器官，內(nèi)含尿囊液，初為透明液體，是單純生理鹽水溶液，以后尿囊液中尿酸鹽迅速增加，胚胎發(fā)育到第12～13天，尿囊液開始變得渾濁，若將其冷卻即可見有沉淀物形成，主要是尿酸鹽類。 2．Hanks溶液配制，先配成下列甲、乙兩種原液。 原液乙： Na2HPO4 4．％胰蛋白酶溶液配制 胰酶 Hanks使用液 1000毫升 青霉素 10毫升（最終濃度100單位/毫升） 鏈霉素 10毫升（最終濃度100單位/毫升） 加胰酶和抗生素于Hanks液中，震蕩使其溶解，加壓過濾除菌，分裝，－20℃低溫備用，一瓶最好用一次，不宜反復凍融。③接種完畢后孵育35℃，72小時后收獲尿囊液。⑥將尿囊液進行血凝滴定，以測定是否有病毒生長。③根據(jù)各個步驟的試驗結果，判斷所分離的病毒屬于何種病毒。12H2O 20g KH2PO4 Tween－20 加蒸餾水至 1000ml③酶標羊抗人抗體用洗滌液（不加Tween－20，改加1％兔血清）稀釋。什么是奮斗？奮斗就是每天很難，可一年一年卻越來
化學相關推薦
鄂ICP備17016276號-1