【正文】 這個(gè)模型適用于遺傳毒性和非遺傳毒性化合物 rasH2 轉(zhuǎn)基因小鼠 Trp 53+/ 小鼠 替代致癌性試驗(yàn) 關(guān)于 Trp53+/和 rasH2的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) ? 25只 /性別，溶劑對(duì)照、低、中和高劑量組 ? 剛接收的小鼠小而脆弱 ? 處理 6個(gè)月 —通常同臨床給藥方式 ? 灌胃、添加至飼料中，或注射 ? 不認(rèn)可局部給藥 ? 3個(gè)月后追蹤明顯的腫塊 ? 實(shí)驗(yàn)中用野生型同窩出生動(dòng)物做一次毒代動(dòng)力學(xué) 替代致癌性試驗(yàn) 野生型小鼠也應(yīng)檢查嗎？ ? 建議對(duì)野生型同窩出生小鼠進(jìn)行處理并進(jìn)行顯微檢查，但不強(qiáng)制要求 能確認(rèn)模型的敏感型，但該模型已被廣泛認(rèn)可 如果野生型小鼠發(fā)生了更多與處理相關(guān)的腫瘤，那么該模型及研究 的可靠性都有問題 對(duì)委托方幫助不大 替代致癌性試驗(yàn) 陽性對(duì)照 ? 目前每個(gè)實(shí)驗(yàn)中都需要一個(gè)陽性對(duì)照以確認(rèn)模型的易感性 ? 通常使用明顯誘變致癌物 對(duì)于 rasH2來說一般是 MNU或 尿烷 對(duì) Trp53來說一般是 p甲酚啶 或 MNU或 尿烷 MNU組或尿烷組一般 1015只 /性別 僅檢查靶器官（ FDA） MNU：胸腺淋巴瘤（ 8090%），前胃乳頭瘤和癌 尿烷：支氣管腫瘤，血管肉瘤 p甲酚啶：膀胱上皮腫瘤 替代致癌性試驗(yàn) 劑量選擇 ? 最大耐受劑量 死亡率升高 相對(duì)于對(duì)照組，體重增加值減少 ≥10% 顯著的靶器官毒性 降低預(yù)期壽命的臨床病理學(xué)發(fā)現(xiàn) ? 最大可行劑量 ? 最大暴露 ? 限定劑量（ 1500 mg/kg）？ ? 非無毒的人體暴露量的倍數(shù) 替代致癌性試驗(yàn) FDA審查 ? 在劑量范圍確定之前，通知審查部門打算使用致癌性替代模型 ? FDA致癌性咨詢委員會(huì)將劑量選擇及研究設(shè)計(jì)，基于以下幾點(diǎn)： 用該該模型的理由 確定劑量范圍研究的 TK數(shù)據(jù) 遺傳毒性信息 小鼠和人體代謝數(shù)據(jù) 藥物及代謝物在人體的暴露數(shù)據(jù) 為“可靠”的兩年大鼠試驗(yàn)所作的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) ? 替代動(dòng)物模型幾乎總被接受（除了 PPAR拮抗劑） 替代致癌性試驗(yàn) 病理終點(diǎn) ? 通常不評(píng)價(jià)臨床病理學(xué) ? 無需器官稱重 ? 全組織采樣 ? 除了陽性對(duì)照組出現(xiàn)的靶器官外，所有處理組中的所有組織都進(jìn)行顯 微檢查（有些檢查對(duì)照組，高劑量組及靶器官） ? 病理同行評(píng)審 —具有代表性的處理動(dòng)物的所有靶器官的腫瘤 ? 對(duì)腫瘤統(tǒng)計(jì)分析 替代致癌性試驗(yàn) 提交給 FDA的替代模型試驗(yàn) 模型 已接收的試驗(yàn) 陽性結(jié)果的試驗(yàn) Trp 53+/ 31 2 XPA/ p53 +/ 1 不充分的 0 Tg. AC 16 1 不充分的 5 Neonatal 1 遺傳毒性 0 rasH2 13 2 Note: 摘自 Abigail Jacobs的報(bào)告 , FDA, CDER, 2023 替代致癌性試驗(yàn) 轉(zhuǎn)基因小鼠的優(yōu)勢(shì) 模型 傳統(tǒng)的 轉(zhuǎn)基因的 研究期限 2年 6個(gè)月 從開始到提交最終報(bào)告 4年 動(dòng)物數(shù) 400 230 花費(fèi) $3M $1M 2023/1/16 104 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH 。因而， FDA認(rèn)為該模型僅適宜評(píng)價(jià)遺傳毒性的化合物。 如果可行的話，確認(rèn)腫瘤的原發(fā)部位 將腫瘤歸類為“致命”與“非致命”： 有沒有可能是腫瘤促成的動(dòng)物提前死亡或死亡 要求專業(yè)判斷 要求做 Peto試驗(yàn) 計(jì)劃處死的動(dòng)物不需要 記錄計(jì)劃處死前解剖的動(dòng)物死亡或?yàn)l死的原因 顯微評(píng)價(jià) 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗(yàn) 致癌性實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)化合物在動(dòng)物體內(nèi)潛在致癌性的特定的非臨床安全性評(píng)價(jià)，旨在增進(jìn)人類的潛在致癌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià) 致癌性試驗(yàn)開展時(shí)間取決于藥物的類型和關(guān)注程度 通常在臨床試驗(yàn)第二，三階段進(jìn)行，很少在第 IV階段（上市后）進(jìn)行 通常 104周的生物評(píng)價(jià)采用大鼠或小鼠進(jìn)行 使用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物或敏感的體外試驗(yàn)來推進(jìn)致癌性試驗(yàn) 一些藥物可能不需要進(jìn)行致癌性試驗(yàn) 細(xì)胞毒性抗癌藥物一般不需要進(jìn)行致癌性試驗(yàn) 生物技術(shù)藥物也可除外（ ICH S6） 專題負(fù)責(zé)人、毒理人員和統(tǒng)計(jì)人員作為一個(gè)團(tuán)隊(duì)，共同設(shè)計(jì)、執(zhí)行和評(píng)估 選擇種屬應(yīng)考慮藥代、毒代情況 實(shí)驗(yàn)中每組必須有足夠的動(dòng)物，試驗(yàn)設(shè)計(jì)或執(zhí)行使偏離最小化 劑量選擇是關(guān)鍵，必須顯示暴露范圍，從推薦人用劑量到 MTD或最大可行劑量 活體階段，死亡、解剖和顯微數(shù)據(jù)必須銜接 對(duì)數(shù)據(jù)全面評(píng)價(jià)的統(tǒng)計(jì)方法必須適當(dāng) 總結(jié) 替代致癌性試驗(yàn) ICH S1B 潛在致癌性研究的指南 ? 1997年： 1個(gè)兩年性致癌試驗(yàn) +1個(gè)替代模型的體內(nèi)試驗(yàn) ? Trp 53+/ （應(yīng)用于遺傳毒性的藥物） ? rasH2（應(yīng)用于遺傳毒性和非遺傳毒性的藥物） ? （局部采用，許多陽性結(jié)果，遺傳不穩(wěn)定） ? XPA/和 XPA/x p53+/ ? 新生鼠 ? 開始啟動(dòng)（ Ito 模型） p53+/ 轉(zhuǎn)基因小鼠 替代致癌性試驗(yàn) 應(yīng)用替代模型的原因 ? 減少動(dòng)物使用并降低費(fèi)用 ? 兩年致癌試驗(yàn)的問題被廣泛認(rèn)知 — 肝細(xì)胞腫瘤；許多發(fā)現(xiàn)與人不相關(guān) ? 提供有助于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的其他信息 ? 如有時(shí)間要求，可以縮短至 9個(gè)月 ? 可以延長(zhǎng)試驗(yàn)直至 III期結(jié)果顯示成功 ? 陽性結(jié)果的幾率降低 rasH2 轉(zhuǎn)基因小鼠 替代致癌性試驗(yàn) Trp53+/和 rasH2模型的基礎(chǔ) ? Trp53+/半合子敲除小鼠 —每個(gè)細(xì)胞僅攜帶一個(gè)拷貝的小鼠 Trp53腫瘤 抑制基因。 基本的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 組別 劑量（ mg/kg） 動(dòng)物 中期剖檢 毒代 1 對(duì)照組 * 0 64M/64F 10M/10F 4M/4F 2 低劑量組 X 64M/64F 10M/10F 4M/4F 3 中劑量組 Y 64M/64F 10M/10F 4M/4F 4 高劑量組 Z 64M/64F 10M/10F 4M/4F 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗(yàn) ―最高劑量或最大耐受劑量用來預(yù)測(cè)在致癌性試驗(yàn)過程中會(huì)產(chǎn)生的最低毒性作用” ICH S1C(R2) 在最高推薦人用劑量時(shí)，嚙齒類與人類血清 AUC（無毒藥物）的暴露比大于 25:1 吸收飽和 — 最大暴露 限制劑量藥理學(xué) — 鎮(zhèn)靜，食欲不振，血壓過低，影響實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的癲癇 如果以下情況發(fā)生，采用限制劑量（藥物）： 1500 mg/kg 人用劑量 500 mg/d；無遺傳毒性；暴露水平高于最高推薦人用劑量的 10倍 最大可行劑量 飼料量的 5%；最大灌胃量；局部耐受性 高劑量的選擇 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗(yàn) 展示不同劑量組藥物代謝動(dòng)力學(xué)、藥理學(xué)、毒理和致癌性范圍 —各組間暴露不同很重要 展示不產(chǎn)生毒性或未出現(xiàn)藥物相關(guān)腫瘤的劑量水平（定義閾值） 通常使用給藥劑量或人類暴露的幾何或線性倍數(shù) 通常低劑量接近臨床暴露水平 低劑量和中劑量的選擇 傳統(tǒng)兩年致癌性試驗(yàn) 對(duì)