15藥物遺傳毒性(參考版)
2025-01-25 17:35本頁面
【正文】 陰性結(jié)果判定條件 ? 各劑量組的組間差距不應(yīng)過大，以防漏檢僅在非常狹窄范圍內(nèi)才有突變能力的某些化學(xué)毒物 ? 一組或多組的觀察值與陰性對照比較沒有顯著性差異。 （三）致突變試驗與致癌試驗的關(guān)系 致突變試驗僅可檢出遺傳毒性致癌物和非遺傳毒性非致癌物，可能出現(xiàn)假陽性和假陰性。 應(yīng)用純化細胞色素 P450、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶及過氧化物水解酶，可嚴(yán)格控制代謝產(chǎn)物誘發(fā)突變的條件，但技術(shù)難度大。 S9 含有混合功能氧化酶 (MFO)，是國內(nèi)常規(guī)應(yīng)用于體外致突變試驗的代謝活化系統(tǒng)。它有完整的細胞結(jié)構(gòu)和各種酶及內(nèi)源性輔助因子，代謝能力優(yōu)于無細胞系統(tǒng)如 S9，但不如體內(nèi)活化系統(tǒng)。 許多化合物須經(jīng)哺乳動物代謝才轉(zhuǎn)變成致突變物，稱為前致突變物 (promutagen) （二）體外試驗的活化系統(tǒng) 由于微生物和培養(yǎng)的哺乳動物細胞缺乏整體動物體內(nèi)的許多代謝能力。染毒組的突變率大于自發(fā)突變率的兩倍，并有劑量 反應(yīng)關(guān)系者為陽性效應(yīng)。僅有 1只野生型或 F2代總數(shù)不足 20只者為可疑，需進行 F3代觀察。 （九）顯性致死試驗 (dominant lethal assay) （十）果蠅伴性隱性致死試驗 野生型雄蠅 (圓形、紅色眼 ) “ Basc” 雌蠅 (棒形、杏色眼 ) (棒形、杏色眼 ) (圓形、紅色眼 ) 20個 F2代 (雌和雄 )中沒有紅色圓眼的野生型雄蠅者為致死突變陽性。①卵子對誘變物的敏感性相對較低，②受試物可能作用于母體動物，產(chǎn)生不利于胚胎發(fā)育的種種干擾因素，影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。 （八）程序外 DNA合成試驗 (unscheduled DNA synthesis test， UDS) 顯性致死主要是由于精子或卵子細胞發(fā)生染色體損傷（結(jié)構(gòu)及數(shù)目改變），導(dǎo)致受精卵或發(fā)育中的胚胎死亡。 DNA的放射活性就間接反映其損傷的程度。 用同步培養(yǎng)法將細胞阻斷于 G1期，然后用受試物處理細胞，并在加有 3H胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)液中進行培養(yǎng)。 正常細胞僅在 S期進行 DNA復(fù)制合成。 小鼠特異座位試驗陽性： 馬利蘭、二乙基硫酸酪、正丙基亞硝基脲、正丙基甲磺酸甲酯。在F1代雄鼠中發(fā)現(xiàn)不育或半不育者，再檢查其精子染色體以證實易位的存在。給雄性小鼠染毒后，讓其與雌鼠交配，當(dāng)引起易位時，會產(chǎn)生易位復(fù)合體的 F1代。 通過檢測由突變所致的生化指標(biāo)變化（變異蛋白質(zhì)），稱為生化法特異座位試驗。雜交后所產(chǎn)子代的隱性基因不能表達。 T系小鼠帶有 7個與毛色、眼色及耳形有關(guān)的隱性基因座。如果發(fā)生回復(fù)突變，則不能存活。 (四 )姐妹染色單體交換試驗 (sister chromatid exchage assay， SCE） (五 )哺乳動物體細胞株突變試驗 常用的細胞株有中國地鼠肺細胞 V7中國地鼠卵巢細胞株 (CHO細胞株 )以及小鼠淋巴瘤L5178Y細胞株。由于 5BrdU對染料的親合力下降，染色后會出現(xiàn)一深一淺兩條姐妹染色單體。 細胞培養(yǎng)液中加入 5溴脫氧尿嘧啶核苷 (5BrdU)，在 DNA合成期可與胸苷競爭摻入 DNA中。 體內(nèi)染色體畸變試驗 (in vivo chrosome aberrtion test) 主要有嚙齒類動物骨髓細胞染色體畸變試驗 (chromosome aberration of bone marrow cells)和嚙齒類動物睪丸細胞染色體畸變試驗 (chromosome aberration test of testicle cells)。染色體結(jié)構(gòu)異常主要可觀察到裂隙、斷裂、斷片、缺失、微小體、著絲點環(huán)、無著絲點環(huán)及各種輻射體等。染色體畸變試驗可為體外試驗，也可為體內(nèi)試驗，包括對體細胞和生殖細胞的分析。 (二 )微核試驗 (Micronucleus test， MNT) MN NCE 制備細胞分裂中期相染色體標(biāo)本，在光鏡下可直接觀察染色體的數(shù)目和形態(tài)的改變。其來源有二：①斷片或無著絲粒染色體在細胞分裂后期不能定向移動，而遺留在細胞質(zhì)中；②有絲分裂毒物的作用使個別染色體或帶著絲粒的染色體環(huán)和斷片
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