【正文】 4．何謂交叉共軛體系，它與黃酮類化合物顏色的關(guān)系如何？ 。如何理解黃酮類化合物聚酰胺色譜分離的“雙重色譜”性能。 黃酮類化合物思考題： 1．葡聚糖凝膠（ Sephadex G 型和 Sephadex LH – 20型）柱色譜用于分離黃酮類化合物（苷及苷元）的原理、方法及洗脫規(guī)律。 理化性質(zhì)： 蕓香苷為槲皮素 3O蕓香糖。 二、槐米 功效： 涼血止血，清肝瀉火。 理化性質(zhì)： 黃芩苷在黃芩酶的作用下水解成黃芩素，黃芩素含有鄰三酚羥基，易被氧化成醌類化合物而顯綠色，主是保存或炮制不當(dāng)黃芩變綠的主要原因。 化學(xué)成分 ： 黃芩苷主主要有效成分，具有抗菌作用，還含有黃芩素、漢黃芩素、漢黃芩苷、千層紙素、千層紙素苷等 30余種黃酮類化合物。 以下以黃酮、黃酮醇類為例介紹其對黃酮類化合物紫外光譜的影響及其在結(jié)構(gòu)測定中的意義。 ? 羥基乙?；?，乙酰基的吸電作用，使原來酚羥基對共軛系統(tǒng)的供電能力消失，對光譜的影響亦將完全消失。 ? 羥基甲基化或苷化后，原酚羥基的供電能力下降，引起相應(yīng)的吸收峰紫移。 （ 2）取代基團(tuán)對共軛吸收的影響 ? 黃酮類核中引入 OH（酚羥基）等供電基團(tuán)，使共軛程度增強(qiáng)，相 應(yīng)的吸收峰紅移。 查耳酮及橙酮類： 主要特征是帶 Ⅰ 為強(qiáng)吸收峰，而帶 Ⅱ 則較弱，為次強(qiáng)峰。 異黃酮和二氫黃酮（醇）類： 主要特征為帶 Ⅱ 為強(qiáng)吸收峰（都有苯甲?；?，帶 Ⅰ 均為弱（肩）峰（ B環(huán)未與 C環(huán)羰基共軛）。 OOOOOOOO 帶 II(240285nm)（ 苯甲酰系統(tǒng) ） 帶 I(300400nm) 桂皮酰系統(tǒng) 類 型 說 明 250285 304350 黃酮類 OH 越多 ，帶 I帶 II越紅移 , Ⅰ 、 Ⅱ 皆強(qiáng) B 環(huán) 3’,4’有 OH， 帶 II為雙峰 （ 主峰伴肩峰 ） 328357 黃酮醇類 (3OR) 352385 黃酮醇類 (3OH) 245270 270295 300400 （肩峰） 異黃酮類 二氫黃酮（ 醇 ） Ⅰ 弱 Ⅱ 強(qiáng) B環(huán)上有 OH, OCH3對帶 I影響不大 220270 （低強(qiáng)度） 340390 查耳酮類 查耳酮 2’OH使帶 I向紅移影響大 370430(34個小峰 ) 橙酮類 圖 1 黃酮和黃酮醇類 木犀草素（黃酮）￣ ； 槲皮素（黃酮醇） ﹉ 圖 2 異黃酮及二氫黃酮類 7羥基異黃酮￣ ； 7， 4， 二羥基二氫黃酮 ﹉ 圖 3 查耳酮及橙酮類 2， 3， 4三羥基查耳酮￣； 3， ， 4， 二羥基橙酮 ﹊ 黃酮及黃酮醇類： 主要特征為峰形相似（ Ⅰ 、Ⅱ 皆強(qiáng)）。 ? 一般程序： ①測定樣品在甲醇中的 UV譜以了解母核類型； ②在甲醇溶液中分別加入各種診斷試劑后測 UV譜和可見光譜以了解 3,5,7,3’,4’有無羥基及鄰二酚羥基； ③苷類可水解后（或先甲基化再水解），再用上法測苷元的 UV譜以了解糖的連接位置 。 第四節(jié) 黃酮類化合物的檢識與結(jié)構(gòu)測定 目前主要采用的方法有： ①與標(biāo)準(zhǔn)品或與文獻(xiàn)對照 PPC或 TLC得到的Rf或 hRf值（ Rf?100） ②分析對比樣品在甲醇溶液中及加入酸、堿或金屬鹽類試劑后得到的 UV光譜 ③ 1HNMR ④ 13CNMR ⑤ MS 第四節(jié) 結(jié)構(gòu)測定 一般鑒定程序 ： ? 與標(biāo)準(zhǔn)品或與文獻(xiàn)對照 PPC或 TLC得到的 Rf或 hRf值（ Rf?100） ? 分析對比樣品在甲醇溶液中及加入酸、堿或金屬鹽類試劑后得到的 UV光譜 如為苷類，則可水解或甲基化后再水解，并測定苷元或其衍生物的紫外光譜 ? 1HNMR ? 13CNMR ? MS 將以上各種光譜數(shù)據(jù)（或光譜圖）進(jìn)行對比分析，即可獲得有關(guān)結(jié)構(gòu)信息。 5．根據(jù)分子中某些特定官能團(tuán)進(jìn)行分離 ? 醋酸鉛沉淀法 ? 硼酸絡(luò)合法： 根據(jù)具有鄰二酚羥基的黃酮與硼酸絡(luò)合，生成物易溶于水的性質(zhì)與其它類型黃酮分離。 3．氧化鋁柱色譜 很少應(yīng)用 — 具有 3OH或 5OH 、 4羰基及鄰二酚羥基黃酮類化合物與 鋁離子絡(luò)和而被牢固吸附，難于洗脫。 黃酮類化合物從聚酰胺柱洗脫時有下列規(guī)律： ①苷元相同，洗脫先后順序一般為： 三糖苷 ?雙糖苷 ?單糖苷 ?苷元 ②母核上增加羥基，洗脫速度相應(yīng)減慢 羥基位置的影響：具有鄰位羥基黃酮 ?具有對位（或間位）羥基黃酮 ③不同類型的黃酮類化合物，先后流出順序一般是： 異黃酮 ?二氫黃酮醇 ?黃酮 ?黃酮醇 ④分子中芳香核、共軛雙鍵多者吸附力強(qiáng)，故查耳酮往往較相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。 ? RSO3H+ ArOH（黃酮） ? 無法交換，故實(shí)際上樹脂僅起到吸附作用。 ? 大部分苷類可用 7%酚 /水洗下，經(jīng)減壓濃縮至小體積，乙醚除酚，余下水層經(jīng)減壓濃縮得較純黃酮苷。 ? 植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，過濾得吸附苷的活性炭粉末。 2． 堿水提酸沉淀法 適用于含酚羥基的化合物，如槐米中蘆丁的提取。 4. 提取花青素類可加入少量酸，但一般黃酮類化合物則應(yīng)避免。 2. 苷類 水或熱水提取，（多糖苷在熱水中溶解度較大，在冷水中溶解度?。?； 也可用 EtOH、 MeOH、 EtOAc提取。H2O(1。 各種色譜的檢識順序： 日光下觀察 — 多數(shù)黃酮有黃色斑點(diǎn) 紫外光下觀察 — 多數(shù)黃酮呈黃綠色熒光斑點(diǎn) 氨蒸氣熏 — 多數(shù)黃酮有顏色變化 噴顯色劑（ 2%AlCl3甲醇液） — 多數(shù)黃酮黃色變深，熒光 加強(qiáng) 第四節(jié) 提取與分離方法 一、提取 黃酮類化合物在花、液、果等組織中，多以苷的形式存在； 在木部堅硬組織中，多以游離苷元形式存在； 根據(jù)化合物極性不同，溶解性不同，采用不同溶劑提取。 2．聚酰胺薄層色譜 — 可用于黃酮苷及游離黃酮的分離 鑒別，其色譜行為可參考聚酰胺柱色譜。 與金屬鹽類試劑絡(luò)合反應(yīng) 反應(yīng)類型 鑒別特征及鑒別意義 備 注 鋯鹽 枸櫞酸 鋯鹽 枸櫞酸 3OH或 3， 5 二 OH 黃色 黃色不褪 PPC (ZrOCl2) 5OH 黃色褪去 示 氨性氯化鍶 (SrCl2) 鄰二酚羥基 綠、棕乃至黑色 三氯化鐵 (FeCl3) 酚羥基 紫、藍(lán)、綠 三氯化鋁 3OH， 4C=O 黃色 （ AlCl3） 5OH， 4C=O 鮮黃色熒光 PPC\TLC 鄰二酚羥基 （ 4‘或 7， 4’黃酮醇，天藍(lán)色熒光） 示 （三） 硼酸顯色反應(yīng) 硼酸 5 羥基， 4 羰基黃酮 黃色，綠色熒光（草酸液） （ H3BO3） 6′ 羥基， 4 羰基查耳酮 黃色，無熒光（枸櫞酸） 反應(yīng)類型 鑒別特征及鑒別意義