【正文】 4．簡述黃酮類化合物的酸性規(guī)律及在黃酮苷元分離中的應用。 3．聚酰胺柱色譜用于分離黃酮類化合物（苷、苷元）的原理、方法及洗脫規(guī)律。 OOAB++.+.+.+ .+.+.+.+.++++..MOCCHO H[ M ]12 8C O[ M ]m / zm / zm / zm / z1 9 4 5 4( )2 2 1 ( )3 3OCO HOAABC2 2 2( )( )1 0 0C BO[ A1+ H ] m / z 1 2 1 A1 m / z ( )1 2 0 8 0B1 m / z ( )1 0 2 1 21 0 5 1 2C OC O[ A1 ] [ B1 ]2 82 8m / z ( )m / z ( )9 27 7 1 44 9+ 黃酮類基本裂解途徑 ( 以途徑 I為主） 途徑 I+H轉(zhuǎn)移 途徑 II 途徑 I +[ A1+ H ]OOO HAB+.+M+B 2++CB OC OC6H5+B 2 [ B2 ]2 8黃酮醇類基本裂解途徑（以途徑 II為主 ） 途徑 I＋ H轉(zhuǎn)移 途徑 II 黃酮類化合物思考題： 1．葡聚糖凝膠（ Sephadex G 型和 Sephadex LH – 20型）柱色譜用于分離黃酮類化合物（苷及苷元）的原理、方法及洗脫規(guī)律。 黃酮類化合物結(jié)構(gòu) MS . [M ]+ . 兩種途徑裂解得到的碎片離子 A B B2等，保留著 A環(huán)、 B環(huán)的基本骨架，且碎片 A1與相應的 B1碎片的質(zhì)荷比之和等于分子離子的質(zhì)荷比。 2．主要碎片離子峰為裂解途徑 I 產(chǎn)生的 A1和 B1母核確定及裂解途徑 II產(chǎn)生的 [B2]+ A、 B環(huán)取代情況確定 MS在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)研究中的應用 黃酮類化合物結(jié)構(gòu) MS 裂解途徑 I（ RDA裂解）： OOAB++.+.+.+ +.+..MOCOCH CA1B1裂解途徑 II： OOAB++.+.+.++.MCOB2O C HC + 通常，上述兩種基本裂解途徑是相互競爭、相互制約的。 FDMS、 FABMS、 ESIMS（目前）：可測得分子離子峰 或準分子離子峰 [M+1]、 [M+23]等。) 5H δ 8. 0 (1H,d. J=) ** 3′ 、 4′ OR取代不同， 6H δ (1H,dd, J=8. 0。439。539。O RO RO R239。639。339。439。539。a β 二 氫 黃 酮 二 氫 黃 酮 醇 查 耳 酮 1HNMR譜在黃酮結(jié)構(gòu)研究中的應用 OOO HO ROOO HO HO HHABCOH5AOHO HA67857O R239。4567CC2332C23OO HHHOO HO HHOHH4562 39。5 39。2 39。 DMSOd6 樣品（苷、苷元）不需制備成衍生物，可以顯示各酚羥基質(zhì)子特征。 ? 羥基乙?；螅阴；奈娮饔?，使原來酚羥基對共軛系統(tǒng)的供電能力消失，對光譜的影響亦將完全消失。 ? 羥基甲基化或苷化后，原酚羥基的供電能力下降，引起相應的吸收峰紫移。 黃酮（醇）： 帶 II、帶 I均強 母核光譜特征 二氫黃酮類、異黃酮類：帶 II強、 帶 I弱 母核的推斷 （甲醇） 查耳酮、橙酮：帶 II弱、帶 I強 取代基： OH等，為助色團 依紅移規(guī)律推斷取代基團 甲醇鈉：強堿，所有酚羥基解離 醋酸鈉：堿性弱，酸性強的酚羥基解離 加入診斷試劑 醋酸鈉 /硼酸：鄰二酚羥基絡和 相應吸收峰紅移 三氯化鋁： 3OH， 4羰基 5OH， 4羰基 絡和 鄰二酚羥基 OOROOROOR++ 苯甲酰系統(tǒng) 桂皮酰系統(tǒng) （帶 II 220~280nm） （帶 1 300~400nm） 黃酮類化合物結(jié)構(gòu)中的交叉共軛體系 OOBOORAB 二氫黃酮（醇） 異黃酮（二氫） （由 B環(huán)產(chǎn)生的桂皮酰系統(tǒng)不存在，帶 I弱，帶 II強） ″ 黃酮類化合物在甲醇中紫外光譜特征 黃酮類化合物母核 UV吸收特征 母核類型 帶 II （ nm） 帶 I （ nm） 備注 黃酮 250~280（強） 304~350（強） 典型的交叉共軛系統(tǒng) 黃酮醇（ 3OH取代） ″ 328~357（ 強 ） 3OH供電減弱，使黃酮 黃酮醇（ 3OH游離） ″ 358~385（強） 3OH供電共軛 ↑ ， 帶 1紅移 異黃酮 245~278（強） ( sh ) 桂皮酰系統(tǒng)破壞 二氫黃酮（醇） 270~295（強） ( sh ) 查耳酮 220~270（弱） 340~390（強） 橙酮 230~270（弱） 370~430（強） 花青素（苷） 270~280 465~560（可見區(qū)） （ 2）取代基團對共軛吸收的影響 ? 黃酮類核中引入 OH（酚羥基）等供電基團，使共軛程度增強，相應的吸收峰紅移。 如為苷類，則可水解或甲基化后再水解，并測定苷元或其衍生物的紫外光譜。 （二）薄層色譜（ TLC） 各種色譜的檢識： 日光下觀察 —多數(shù)黃酮有黃色斑點 紫外光下觀察 —多數(shù)黃酮呈黃綠色熒光斑點 氨蒸氣熏 —多數(shù)黃酮有顏色變化 噴顯色劑（ 2%AlCl3甲醇液） —多數(shù)黃酮黃色變深，熒光加強 第五節(jié)． 黃酮類化合物的結(jié)構(gòu)研究 一 . 紫外可見光譜在黃酮類化合物結(jié)構(gòu)測定中的應用 一般鑒定程序： 先測定在甲醇中的光譜。 應用：適用于各種黃酮類化合物的分離 原理：反相柱色譜（黃酮類化合物極性大） 固定相： ODS 流動相：水 乙晴，水與甲醇不同比例 6．高效液相色譜法（ HPLC） 第四節(jié)．黃酮類化合物的檢識 一．理化檢識 ：多呈黃色 ：鹽酸 鎂粉反應 黃酮、黃酮醇、二氫黃酮 二氫黃酮醇（ +） 四氫硼鈉反應 二氫黃酮（醇）類（ +） 五氯化銻 查耳酮類（ +） ：鋯鹽 枸櫞酸反應 3OH（ +） 5OH（ ） 黃酮鑒別 氨性氯化鍶反應 鄰二酚羥基（ +） 二 .色譜檢識 （一）紙色譜（ PPC） 原理：分配原理 適用范圍：游離黃酮（苷元）及黃酮苷的分離鑒別 雙相色譜 第 I向 醇性展開劑 第 II向 水性展開劑 （ BAW、 TBA、水飽和正丁醇） （ 2~8%HAc、 3%NaCl、 1%HCl） 正相色譜 反相色譜 固定相（水）極性 流動相 （ **有認為是吸附原理）？？ Rf規(guī)律：極性小的化合物 Rf大 極性大的化合物 Rf大 苷元（ ） 單糖苷 雙糖苷（ ） 苷元中，平面型分子 非平面型分子 Rf規(guī)律與左邊相反 母核相同， 2OH 3OH 4OH 5 OH黃酮 苷元的分離鑒別