蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾ppt課件(參考版)
2025-05-06 06:14本頁面
【正文】 三、在雜化實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用 催化亞基 Cn 四硝基甲烷 硝化亞基 （活力保持 80～ 90%） 磷酸吡哆醛 吡哆醛化亞基 四氫鄰苯 二甲酸酐 ?；呋瘉喕? 催化亞基 Cn 調(diào)節(jié)亞基 R 修飾亞基 Ct 重組 Cn— R— Cn Cn— R— Ct Ct— R— Ct （活力喪失 90%） 重組分子（雜化分子） 。 普遍采用的是用溴化氰專一裂解 Met的羧基所形成的肽鍵。 如果要增加胰蛋白酶水解位置。 二、在蛋白質(zhì)序列分析中的應(yīng)用 （一）控制酶解程度 用三氟乙酰法將 Lys的 εNH2保護(hù)起來 變成酶不能水解的產(chǎn)物。 第七節(jié) 蛋白質(zhì)化學(xué)修飾的應(yīng)用 一、用來測定蛋白質(zhì)分子中某種氨基酸的數(shù)量 常用方法 : 對氯苯甲酸與巰基作用； 三硝基苯磺酸與氨基作用 。 影響光敏化反應(yīng)效率和選擇性的主要因素是敏化劑對蛋白質(zhì)的結(jié)合作用。 敏化光氧化的反應(yīng)機(jī)理，有兩種解釋： 。 第六節(jié) 蛋白質(zhì)氨基酸的敏化光氧化 蛋白質(zhì)的敏化光氧化：當(dāng)敏化劑與蛋白質(zhì)共存時(shí)，若用可見光照射，則敏化劑產(chǎn)生化學(xué)變化，使蛋白質(zhì)側(cè)鏈氧化。 8疊氮腺苷三磷酸 芳基疊氮 β丙氨酸 NAD 試劑中的光親和基團(tuán) 是通過核糖的羥基連 接的。 OOPOOO HNNNNC H 2ON H C O C H 2 B rO HC H N H（三）光親和試劑是一類特殊的外生親和試劑。 OOOOOPOC H 2A d e n S F腺苷 5′(對 氟磺酰苯酰 磷酸 ） 這類試劑對賴氨酸 和酪氨酸的反應(yīng)性 很強(qiáng)。 二、外生親和試劑 （一）將鹵代烷基衍生物通過腺嘌呤的 N6連到腺嘌呤 上，則可形成有效的外生親和試劑。 嘌呤核苷酸的烷基鹵化衍生物也可看作是親和試劑，各種親和側(cè)鏈如 Cys、 His、 Lys、 Met等能與試劑上的鹵原子反應(yīng)。 親和試劑作為底物類似物的標(biāo)準(zhǔn)： ，親和試劑要與酶形成可逆復(fù)合物； ； ，應(yīng)減弱親和試劑的反應(yīng)速 度； ，否則產(chǎn)生空間位阻； ，便于表征和定量。 測定酶的活性部位。 可測定齊聚體蛋白質(zhì)的分子量和亞基數(shù)目。 兩種酶通過交聯(lián)形成雜化酶。 這類交聯(lián)劑一端一般含有能與氨基或巰基反應(yīng)的基團(tuán)，而另一端則含有對光敏感的基團(tuán)。 COON( C H 2 ) 3 OO2 N羥琥珀酰亞胺辛二酸酯 （非裂解） CSO( C H 2 ) 2SONOONN琥珀酰胺 3（ 2吡啶二硫代 )丙酸酯 （三）可被光活化的試劑 這類試劑是異型雙功能試劑的擴(kuò)展。 雙亞氨酸酯（非裂解） 二甲基 3， 3′二硫代 雙丙基亞氨酯（可裂解） （二）異型雙功能試劑 這類試劑的一端與氨基作用，另一端與巰基側(cè)鏈作用，但用碳二亞胺時(shí)，另一端反應(yīng)基團(tuán)是羧基。兩端間的間隔基團(tuán)是（ CH2） n OCN H 2( C H 2 ) nC lC H 3O C C H 3N H 2 C l若間隔基團(tuán)含有二硫橋，則成為可裂解同型雙功能試劑。 二、交聯(lián)劑的類型 交聯(lián)劑 類型 同型雙功能試劑 異型雙功能試劑 可被光活化試劑 . 可裂解性 不可裂解性 反應(yīng)基團(tuán) 間隔基團(tuán) 反應(yīng)基團(tuán) C H 3 O CN H 2C H 3 O CN H 2同型雙功能試劑 (CH2)n，長度可變 SSN異型雙功能試劑 （
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