蛋白質(zhì)的化學(xué)二ppt課件(參考版)
2025-05-10 13:49本頁面
【正文】 此三肽與 FDNB反應(yīng)隨后用酸水解產(chǎn)生 DNPGly，試寫出此八肽的氨基酸序列。用胰蛋白酶裂解產(chǎn)生兩個(gè)三肽（ Lys、Ala、 Ser）和（ Gly、 Phe、 Lys）以及一個(gè)二肽。 + + 第二向 第一向 a b Brown和 Hartlay對(duì)角線電泳圖解 圖中 a、 b兩個(gè)斑點(diǎn)是 由一個(gè)二硫鍵斷裂 產(chǎn)生的肽段 二硫鍵位置的確定 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)分析例題 1: 從真菌中分離得到一種八肽 ,氨基酸分析表明它是由 Lys、 Lys、Tyr、 Phe、 Gly、 Ser、 Ala、 Asp組成。在這里，大多數(shù)肽段的遷移率未變，并將位于濾紙的一條對(duì)角線上，而含半胱氨磺酸的肽段比原來含二硫鍵的肽小而負(fù)電荷增加，結(jié)果它們都偏離了對(duì)角線。這時(shí)每個(gè)含二硫鍵的肽段被氧化成 一對(duì)含半胱氨磺酸的肽 。 二硫鍵位置的確定 對(duì)角線電泳 ： 把水解的混合肽段點(diǎn)到濾紙中央，在，進(jìn)行第一向電泳，肽段將按其大小及電荷的不同分離開來。 將所得的肽段利用 對(duì)角線電泳技術(shù)進(jìn)行分離。 確定原多肽鏈中二硫鍵的位置。 測(cè)定各肽段的氨基酸序列 ?基本方法： Sanger法 Edman降解法 DNSEdman測(cè)序法 ?蛋白質(zhì)順序儀測(cè)序 Edman化學(xué)降解法 N= C=S + CH C R1 H2N O CH C R2 HN O HN 肽 PH=9 NH C CH C R1 HN O CH C R2 HN O HN 肽 S 第一步 偶聯(lián)反應(yīng)： PTC肽（苯氨基硫甲酰肽） 第二步 環(huán)化斷裂反應(yīng)： CF3COOH（強(qiáng)酸性） 無水 NH C CH R1 HN C=O S + CH R2 H3N O HN 肽 C + + ATZ（噻唑啉酮苯胺） 減少一個(gè)殘基的肽 N C CH C R1 HN O CH C R2 HN O HN 肽 S PTC肽 H 第三步 環(huán)化反應(yīng)： NH C CH R1 HN C=O S + ATZ H2O 1mol/L HCl NH C CH C R1 HN O OH S [ ] PTC氨基酸 N C= CH R1 NH O = C S PTH氨基酸（苯乙內(nèi)酰硫脲氨基酸） 注： 1. PTH氨基酸可用各種層析技術(shù)分離 . 2. 反應(yīng)的多肽的羧基與不溶性樹脂偶聯(lián)，這樣多肽掛在樹脂上，便于前一輪反應(yīng)后剩下多肽的回收。 羥胺 （ NH2OH）： 專一性斷裂 AsnGly之間的肽鍵 。 ? R1或 R3=Pro 水解受抑。 Leu， Ile, Met以及其它疏水性強(qiáng)的氨基酸水解速度較快。 Leu以及其它疏水性氨基酸水解速度較快。 ? R1= Leu， Met和 His水解稍慢。 酶解法 ： 如胰蛋白酶 胰凝乳蛋白酶 化學(xué)法 ： 如溴化氰法 羥胺法 裂解多肽鏈成較小的片段 胰蛋白酶 N H C H COR 4N H C H COR 3N H C H COR 2N H C H COR 1? R1=Lys和 Arg側(cè)鏈 (即 Lys和 Arg的羧基參與形成的肽鍵 )（專一性較強(qiáng)，水解速度快）。 羧肽酶是一類肽鏈外切酶，它專一地從肽鏈的 C－端依次切下一個(gè)氨基酸殘基，釋放出游離的氨基酸。 注 :末端若為 半胱氨酸、天冬酰胺、精氨酸 在肼解過程中易被破壞。 鑒定多肽鏈 N－末端 、 C－末端氨基酸殘基 Sanger法 （ 二硝基氟苯反應(yīng) ） DNS法 （ 丹磺酰氯反應(yīng) ） Edman法 （ 異硫氰酸苯脂反應(yīng) ） 氨肽酶法 肼解法 羧肽酶法 LiBH4還
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