蛋白質(zhì)化學(xué)ppt課件(2)(參考版)
2025-05-07 12:08本頁面
【正文】 (9)確定原多肽鏈中二硫鍵的位置 例題： ? 第一套肽段： QGS PS EQVE RLA HQWT； ? 第二套肽段： SEQ WTQG VERL APS HQ； ? N末端 H肽段， C末端為 S肽段； ? 則多肽鏈的順序： HQWT QGS EQVE RLA PS； 層析法 是利用被分離樣品中各組分的化學(xué)性質(zhì)的差別，使各組分以不同 比例 分布在兩個 物質(zhì)相 中 ； 其中一個相固定在一定的支持介質(zhì)上，稱為 固定相 ；另一個是移動的，稱為 移動相； 移動相 攜帶樣品流過 固定相 時，在流動過程中由于各組分在 兩相中分配比例 不同，從而以不同速度前進，達到分離的目的（產(chǎn)生分離效果）； 氨基酸的分離技術(shù) 層析法的原理 ? 原理： 此方法以濾紙為支持物，以濾紙纖維所吸附的水為固定相，以水飽和的有機溶劑為移動相 .將氨基酸的混合樣品點于濾紙上。此法的特點是能夠丌斷重復(fù)循環(huán)，將肽鏈 N端氨基酸殘基逐一迚行標記和解離。 末端基氨基酸測定 ? 肼解法 H 2 N C H CR OH N C H CR O OR nCC HH N O Hn 1N 端氨基酸 C 端氨基酸OR nCC HH 2 N O HH 2 N C H CR ON H N H 2 +H+N H 2 N H 2氨基酸酰肼 C 端氨基酸2. 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定 (6)多肽鏈斷裂成多個肽段 ? 可采用兩種或多種不同的斷裂方法將多肽樣品斷裂成兩套或多套肽段或肽碎片，并將其分離開來。多肽與肼在無水條件下加熱， C端氨基酸即從肽鏈上解離出來，其余的氨基酸則變成肼化物。 DNS氨基酸不需提取 ,直接用紙電泳或 TLC鑒定。 O O C C H C H 2 S HN H 3+ O O CC H C H 2 SN H 3 +O C C H 2OC H 2O O C C H C H 2 SN H 3+C H 2 C N H 2O O O CC H C H 2 SN H 3 +C H 2 O C C lOC H 2 C lI C H 2 C N H 2O巰基（SH）的保護 (4)測定每條多肽鏈的氨基酸組成 ? 分離、純化的多肽鏈一部分樣品進行完全水解，測定它的氨基酸組成，并計算出各種氨基酸的分子比； (5)分析多肽鏈的 N末端和 C末端 測定氨基酸組成 ? Sanger Reagent。 (3)二硫鍵的斷裂 ? Reduction or Oxadation :應(yīng)用 過甲酸氧化法 或 ?巰基乙醇 還原法 拆分多肽鏈間的二硫鍵。 ? 幾條多肽鏈借助非共價鍵連接在一起，稱為寡聚蛋白質(zhì)，如，血紅蛋白為四聚體，烯醇化酶為二聚體；可用 8mol/L尿素或 6mol/L鹽酸胍 處理，即可分開多肽鏈 (亞基 ). (2)測定蛋白質(zhì)分子中亞基的數(shù)目。 ； ，推斷出 完整肽的氨基酸順序 。 片段重疊法的大體步驟： （亞基）的拆分； ； ，確定其肽鏈數(shù)目、 N末端、 C末端。 測定蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)的要求 ? 樣品必需純（ 97%以上）； ? 知道蛋白質(zhì)的分子量； ? 知道蛋白質(zhì)由幾個亞基組成； ? 測定蛋白質(zhì)的氨基酸組成；并根據(jù)分子量計算每種氨基酸的個數(shù)。 蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的測定 從 1953年英國 順序。 ? 用幾種 標準蛋白質(zhì) 相對分子質(zhì)量的對數(shù)，對相應(yīng)的相對遷移率作圖，得到 標準曲線 。 ? 此法僅適用于 球狀分子的相對分子質(zhì)量測定。當用洗脫液洗脫時，被排阻的相對分
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