【正文】 小分子在顆粒網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中穿 來穿去 ,歷程長 ,后洗脫下來 ,洗脫體積大 . 110 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 測定蛋白質(zhì)分子量一般用葡聚糖 ,商品名 :Sephadex 先測得幾種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的洗脫體積 〔 Ve〕 以相對分 子質(zhì)量對數(shù) (logM)對 Ve作圖 ,得一標(biāo)準(zhǔn)曲線 一定范圍內(nèi) : Ve ＝ K1－ K2logM 再測出未知樣品洗脫體積 〔 Ve〕 從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可查出樣品蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量 111 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University C） SDSPAGE電泳法： 用幾種標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì) 相對分子質(zhì)量的對 數(shù)值對它們的遷移 率作圖，測出待測 樣品的遷移率，從 標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣 品的相對分子量 . d)生物質(zhì)譜法 更準(zhǔn)確的分子量測定方法 112 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 四、蛋白質(zhì)的含量測定 (Kjedahl) 酚試劑法 (Lowry)， 25～ 250 μg/mL ， ～ 10 mg/mL 280nm有最大吸收 蛋白質(zhì)濃度 (mg/mL)=( A280 A260) 稀釋倍數(shù) 113 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University .蛋白質(zhì)將 Cu2+還原為 Cu+再和BCA(4,4二羧酸 2,2二喹啉鈉 )反應(yīng)生成紫色物質(zhì) .562nm讀數(shù) .101000μg/mL .考馬斯亮藍 G250與蛋白質(zhì)結(jié)合后由淡紅色變成藍色化合物 ,595nm讀數(shù) .25200μg/mL. 速度快重復(fù)性好 讀數(shù)法都要做標(biāo)準(zhǔn)曲線 114 。兩碎片之差為 56加 R基大小 24 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 二 蛋白質(zhì)的構(gòu)象 (conformation) 蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)不具有功能 ,只有形成正確的結(jié)構(gòu)才具有功能 . 二級結(jié)構(gòu)以上的結(jié)構(gòu)叫高級結(jié)構(gòu) ,高級結(jié)構(gòu)是指各原子或基團在空間上的分布 ,所以又叫空間結(jié)構(gòu) ,或三維結(jié)構(gòu) 可分為 :二級結(jié)構(gòu) ,三級結(jié)構(gòu) ,四級結(jié)構(gòu) 25 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University (一 )蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu) (secondary structure) 蛋白質(zhì)的二級結(jié)構(gòu)是指肽鏈的主鏈在空 間的排列 ,或規(guī)則的幾何走向、旋轉(zhuǎn)及 折疊 . 只涉及肽鏈主鏈的構(gòu)象及鏈內(nèi)或鏈間形成的氫鍵 . 主要有 ?螺旋、 ?折疊、 ?轉(zhuǎn)角 . 26 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 螺旋 (αhelix) 由肽鍵平面盤旋形成的螺旋狀構(gòu)象 Pauling和 Corey于 1965年提出 27 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 結(jié)構(gòu)要點： a) 天然蛋白質(zhì)中螺旋的方向大都為 右手螺旋 (僅在嗜熱菌蛋白酶中發(fā)現(xiàn)了一段左手螺旋 ). b) 每 螺旋上升一圈 ,每圈螺旋的高度為 nm,每個氨基酸殘基沿軸上升 ,肽鍵平面與中心軸平行 . c) 肽鏈內(nèi)形成氫鍵，氫鍵的取向幾乎與軸平行，第一個氨基酸殘基的 CO基與第四個氨基酸殘基的 NH基形成 氫鍵 .是穩(wěn)定螺旋的主要作用力 d) 主鏈 原子構(gòu)成螺旋的 主體 ,側(cè)鏈 在其 外部 28 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 影響 α 螺旋穩(wěn)定性的因素： a) 在多肽鏈中連續(xù)的出現(xiàn)帶 同種電荷 的極性氨基酸，阻止氫鍵形成， α 螺旋就不穩(wěn)定 b) Pro的 N上缺少 H，不能形成氫鍵，它改變多肽鏈的方向并 終止螺旋 c) Gly的 R基太小，難以形成 α 螺旋所需的兩面角，也是螺旋的最大 破壞者 d) 肽鏈中 連續(xù)出現(xiàn)帶龐大側(cè)鏈的氨基酸 如 Ile，由于空間位阻，也難以形成 α 螺旋 e) pH的影響 29 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University （ 4條 α螺旋）原纖維 微原纖維 巨原纖維 紡錘體型皮質(zhì)細胞 角質(zhì)膜 皮質(zhì) 髓質(zhì) 頭發(fā) 頭發(fā)結(jié)構(gòu) 燙發(fā)的生物化學(xué)過程 30 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 折疊 (βpleated sheet) ?折疊是由兩條或多條幾乎完全伸展的肽鏈平行排列 ,通過鏈間氫鍵交聯(lián)形成 .肽鏈的主鏈呈 鋸齒狀 折疊構(gòu)象 . 31 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University ?折疊的結(jié)構(gòu)要點： a) 肽鍵平面呈 鋸齒狀 排列 ,側(cè)鏈Ｒ基團交錯分布在片層平面的兩側(cè) b) 由鏈間 氫鍵維持 穩(wěn)定 .其方向與折疊的長軸接近垂直 . c) 有兩種類型 :平行式 ,即所有肽鏈的 N端都在同一邊 : 反平行式 ,即相鄰肽鏈的方向相反 d) 每一個氨基酸在主軸上所占的距離 ,平行的是 ,反平行的是 平行式更穩(wěn)定 . 32 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 3.?轉(zhuǎn)角 (β turn) 也稱 ?回折或發(fā)夾結(jié)構(gòu)，存在于球狀蛋白中 a) 在 ?轉(zhuǎn)角部分，由 四個氨基酸殘基 組成 b) 彎曲處的第一個氨基酸殘基的 C=O和第四個殘基的 – NH之間形成氫鍵，維持構(gòu)象 . c) 經(jīng)常出現(xiàn)在連接反平行β 折疊片的端頭 . 33 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University (random coil) 自由回轉(zhuǎn) 無規(guī)律的松散肽鏈結(jié)構(gòu) .常常是酶的活性部位 34 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 環(huán) 新發(fā)現(xiàn)的一種二級結(jié)構(gòu) ,形狀象希臘字 Ω. 這種結(jié)構(gòu)總是出現(xiàn)在蛋白質(zhì)分子的表面 ,在分子識別中可能起重要作用 . 35 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 36 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University (二 )超二級結(jié)構(gòu) ? 指二級結(jié)構(gòu)的基本結(jié)構(gòu)單位 (α 螺旋 ,β 折疊等 )相互聚集 ,形成有規(guī)律的在空間上能辨認的聚集體 . 是氨基酸側(cè)鏈相互作用的結(jié)果 . ? 已知的超二級結(jié)構(gòu)主要有 αα,βαβ,β曲折和 β折疊筒等 . ? 超二級結(jié)構(gòu)在結(jié)構(gòu)層次上高于二級結(jié)構(gòu)，但沒有聚集成具有功能的結(jié)構(gòu)域． 又稱基序或模塊（ motifs） 37 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 38 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University (三 )結(jié)構(gòu)域 (structural domain) 多肽鏈在超二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上進一步繞曲折疊成緊密的近似球形的結(jié)構(gòu) ,具有部分生物功能 . 是球狀蛋白質(zhì)的折疊單位 . 39 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 40 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University ? 結(jié)構(gòu)域一般由 100200個 aa組成 ,氨基酸可以連續(xù) ,也可以不連續(xù) ． ? 結(jié)構(gòu)域之間常形成裂隙 ,比較松散 ,往往是蛋白質(zhì)優(yōu)先被水解的部位 .酶的活性中心往往位于兩個結(jié)構(gòu)域的界面上 ． ? 可作為結(jié)構(gòu)單位進行 相對獨立的運動 ,水解后仍能維持穩(wěn)定的結(jié)構(gòu) ,甚至保留某些生物活性． ? 對于 較小的蛋白質(zhì) 分子 ,結(jié)構(gòu)域與三級結(jié)構(gòu)等同 ,即這些蛋白為單結(jié)構(gòu)域 . ? 結(jié)構(gòu)域有時也稱 功能域 ,功能域是指有功能的部分 .功能域可以是一個結(jié)構(gòu)域 ,也可以是兩個或兩個以上的結(jié)構(gòu)域組成 . 41 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University (四 )三級結(jié)構(gòu) (tertiary structure) 指多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上進一步盤旋、 折疊 ,從而生成特定的空間結(jié)構(gòu) .包括主鏈 和側(cè)鏈的 所有原子的空間排布 ． 一般非極性側(cè)鏈埋在分子內(nèi)部 ,形成疏水核， 極性側(cè)鏈在分子表面． 42 2022年 5月 30日 8時 54分 煙臺大學(xué)藥學(xué)院 School Pharmacy of Yantai University 43 202