生化蛋白質(zhì)化學(xué)ppt課件(參考版)
2025-05-04 13:01本頁面
【正文】 第十節(jié) 蛋白質(zhì)分離純化及測定 一 . 蛋白質(zhì)分離純化的方法 根據(jù)分子大小 根據(jù)溶解性 根據(jù)電荷 根據(jù)吸附力 根據(jù)特異性親和力 透析 /超過濾法 密度梯度離心法 凝膠過濾法 PI沉淀法 鹽溶和鹽析法 電泳法 離子交換法 凝膠過濾法 ?凝膠過濾所用介質(zhì)為凝膠珠，其內(nèi)部為多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu) ?一定型號的凝膠網(wǎng)孔大小一定，只允許相應(yīng)大小的分子進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，大分子則被排阻在外 ?洗脫時(shí)大分子隨洗脫液從顆粒間隙流下來，洗脫液體積??；小分子在顆粒網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中穿來穿去，歷程長，后洗脫下來，洗脫體積大 ?測定蛋白質(zhì)分子量一般用葡聚糖，商品名： Sephadex 二 . 蛋白質(zhì)濃度測定的方法 福林試劑：磷鉬酸 磷鎢酸將福林試劑還原，產(chǎn)生磷鉬藍(lán)和磷鎢 藍(lán)混合物。 六 .蛋白質(zhì)的紫外吸收 蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)pH條件下，不發(fā)生電泳現(xiàn)象。因此，大多數(shù)蛋白質(zhì)在280nm 附近顯示強(qiáng)的吸收。這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的變性 . 五 .蛋白質(zhì)的變性 大部分蛋白質(zhì)均含有帶芳香環(huán)的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸。 蛋白質(zhì)的性質(zhì)與它們的結(jié)構(gòu)密切相關(guān)。 二 . 蛋白質(zhì)的兩性離解和電泳現(xiàn)象 三 .蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì) 四 .蛋白質(zhì)的沉淀作用 ?蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性與它的分子量大小、 所帶的電荷和水化作用有關(guān)。蛋白質(zhì)溶液具有膠體溶液的典型性質(zhì)，如丁達(dá)爾現(xiàn)象、布郎運(yùn)動等。這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)電泳(Electrophoresis)。 在不同的 pH環(huán)境下，蛋白質(zhì)的電學(xué)性質(zhì)不同。 酶法 HNCHCONHCHCO—— R1 R2 胰酶： R1 = 胰凝乳酶： R1= 胃酶： R1 R2= 嗜熱菌蛋白酶： R2= Glu酶： R1= Arg酶： R1=Arg 第七節(jié) 蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu) 二級結(jié)構(gòu) 超二級結(jié)構(gòu) 結(jié)構(gòu)域 三級結(jié)構(gòu) 四級結(jié)構(gòu) 高級結(jié)構(gòu) α螺旋 β折疊 β轉(zhuǎn)角 自由回折 高級結(jié)構(gòu)的概念： 1. α螺旋 一 . 二級結(jié)構(gòu) 要點(diǎn)： 螺旋的角度與高度 維持螺旋的作用力 影響螺旋穩(wěn)定的因素 螺旋的種類 2. β折疊 要點(diǎn)： 肽鏈的走向（種類） 殘基軸心距離 維持的作用力 影響螺旋穩(wěn)定的因素 氫鍵 1800的回轉(zhuǎn) α α ββ βαβ 二 .超二級結(jié)構(gòu) β β β 三 .三級結(jié)構(gòu) 要點(diǎn)： 形狀 折疊 作用力 四 .四級結(jié)構(gòu) 一級結(jié)構(gòu) → 二級結(jié)構(gòu) → 超二級結(jié)構(gòu) → 結(jié)構(gòu)域 → 三級結(jié)構(gòu) → 亞基 → 四級結(jié)構(gòu) 第八節(jié) 蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)與功能 一 .一級結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 C與生物進(jìn)化 二 .蛋白質(zhì)的構(gòu)象與功能的關(guān)系 三 .個(gè)別蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能 —— 角蛋白 第九節(jié) 蛋白質(zhì)的性質(zhì) 一 .蛋白質(zhì)的分子大小 據(jù)其百分含量可計(jì)算出最低相對分子質(zhì)量： 最小相對分子質(zhì)量＝ （成分的相對分子或原子質(zhì)量） 已知成分的百分含量 一個(gè) S單位，為 1 1013秒 蛋白質(zhì)的沉降系數(shù)： 1～ 200S，相對分子質(zhì)量越大， S值越大 由沉降系數(shù) S可根據(jù)斯維得貝格 〔 Svedberg〕 方程計(jì)算蛋白質(zhì)分子的相對分子質(zhì)量： M=RST/D〔 1－ iρ〕 R：氣體常數(shù) T：絕對溫度 D：擴(kuò)散系數(shù) ρ：溶劑的密度 S= dx/dt ω2x 蛋白質(zhì)與多肽一樣，能夠發(fā)生兩性離解，也有等電點(diǎn)。肼化物能夠與苯甲醛縮合成不溶于水的物質(zhì)而與 C端氨基酸分離 。 （二） .羧基參與的反應(yīng) —— 肼解反應(yīng) H 2 N C H CR OH N C H CR O OR nCC HH N O Hn 1N 端氨基酸 C 端氨基酸OR nCC HH 2 N O HH 2 N C H CR ON H N H 2 +H+N H 2 N H 2氨基酸酰肼 C 端氨基酸 此 法是多肽鏈 C端氨基酸分析法。 ） pK 丙氨酸的滴定曲線 三 .氨基酸的化學(xué)反應(yīng) （一） .氨基參與的反應(yīng) R C H N H 3 +
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1