蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾ppt課件-在線瀏覽
2025-06-20 06:14本頁面
【正文】 3羧乙基組氨酸 1， 3二羧乙基組氨酸 HENZNN + C C H 3CC H 2OOOOO C H 2 C H 3pH 4～ 7 +HOC H 2C H 3 C O 2+ 焦碳酸二乙酯 碘乙酸 I C H 2 C O O + I C H 2 C O O +C C H 3C H 2E N ZNN OO用碘乙酸烷化組氨酸 殘基可得單取代或雙 取代衍生物。 NH2OH+ pH =7 C C H 3C H 2E N ZNN OOHE N ZNN C C H 3C H 2H NOH OO+ 羥胺 六、色氨酸吲哚基的修飾 （一） N溴琥珀酰亞胺（ NBS）常用來修飾色氨酸。酪氨酸也能與 NBS作用。 應(yīng)注意 的問題 該試劑在水介質(zhì)、高 pH下不穩(wěn)定，迅速水解為 CO2和乙醇。 羥胺不能使雙取代物發(fā)生可逆反應(yīng)，而是清除咪唑環(huán)。 七、酪氨酸酚基的修飾 四硝基甲烷在溫和條件下可高度專一地硝化酪氨酸殘基，產(chǎn)生可電離的發(fā)色基團(tuán) 3硝基酪氨酸。 九、絲氨酸羥基的修飾 甲苯磺酰氟（ PMSF)可與絲氨酸殘基作用。 一、設(shè)計(jì)或選擇交聯(lián)劑要考慮的因素 （一）反應(yīng)的專一性 交聯(lián)劑 分為 同型雙功能試劑 異型雙功能試劑 （二）交聯(lián)距離 隨著交聯(lián)劑兩個(gè)功能基之間距離跨度的增加，形成交聯(lián)的可能性也隨之增加。 （四）反應(yīng)活性部分 可以在某種程度上控制交聯(lián)劑的反應(yīng)部位，可以通過交聯(lián)劑反應(yīng)活性部位的疏水性、親水性或電荷來控制反應(yīng)。 雙亞氨酯，可與氨基反應(yīng)。 CS C H 3ON H 2 C l( C H 2 ) 2C SC H 3 ON H 2 C l( C H 2 ) 2所有同型雙功能試劑都對氨基有專一性，但戊二醛例外，它除了與氨基反應(yīng)外，還可與羥基反應(yīng)。 這類交聯(lián)劑的一端含有氨基反應(yīng)部分， N羥琥珀酰亞胺，另一端含有巰基反應(yīng)部分，馬來酰亞胺或聯(lián)硫基。 當(dāng)交聯(lián)劑一端的反應(yīng)基團(tuán)與蛋白質(zhì)作用之后，經(jīng)光照另一端則產(chǎn)生一個(gè)反應(yīng)活性部分，這部分即可是碳烯，也可是氮烯。 三、交聯(lián)劑的使用 蛋白質(zhì)與交聯(lián)劑的反應(yīng)直接有助于蛋白質(zhì)構(gòu)象的穩(wěn)定性 交聯(lián)劑可用來測定蛋白質(zhì)亞基的量 能形成分子間的交聯(lián)鍵，使蛋白質(zhì)對變性穩(wěn)定。 交聯(lián)可提高酶分子構(gòu)象的穩(wěn)定性。 測定蛋白質(zhì)上殘基間的距離。 第五節(jié) 親和標(biāo)記 親和標(biāo)記：部位專一性標(biāo)記，是利用酶和底物的親和性，使用與酶底物類似的修飾劑，對酶活性部位上的氨基酸殘基進(jìn)行共價(jià)標(biāo)記。 親和試 劑分類 內(nèi)生親和試劑 外生親和試劑 一、內(nèi)生親和試劑 IO4 +ENZ(CH2)4NH2 NaBH4 OATP 與氨基反應(yīng) 過碘酸氧化的 ATP（ OATP） 與氨基側(cè)鏈的可能反應(yīng) 希夫堿化合物 OOO H O HN H 2NNNNC H 2OPOOOON H 2NNNNC H 2POOHHOO POOOO P OOC COOON H 2NNNNC H 2HHORC( C H 2 ) 4 E N ZCNOO HN H 2NNNNC H 2OR( C H 2 ) 4 E N ZC H 2H 2 CH N+ENZ(CH2)4NH2 +ENZCH2SH OATP OATP 與巰基反應(yīng) 與
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