【正文】 ? 該色譜條件下首次檢出了土霉素。 ? 如：鹽酸四環(huán)素 《 歐洲藥典 》 ： 4差向四環(huán)素 ≤%， 2乙酰 2去酰胺四環(huán)素≤%（該雜質(zhì)在四環(huán)素的峰尾流出），脫水四環(huán)素 ≤%，差向脫水四環(huán)素 ≤%。 ? 2022年版藥典標(biāo)準(zhǔn)中土霉素作為特定雜質(zhì)的單獨(dú)規(guī)定限度，因多批原料及片劑中均未檢出土霉素，故將土霉素作為其他雜質(zhì)控制，另增加對其他單個(gè)雜質(zhì)和總雜質(zhì)的限度控制。 ? 限度的確定 ? 限度是參考 。 ? 檢查 ? ? 有關(guān)物質(zhì)測定方法仍以 HPLC為主，但測定條件隨含量測定方法修改有所改變。 ? 鑒別 ? 一般采用 TLC/HPLC、 IR和氯化物反應(yīng)，部分品種增加了紫外鑒別。 ? 也可用于四環(huán)類抗生素的分析和鑒定。 ? (3) 四環(huán)類抗生素能與許多金屬離子形成有色絡(luò)合物。 ? (2) 堿性條件下 : ? 四環(huán)類抗生素在堿性溶液中放置一段時(shí)間，C環(huán)打開，生成無活性的具有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的異四環(huán)類抗生素。 ? ? ? 四環(huán)類抗生素在酸性（ ～ ）溶液中，A環(huán)上 4位手性碳原子構(gòu)型易發(fā)生差向異構(gòu)化反應(yīng)，形成差向化合物，四環(huán)素、金霉素、去甲環(huán)素等很容易差向化，形成 4差向異構(gòu)體， ? 土霉素由于 5位上的羥基和 4位上的二甲胺基易形成氫鍵，因而較穩(wěn)定，不易發(fā)生差向異構(gòu)化。 ? 性狀 ? 四環(huán)類抗生素都是結(jié)晶型物質(zhì)，分子內(nèi)含有蒽酮類發(fā)色團(tuán)，一般為黃色結(jié)晶性粉末，干燥的四環(huán)類游離堿和它們的鹽類都比較穩(wěn)定，但在貯存中遇光促使顏色變深，可能有降解物產(chǎn)生。分子中存在酚羥基和烯醇型羥基，顯弱酸性；同時(shí)含有二甲胺基，顯弱堿性，故遇酸及堿，均能生成相應(yīng)的鹽，臨床上大多采用鹽酸鹽。 ? （ 3）硫酸新霉素 硫酸核糖霉素及其制劑共 5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的含量測定采用微生物檢定法管碟法 . ? （ 4）鹽酸大觀霉素及其制劑共 2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的含量測定采用微生物檢定法濁度法 ? （ 5）其他 21個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的含量測定均采用微生物檢定法管碟法和微生物檢定法濁度法兩法并列，可任選一方法。 ? 含量測定 有以下五種形式，表 ? （ 1）硫酸卡那霉素，硫酸依替米星及其制劑共 7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的含量測定為 HPLCELSD方法。 ? 例如： 2022年版藥典中 。 圖 阿米卡星混合溶液的分離色譜圖 圖 BP2022阿米卡星項(xiàng)下系統(tǒng)適用性色譜 ? 硫酸鹽 ? 除部分品種仍采用原滴定方法，本版藥典首次采用 HPLCELSD方法對其進(jìn)行測定。 ? 盡管 ELSD檢測器在靈敏度上不如 UV檢測器，但較之 TLC其靈敏度要高得多。 ? 2022年版藥典采用的薄層色譜法 (TLC)測定有關(guān)物質(zhì)，屬于半定量方法，只能對雜質(zhì)進(jìn)行限度檢查，不能準(zhǔn)確測定樣品中單個(gè)雜質(zhì)和總雜質(zhì)量。 ? 例 1. 硫酸新霉素 ? 檢查羥苯乙酯 方法為 HPLC（限度： 80%120%） ? 例 2. 妥布霉素滴眼液 ? 檢查羥苯乙酯、羥苯丙酯、苯扎氯銨， 方法為 HPLC（限度： 80%120% ） ? 、組分 ? 有關(guān)物質(zhì)、組分、特定雜質(zhì)檢查方法修改為HPLCELSD方法的品種較多 ， ? 但有些品種如新霉素、鹽酸大觀霉素仍采用TLC法。 ? 滲透壓摩爾濃度 ? 2022年版藥典首先在抗生素類滴眼液 硫酸卡那霉素滴眼液標(biāo)準(zhǔn)中列入滲透壓檢查， ? 本版藥典將其擴(kuò)大為 4個(gè)滴眼液， ? 兩種表示方法并列 : ? 妥布霉素滴眼液、慶大霉素滴眼液和硫酸卡那霉素滴眼液（均為滲透壓摩爾濃度為 260320mOsmol/kg） ? 硫酸新霉素滴眼液（滲透壓摩爾濃度比為）。（供注射用） ? 無菌 取本品，加 ％無菌氯化鈉溶液制成每1ml中含阿米卡星 8mg的供試液，經(jīng)薄膜過濾法處理，用 －蛋白胨緩沖液分次沖洗（每膜不少于 500ml），以金黃色葡萄球菌為陽性對照菌，依法檢查（附錄 XI H），應(yīng)符合規(guī)定。（供注射用） ? ? 不溶性微粒 取本品 3g，加微粒檢查用水100ml，制成每 1ml中含 30mg的溶液，依法檢查（附錄 IX C）。 ? 、檢查 ? 供無菌分裝的原料標(biāo)準(zhǔn)正文中增加了 (1)可見異物、 (2) 、不溶性微粒、 (3)無菌。 ? 例 2. 阿米卡星 ? 【 鑒別 】 （ 1） TLC ? （ 2） HPLC ? （ 3） IR ? （ 4）硫酸鹽鑒別反應(yīng)。 ? 例 ? 【 鑒別 】 （ 1） TLC ? （ 2） HPLC ? （ 3）硫酸鹽鑒別反應(yīng)。 品種收載情況： 表 品種收載情況 原料 制劑 注射液 注射用 滴眼液 口服液 片 緩釋片 顆粒 妥布霉素 √ √* 硫酸小諾霉素 √ √ √ 硫酸巴龍霉素 √ 硫酸卡那霉素 √ √ √ 硫酸西索霉素 √ 硫酸慶大霉素 √ √ √ √ √ 硫酸阿米卡星 √ √ *為新增品種 原料 制劑 注射液 注射用 滴眼液 口服液 片 緩釋片 顆粒 阿米卡星 硫酸奈替米星 √ 硫酸依替米星 √ √ 硫酸核糖霉素 √ 硫酸鏈霉素 √ 硫酸新霉素 √ √ 鹽酸大觀霉素 √ 總計(jì) 14 8 6 4 1 4 1 1 關(guān)鍵檢測項(xiàng)目方法一覽： 表 檢測項(xiàng)目方法 原料 有關(guān)物質(zhì)（包括特定雜質(zhì)） 組分 硫酸鹽 含量測定 TLC HPLCELSD HPLCUV HPLCELSD HPLCUV HPLCELSD 滴定 妥布霉素 √ 微生物（ Ⅰ 、Ⅱ ） 硫酸小諾霉素 √ √ 微生物（ Ⅰ 、Ⅱ ） 硫酸巴龍霉素 √ 無 微生物（ Ⅰ 、Ⅱ ） 硫酸卡那霉素 卡 B √ ELSD 硫酸西索霉素 √ √ 微生物（ Ⅰ 、Ⅱ ） 硫酸慶大霉素 √ √ √ 微生物（ Ⅰ 、Ⅱ ） 硫酸阿米卡星 √ √ HPLCUV 阿米卡星 √ HPLCUV 原料 有關(guān)物質(zhì)（包括特定雜質(zhì)） 組分 硫酸鹽 含量測定 TLC HPLCELSD HPLCUV HPLCELSD HPLCUV HPLCELSD 滴定 硫酸奈替米星 √ √ 微生物（ Ⅰ 、Ⅱ ） 硫酸依替米星 √ √ HPLCELSD 硫酸核糖霉素 √ 微 1 硫酸鏈霉素 √ √ 微生物（ Ⅰ 、Ⅱ ） 硫酸新霉素 新霉胺 √ 微生物（ Ⅰ ） 鹽酸大觀霉素 √ 微生物（ Ⅱ ） ? 修訂情況概要 ? ? 一般采用 TLC法與硫酸鹽反應(yīng)， ? 含量測定或組分采用 HPLCELSD的方法時(shí)，也可用 HPLC作為鑒別， ? 個(gè)別品種也有用 IR作為鑒別反應(yīng)， ? 少數(shù)品種有顯色反應(yīng)鑒別。 ? 本類抗生素相對其他類抗生素而言穩(wěn)定性較好，制劑為注射液品種較多 。 ? 2022版藥典采用管碟法，本版藥典增加濁度法，兩法并列供選擇，在附錄中明確仲裁方法為 管碟法； ? 阿奇霉素系列由微生物法修訂為 HPLC法，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)規(guī)定“標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜圖應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致”； ? 羅紅霉素系列完善系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)，增加主峰與紅霉素的分離度，并明確與前相鄰雜質(zhì)峰（相對保留時(shí)間為 ）和后相鄰雜質(zhì)峰（相對保留時(shí)間為 ）位置； ? 依托紅霉素為紅霉素酯類衍生物，故在微生物法測定含量時(shí)，必須使藥物完全水解成紅霉素，有抗菌活性后，方能測定抑菌能力， ? 本版藥典進(jìn)行了充分研究后將水解條件由“ 37℃ 水浴中放置 6小時(shí)”修訂為“ 60℃ 水浴中放置 4小時(shí)”，縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。見表 。 ? ? 因制劑中某些輔料與硫酸也會發(fā)生顯色反應(yīng)，采用硫酸顯色法時(shí) ,采用自身對照法，以抵消輔料的干擾； ? 同時(shí)多組分品種亦采用自身對照法，以消除組分比例差異對結(jié)果的影響。 ? 共 25個(gè)制劑，其中 2個(gè)紅霉素腸溶制劑檢查釋放度，其他均檢查溶出度； ? 顆粒劑中包衣顆粒和非包衣顆粒制訂了相應(yīng)的溶出度檢查法（如羅紅霉素顆粒）； ? 混懸顆粒和干混懸劑根據(jù)溶出曲線考察結(jié)果決定是否定入標(biāo)準(zhǔn)。 4. 檢測波長 210nm ，并明確前相鄰雜質(zhì)峰（相對保留時(shí)間為 ）和后相鄰雜質(zhì)峰（相對保留時(shí)間為 ）位置 琥乙紅霉素 方法（ TLC法） ? 溶出度 ? 除乳糖酸紅霉素是供注射用外，其他均為口服制劑（片、膠囊、干混懸劑、顆粒）。 表 有關(guān)物質(zhì)測定 (1) 品種 方法（ HPLC） 丙酸交沙霉素 231nm 交沙霉素 231nm 克拉霉素 克拉霉素片 克拉霉素膠囊 克拉霉素顆粒 2．檢測波長 210nm 阿奇霉素 阿奇霉素干混懸劑 阿奇霉素片 阿奇霉素分散片 阿奇霉素膠囊 阿奇霉素顆粒 TLC法修訂為 HPLC法，無該項(xiàng)檢查的已增訂 （阿奇霉素 Gx為 A偕亞胺醚為 ）與不加校正因子（阿奇霉素 B和其他單個(gè)雜質(zhì)）的自身對照 210nm ，不同限度 紅霉素 （紅霉素烯醇醚為 1為 ）與不加校正因子的自身對照 215nm 乳糖酸紅霉素 注射用乳糖酸紅霉素 （紅霉素烯醇醚為 1為 ）與不加校正因子的自身對照 215nm 表 有關(guān)物質(zhì)測定 (2) 品種 方法（ HPLC） 硬脂酸紅霉素 硬脂酸紅霉素片 硬脂酸紅霉素膠囊 （紅霉素烯醇醚為 1為 ）與不加校正因子的自身對照 215nm 依托紅霉素 檢測波長 190nm 麥白霉素 A1為基準(zhǔn) ,外標(biāo)法計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)總量（不得過 25%） 檢測波長 232nm 麥白霉素片 A1為基準(zhǔn) ,外標(biāo)法計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)總量（不得過 30%） 232nm 麥白霉素膠囊 A1為基準(zhǔn) ,外標(biāo)法計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)總量（不得過 30%） 232nm 羅紅霉素 羅紅霉素片 羅紅霉素分散片 羅紅霉素膠囊 ，并對該峰定位。 ? 有關(guān)物質(zhì) ? 除琥乙紅霉素仍采用 TLC法外， 2022年版采用 TLC法的品種均修訂為 HPLC法，共 26個(gè)品種采用 HPLC法； ? 完善了 HPLC系統(tǒng)適用性要求，明確主峰與指定雜質(zhì)的分離度，確保方法的有效性和準(zhǔn)確性； ? ? 增加特定雜質(zhì)的控制（如阿奇霉素）和總雜的控制（如羅紅霉素）； ? 首次對紅霉素及其衍生物有關(guān)物質(zhì)檢測方法進(jìn)行了統(tǒng)一。 ? 測定方法 :HPLC，色譜柱 C1檢測波長 232nm ? 紅霉素、乳糖酸紅霉素、硬脂酸紅霉素 ? 紅霉素、乳糖酸紅霉素、硬脂酸紅霉素主要組分均為紅霉素 A、 B、 C . ? 測定方法： HPLC法，色譜柱 C18 , ? 檢測波長 215 nm； ? ? 3個(gè)品種規(guī)定限度相同： ? 紅霉素 A: 以無水物計(jì)不得少于 %，用對照品外標(biāo)法計(jì)算 . ? 紅霉素 B: 不得大于 5%,用加校正因子（ ）的自身對照法計(jì)算。紅霉素Ａ峰與紅霉素烯醇醚峰的分離度應(yīng)大于 ，紅霉素 A的拖尾因子應(yīng)小于 。 紅霉素 紅霉素腸溶片 紅霉素腸溶膠囊 紅霉素 A 紅霉素 B 紅霉素 C 修訂 HPLC法 紅霉素 A：對照品外標(biāo)法計(jì)算； 紅霉素 B：加校正因子自身對照計(jì)算； 紅霉素 C：自身對照法計(jì)算。具體見 表 。如圖 。 ? 紅霉素腸溶膠囊 表 2022年版藥典大環(huán)內(nèi)酯類品種增修訂項(xiàng)目 項(xiàng)目 修訂 增訂 刪去 結(jié)構(gòu)式 1 含量限度 5 性狀 3 鑒別 3（ HPLC 1項(xiàng) 和 IR 2 項(xiàng)） 23(HP