【正文】 1mg、乙酸乙酯 1mg，四氫呋喃 150 ug、四氯化碳 1 ug、環(huán)己烷 760 ug、苯 1 ug、 1,2二氯乙烷 1 ug、乙酸異丙酯 1mg、二氧六環(huán) 76 ug、甲基異丁基酮1mg、吡啶 40 ug、甲苯 178 ug。 % * F值為對(duì)照品溶液濃度 (μ g/ml)與峰面積的比值 表 F值的比較 表 高分子聚合物測(cè)定結(jié)果的比較 品種 批號(hào) 2022年版藥典方法 高聚物含量（ %） 改進(jìn)后的方法 高聚物含量（ %） 相對(duì)偏差 阿莫西林囊 0507501 （聯(lián)邦制藥） 均值： % (n=2) 均值： % (n=4) 177。 ? 作為常規(guī)檢驗(yàn)方法有必要進(jìn)行改進(jìn)，考慮到原藥典收載的方法在原理，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，以及方法驗(yàn)證專(zhuān)屬性、重現(xiàn)性、準(zhǔn)確性等方面均符合要求，而僅僅是分析周期過(guò)長(zhǎng) . ? 因此在研究建立新的方法時(shí)，我們?nèi)圆捎媚z色譜的分離模式，并采用原方法中的自身對(duì)照外標(biāo)法，進(jìn)行高分子聚合物雜質(zhì)的測(cè)定。 ? 如：頭孢克洛規(guī)定 : ? 頭孢克洛峰的保留時(shí)間約為 23分鐘，頭孢克洛峰與頭孢克洛 δ 3異構(gòu)體峰的分離度應(yīng)不小于 ，頭孢克洛峰的拖尾因子應(yīng)小于 。 ? 鑒別 ? 原料藥與注射用粉針的鑒別均采用色譜法HPLC，光譜法 IR以及鉀、鈉離子火焰反應(yīng)，也有多個(gè)品種采用 HPLC與 TLC二法并列。 ? 10. 增加有機(jī)溶媒檢查的品種較多。 ? 有關(guān)物質(zhì)采用自身對(duì)照時(shí)，對(duì)本身純度低于 85%的品種，提出對(duì)自身對(duì)照溶液主峰進(jìn)行校正。 同時(shí)又用該方法測(cè)定硫酸鹽（ SO4）的含量。 ? 喹諾酮類(lèi) 46個(gè)品種就有 40個(gè)品種用 HPLC法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)。使該類(lèi)品種標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)含量高于國(guó)外藥典標(biāo)準(zhǔn)。本版藥典增加球狀蛋白親水硅膠為色譜柱填充劑的高分子聚合物分析方法 ? 12. 2022年版藥典氨基糖苷類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)的含量測(cè)定方法為微生物檢定法的管碟法，本版藥典增加微生物檢定法濁度法，二法并列。 ? 有關(guān)物質(zhì) ? 頭孢菌素類(lèi)藥物原料 27個(gè)品種均規(guī)定檢查有關(guān)物質(zhì)，制劑 42個(gè)品種除 6個(gè)品種顆粒與干混懸劑由于輔料干擾未規(guī)定檢查有關(guān)物質(zhì)外 , 其他品種均有有關(guān)物質(zhì)檢查。 ? 頭孢拉定、頭孢氨芐、頭孢羥氨芐中 7氨基去乙酰氧基頭孢烷酸（ 7ADCA）及頭孢哌酮鈉中雜質(zhì) A等均采用雜質(zhì)對(duì)照品外標(biāo)法。 ? 由于高分子聚合物的對(duì)照品不易獲得，樣品中的高聚物量較少，故不能直接用樣品與聚合物對(duì)照品配制分離度試驗(yàn)用溶液， ? 根據(jù)本方法的分離原理，擬加入一定量的藍(lán)色葡聚糖 2022，制成含一定濃度藍(lán)色葡聚糖2022的樣品溶液來(lái)進(jìn)行分離度試驗(yàn)。本版藥典部分品種溶媒殘留檢查項(xiàng)下采用標(biāo)準(zhǔn)加入法計(jì)算，該方法可提高檢測(cè)靈敏度。 ? 不溶性微粒與可見(jiàn)異物 ? 供注射用的原料藥增加不溶性微粒與可見(jiàn)異物檢查 ,以保證制劑能符合注射劑的要求。 ? 測(cè)定法 取本品適量（約相當(dāng)于拉氧頭孢25mg），精密稱(chēng)定，置 100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取 10μ l注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取拉氧頭孢對(duì)照品適量，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中 C20H20N6O9S的含量。 ? ? ? 采用 HPLC法測(cè)定，組分測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)圖譜由中檢所提供，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的參比。由于原料的水溶性較差，因此要求口服制劑檢查溶出度或釋放度。 ? 以上（ 1）、（ 2）兩項(xiàng)可選做一項(xiàng) 。 ? 2022年版中測(cè)定硫酸鹽含量采用的是容量法與傳統(tǒng)的重量法測(cè)定相比，有其先進(jìn)性，但滴定終點(diǎn)突躍不明顯 . ? 本版藥典建立的 HPLCELSD方法測(cè)定硫酸鹽含量，采用硫酸滴定液作為對(duì)照品，解決了對(duì)照品的問(wèn)題，該方法方便、準(zhǔn)確。 ? 在無(wú)菌檢查去抑菌作用時(shí)可以利用該性質(zhì)。 ? 經(jīng)試驗(yàn)，國(guó)內(nèi)樣品 4差向四環(huán)素的含量均小于 %，故將 《 中國(guó)藥典 》 2022年版標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的 4差向四環(huán)素 ≤%的限度改為 %。 ? ? 四環(huán)類(lèi)抗生素的差向異構(gòu)化反應(yīng)，可用下式表示： OO HO HHO HN ( C H3)2HN H2OR 11234512AOO HO HHO HN ( C H3)2HN H2OR 11234512A? ? (1)酸性條件下 : ? 四環(huán)類(lèi)在較酸溶液中特別在加熱情況下， 產(chǎn)生脫水四環(huán)類(lèi)降解產(chǎn)物，脫水產(chǎn)物的共軛雙鍵的數(shù)目增多，因此色澤加深。 ? ? ELSD屬于通用型檢測(cè)器 , 幾乎對(duì)所有的化合物均有響應(yīng)，流動(dòng)相和環(huán)境溫度對(duì)響應(yīng)值的影響小 ,適宜用于無(wú)特征紫外吸收化合物的定性和定量分析， ? 由于其色譜響應(yīng)值 (峰面積的對(duì)數(shù)值 )與對(duì)應(yīng)的質(zhì)量（溶液濃度的對(duì)數(shù)值）呈線性關(guān)系，因此用回歸方程計(jì)算含量。 ? 在鑒別試驗(yàn)中規(guī)定 TLC和 HPLC兩個(gè)色譜鑒別項(xiàng)，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件任選其中之一，便于靈活操作。見(jiàn)表 。 ? 如：頭孢哌酮鈉 ? 雜質(zhì) A： (5aR,6R)6[[(2R)2[[(4ethyl2,3dioxopiperazin1yl)carbonyl]amino] 2(4hydroxyphenyl)acetyl]amino]5a,6dihydro3H,7Hazeto[2,1b]furo[3,4d][1,3]thiazine1,7(4H)dione ? 中文名： (5aR,6R)6[[(2R)2[[(4乙基 2,3二氧代哌嗪 1基 )甲?；?]氨基 ]2(4羥基苯基 )乙?；?]氨基 ] 5a,6二氫 3H,7H氮雜環(huán)丁烷并 [2,1b]呋喃并 [3,4d][1,3]噻嗪 1,7(4H)二酮 ? 如：頭孢唑林鈉 ? 雜質(zhì) A： R=H: (6R,7R)7amino3[[(5methyl1,3,4thiadiazol2yl)sulphanyl] methyl]8oxo5thia1azabicyclo[]oct2ene2carboxylic acid 中文名： (6R,7R)7氨基 3[[(5甲基 1,3,4噻二唑 2基 )硫代 ]甲基 ]8氧代 5硫代 1氮雜雙環(huán) []辛 2烯 2羧酸 ? 雜質(zhì) E： 5methyl1,3,4thiadiazol2thiol 中文名： 5甲基 1,3,4噻二唑 2甲硫醇 ? 2．大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素 ? 該類(lèi)抗生素可分為十四元環(huán)、十五元環(huán)和十六元環(huán)三類(lèi)。用于制備系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用分離度溶液 ， 測(cè)定分離度， ? 結(jié)果按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算 ,即得。 溶劑 RART值 甲醇 丙酮 異丙醇 乙腈 二氯甲烷 正丙醇 丁酮 乙酸乙酯 四氫呋喃 四氯化碳 環(huán)己烷 苯 1,2二氯乙烷 乙酸異丙酯 甲基異丁基酮 二氧六環(huán) 吡啶 甲苯 乙酸丁酯 ? ? 對(duì)生產(chǎn)工藝過(guò)程中使用 2乙基己酸的原料，增加 2乙基己酸檢查，采用氣相色譜法測(cè)定。 ％ 頭孢唑林鈉 比對(duì)樣品 （上海新先 鋒 ） 均值： % (n=2) 均值： % (n=5) 177。以 sephadexG10為填充劑，柱內(nèi)徑的縮小，柱床體積隨之也變小。 ? 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定結(jié)果計(jì)算可分為三種方法： ? (1). 不加校正因子的自身對(duì)照法； ? (2). 加校正因子的自身對(duì)照法； ? (3). 已知雜質(zhì)對(duì)照品外標(biāo)法 。少數(shù)有用 UV法作為鑒別。 ? 11. 為保證臨床使用的安全有效，供注射用 β 內(nèi)酰胺抗生素，除檢查有關(guān)物質(zhì)外，增加高分子聚合物的檢查。 ? 有很多品種采用 HPLC梯度洗脫法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，如：頭孢地尼，頭孢唑林鈉，拉氧頭孢鈉 , 阿莫西林及其復(fù)方制劑，氨芐西林等。 硫酸卡那霉素及制劑的有關(guān)物質(zhì)卡 B以及含量測(cè)定， 硫酸慶大霉素及制劑的慶大霉素 C組分及有關(guān)物質(zhì)測(cè)定， 硫酸小諾霉素及其制劑的組分測(cè)定。 妥布霉素及制劑的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定等。 ? 5. 喹諾酮類(lèi)抗生素的有關(guān)物質(zhì)檢查， EP、 BP、USP均采用 TLC、 HPLC兩種方法進(jìn)行控制。在原來(lái) 21個(gè)品種基礎(chǔ)上增加至 42個(gè)品種 . ? 2022年版藥典 β 內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素品種進(jìn)行高分子雜質(zhì)檢查時(shí)，由于該方法的分析周期較長(zhǎng)，本版藥典對(duì)測(cè)定方法進(jìn)一步完善，采用直徑較細(xì)內(nèi)徑為 1cm,長(zhǎng)為 30cm的玻璃柱作為色譜柱。 ? ? 檢查溶液的澄清度與顏色是控制 β 內(nèi)酰胺類(lèi)注射用的原料藥與制劑內(nèi)在質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)。 ? 用雜質(zhì)對(duì)照品外標(biāo)法計(jì)算已知雜質(zhì)的含量 ,用加校正因子與不加校正因子的自身對(duì)照法計(jì)算已知雜質(zhì)和未知雜質(zhì)的含量和雜質(zhì)的總量。 Kv=0也降低。 ％ 頭孢唑林鈉 CZSS051142 （奧奇特） 均值： % (n=3) 均值： % (n=3) 177。方法也收載在 2022年版藥典二部（附錄 Ⅷ L ） . ? 如 :頭孢地嗪鈉、 ? 頭孢呋辛鈉、 ? 頭孢孟多酯鈉、 ? 氨芐西林鈉等。 ? 如：拉氧頭孢鈉 ? 【 含量測(cè)定 】 照高效液相色譜法（附錄 Ⅴ D ）測(cè)定。它們均為多組分抗生素。 表 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 (1) 品種 方法（ HPLC） 丙酸交沙霉素 231nm 交沙霉素 231nm 克拉霉素 克拉霉素片 克拉霉素膠囊 克拉霉素顆粒 2．檢測(cè)波長(zhǎng) 210nm 阿奇霉素 阿奇霉素干混懸劑 阿奇霉素片 阿奇霉素分散片 阿奇霉素膠囊 阿奇霉素顆粒 TLC法修訂為 HPLC法，無(wú)該項(xiàng)檢查的已增訂 （阿奇霉素 Gx為 A偕亞胺醚為 ）與不加校正因子（阿奇霉素 B和其他單個(gè)雜質(zhì)）的自身對(duì)照 210nm ，不同限度 紅霉素 （紅霉素烯醇醚為 1為 ）與不加校正因子的自身對(duì)照 215nm 乳糖酸紅霉素 注射用乳糖酸紅霉素 （紅霉素烯醇醚為 1為 ）與不加校正因子的自身對(duì)照 215nm 表 有關(guān)物質(zhì)測(cè)定 (2) 品種 方法（ HPLC） 硬脂酸紅霉素 硬脂酸紅霉素片 硬脂酸紅霉素膠囊 （紅霉素烯醇醚為 1為 ）與不加校正因子的自身對(duì)照 215nm 依托紅霉素 檢測(cè)波長(zhǎng) 190nm 麥白霉素 A1為基準(zhǔn) ,外標(biāo)法計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)總量（不得過(guò) 25%） 檢測(cè)波長(zhǎng) 232nm 麥白霉素片 A1為基準(zhǔn) ,外標(biāo)法計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)總量（不得過(guò) 30%） 232nm 麥白霉素膠囊 A1為基準(zhǔn) ,外標(biāo)法計(jì)算各有關(guān)物質(zhì)總量（不得過(guò) 30%） 232nm 羅紅霉素 羅紅霉素片 羅紅霉素分散片 羅紅霉素膠囊 ，并對(duì)該峰定位。 ? 例 ? 【 鑒別 】 （ 1） TLC ? （ 2） HPLC ? （ 3）硫酸鹽鑒別反應(yīng)。 ? 盡管 ELSD檢測(cè)器在靈敏度上不如 UV檢測(cè)器，但較之 TLC其靈敏度要高得多。 ? (2) 堿性條件下 : ? 四環(huán)類(lèi)抗生素在堿性溶液中放置一段時(shí)間，C環(huán)打開(kāi)，生成無(wú)活性的具有內(nèi)酯結(jié)構(gòu)的異四環(huán)類(lèi)抗生素。 ? 該色譜條件下首次檢出了土霉素。 ? (3) 四環(huán)類(lèi)抗生素能與許多金屬離子形成有色絡(luò)合物。 圖 阿米卡星混合溶液的分離色譜圖 圖 BP2022阿米卡星項(xiàng)下系統(tǒng)適用性色譜 ? 硫酸鹽 ? 除部分品種仍采用原滴定方法，本版藥典首次采用 HPLCELSD方法對(duì)其進(jìn)行測(cè)定。 ? 例 2. 阿米卡星 ? 【 鑒別 】 （ 1） TLC ? （ 2） HPLC ?