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生物化學(xué)簡(jiǎn)明教程第四版第五章酶(參考版)

2025-01-19 13:37本頁(yè)面
  

【正文】 酶的分離純化和活力測(cè)定 純化的一般原則 。 Allosteric inhibitors bind specifically to the T state and make it harder for substrate to switch enzyme into the R state. Allosteric activators bind specifically to the R state and pull more of the enzyme into the more active R state. ALLOSTERIC EFFECTORS bind specifically to either the T or the R states. Heterotropic (nonsubstrate) activators bind to and stabilize the R state, while heterotropic inhibitors bind preferentially to the T state. TT RT RR +S +S TT RR RT +S +S 序變模型 (simple sequential model) 齊變模型 (concerted model) Simple sequential model for a tetrameric allosteric enzyme. The binding of a ligand (L) to a subunit changes the conformation of that particular subunit from the T (square) to the R (circle) form. This transition affects the affinity of the other subunits for the ligand. 可逆的共價(jià)修飾調(diào)節(jié) 可逆的共價(jià)修飾 (covalent modification)方式: 可逆磷酸化 (phosphorylation) 可逆腺苷?;?(adenylylation) 尿苷酰化 (uridylylation) 甲基化 (methylation) COVALENT MODIFICATION IS A MEANS OF REGULATING ENZYME ACTIVITY Phosphorylation Is a Highly Effective Means of Regulating the Activities of Target Proteins 糖原磷酸化酶 磷酸化酶 b (活性低 ) 磷酸化酶 a (活性高 ) 糖原磷酸化酶 b 糖原磷酸化酶 a 磷酸化酶激酶 2ATP 2ADP 磷酸化酶磷酸酶 2Pi 2H2O 酶活力和比活力的表示方式 ( 1)酶活力( enzyme activity) 酶活力的定義:在一定條件下,1分鐘能轉(zhuǎn)化1 μmol底物 的酶量 酶活力的大小用酶活力單位來(lái)表示,簡(jiǎn)稱酶單位( unit, U) 酶單位的定義 1961年國(guó)際酶單位( IU) 1972年 Katal(簡(jiǎn)稱 Kat)單位 ( 2)酶的比活力( specific activity,也稱比活性) 比活力: 指每 mg蛋白質(zhì)所具有的酶活力 ,一般用 U/mg蛋白質(zhì) 來(lái)表示,比活力說(shuō)明酶的純度。經(jīng)過(guò)一系列純化步驟以后得到的 4ml酶制品 (含有 ),總活力為288單位,整個(gè)純化過(guò)程的收率是多少? 純化了多少倍? 酶的應(yīng)用(臨床方面) 消化類:胃蛋白酶、胰酶、淀粉酶、纖維素酶、木瓜酶、凝乳酶酶等 抗炎凈創(chuàng)類:胰蛋白酶、糜蛋白酶、 α淀粉酶、胰脫氧核糖核酸酶等 血凝和解凝類:凝血酶促使血液凝固,防止微血管出血。 比活力 = 酶活力( U/ml) /蛋白質(zhì)濃度( mg/ml) 比活力有時(shí)也可用每 g或每 ml酶含多少個(gè)活力單位來(lái)表示。 別構(gòu)酶舉例 大腸桿菌天冬氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶 ( aspartate transcarbamylase, ATCase) ATCase催化的化學(xué)反應(yīng) CO2+Glu+ATP ATCase活性調(diào)節(jié)的機(jī)理 C T PA T P有催化活性的構(gòu)象 無(wú)催化活性的構(gòu)象 C C CC C CR汞 鹽完 整 的催 化 亞 基 調(diào) 節(jié) 亞 基C C CC C C+( 三 聚 體 ) ( 二 聚 體 )( 活 性 )A T C a s eR R R R RR R R R R R+ATP +CTP 別構(gòu)酶的S形曲線 [S] V 1/2Vmax 酶活力的測(cè)定 注意事項(xiàng): 測(cè)定反應(yīng)的初速度 在一套固定條件下進(jìn)行 測(cè)定方法 酶活力( enzyme activity) 在一定條件下,1分鐘能轉(zhuǎn)化 1 μmol底物的酶量稱為一個(gè)酶單位 (U)。 抑制劑 (inhibitor)的影響 抑制作用 ( inhibition) :使酶的必需基團(tuán)的化學(xué)性質(zhì)改變而降低酶活力甚至使酶完全喪失去活性的物質(zhì) 不可逆抑制作用 (irreversible inhibition) 可逆抑制作用 (reversible inhibition) ( 2)非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作
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