【正文】 1938年 Kubowitz通過在酶催化兒茶酚還原后，每個銅原子可以結合一分子的一氧化碳證實了這種形式酪氨酸酶的存在。 ? 目前人們使用的商業(yè)酶制劑中 ， 即純化后得到的酶中 ， 含有 85%的變位態(tài)酪氨酸酶 ，15%的氧化態(tài)形式的酶 。 ? 變位態(tài) （ Mettyroxinase,Emet） 酪氨酸酶 ，像氧化態(tài) Eoxy形式一樣 ， 通過一個內在的氧橋偶聯(lián) ， 但不是通過一分子過氧化物 ， 而是通過過氧化氫結合到銅離子上 ， 這種形式的酶可以通過加入過氧化物轉化為氧化態(tài)形式 。 這個雙核銅活性部位具有幾種不同形式 。 39。 M E L AN I NE S慢N HOOD o p a c h r o m e3快C O ON H 3+OO339。 R 39。 脂肪酶 S e r105OHH i s224HNNA s p187OOA s p187OOHH i s224NNHT h r40NHHOR 39。胰凝乳蛋白酶在芳香氨基酸后側切開肽鏈。這 3種酶各有分工，每種酶在不同類型氨基酸側鏈相鄰的肽鍵處水解蛋白質鏈。 胰蛋白酶家族 ? 胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶和彈性蛋白酶是一組密切相關的水解酶類，它們的作用是水解肽鏈。其中研究得最多的是 ??環(huán)糊精。 ? 目前研究得比較多的主要是水解酶和單加氧酶模型。 4 2 0 2 4 6 8 101/[ S]( 1/m m ol .L1)1/v無抑制劑 非 競爭性抑制劑 1/km 酶模型 ? 酶模型是人工合成的一類具有酶的某些屬性的有機化合物。 非竟爭性抑制 可逆抑制作用的動力學特征 ? 加入競爭性抑制劑后， Km 變大，酶促反應速度減小。由于這類物質并不是與底物競爭與活性中心的結合，所以稱為非競爭性抑制劑。 ? 竟爭性抑制通?？梢酝ㄟ^增大底物濃度，即提高底物的競爭能力來消除。根椐抑制劑與酶結合的情況，又可以分為兩類 (1) 竟爭性抑制 ? 某些抑制劑的化學結構與底物相似，因而能與底物竟爭與酶活性中心結合。 b. 可逆抑制 ? 抑制劑與酶蛋白以非共價方式結合，引起酶活性暫時性喪失。 1） 抑制劑的作用方式 ? a. 不可逆抑制 ? 抑制劑與酶反應中心的活性基團以共價形式結合，引起酶的永久性失活。 ? 酶的抑制劑一般具備兩個方面的特點： ? 過渡狀態(tài)相似。 10 20 30 40 50 60 70 80 90020406080100T e mp e r a t u r e OCRelative Activity (%)4 抑制劑對酶活性的影響 ? 使酶的活性降低或喪失的現(xiàn)象，稱為酶的抑制作用。 ? 因此大多數(shù)酶都有一個最適溫度。 3. 溫度的影響 ? 一方面是溫度升高 ,酶促反應速度加快。 Km值小表示親和程度大 ,酶的催化活性高。 ? Km值只是在固定的底物，一定的溫度和pH條件下，一定的緩沖體系中測定的，不同條件下具有不同的 Km值。 ?因此 ,米氏常數(shù)的單位為mol/L。 ? 當?shù)孜餄舛冗_到一定值，幾乎所有的酶都與底物結合后，反應速度達到最大值（ Vmax），此時再增加底物濃度，反應速度不再增加，表現(xiàn)為零級反應。 AHHO HHO HHO O P O P O P O C H 2O OOO O OM g2+? 電子傳遞中間體 ? 許多氧化 還原酶中都含有銅或鐵離子，它們作為酶的輔助因子起著傳遞電子的功能。 ? 提高水的親核性能 ? 電荷屏蔽作用 ? 電荷屏蔽作用是酶中金屬離子的一個重要功能。 ? 某些輔酶，如焦磷酸硫胺素和磷酸吡哆醛等也可以參與共價催化作用。 (2) 共價催化 ? 催化劑通過與底物形成反應活性很高的共價過渡產物，使反應活化能降低，從而提高反應速度的過程，稱為共價催化 。 ? 廣義酸－堿催化是指通過質子酸提供部分質子 ,或是通過質子堿接受部分質子的作用，達到降低反應活化能的過程 。 NHOOOH..CH 3 OCH 3 OCH 3 OCH 3 OOHCH 3 OCH 3 OCH 3 OCH 3 OCOHN OH..(1) 酸－堿催化 ? 酸 堿催化可分為狹義的酸 堿催化和廣義的酸 堿催化。 ? 由于 CH3體積比較大，與反應基團之間產生一種立體排斥張力，從而使反應基團之間更容易形成穩(wěn)定的五元環(huán)過渡狀態(tài)。 張力學說 ? 這是一個形成內酯的反應。 4，與反應過渡狀態(tài)結合作用 ? 按 SN2 歷程進行的反應，反應速度與形成的過渡狀態(tài)穩(wěn)定性密切相關。 3，鄰基效應和定向效應 例 ? 咪唑和對 硝基苯酚乙酸酯的反應是一個雙分子氨解反應 . C H 3 C OON O 2NN H..NN HCOC H 3+ O N O 2+NN HC OON O 2. .例 ONN H+ ON O 2+實驗結果表明，分子內咪唑基參與的氨解反應速度比相應的分子間反應速度大 24 倍。 ? 催化劑的作用是降低反應活化能 Ea,從而起到提高反應速度的作用 2. 活化能降低 反應過程中能的變化 ? 酶催化作用的本質是酶的活性中心與底物分子通過短程非共價力 (如氫鍵 ,離子鍵和疏水鍵等 )的作用，形成 ES反應中間物， ? 其結果使底物的價鍵狀態(tài)發(fā)生形變或極化，起到激活底物分子和降低過渡態(tài)活化能作用。 ? 酶促反應： E + S === ES === ES? ? ?? EP ?? E + P ? 反應方向 , 即化學平衡方向 ,主要取決于反應自由能變化 ?H?。 ? E + S ==== ES ??? P + E ? 許多實驗事實證明了 E－ S復合物的存在。酶與底物的結合如同一把鑰匙對一把鎖一樣