生物化學課件---蛋白質(zhì)(參考版)
2024-08-27 01:13本頁面
【正文】 蛋白質(zhì)的主要呈色反應 （ 1） 前處理 （ 2） 沉淀分離 （ 3） 分離純化 （ 4） 質(zhì)量鑒定 （二）蛋白質(zhì)分離純化的原則與方法 思考題 1. 蛋白質(zhì)分為哪些類型？各行使何種功能？ 2. 自然界存在的氨基酸種類、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)？ 3. 肽鍵有何特點？對蛋白質(zhì)構(gòu)象的形成有何 影響？ 4. 何謂蛋白質(zhì)的一、二、三、四級結(jié)構(gòu)？維 系蛋白質(zhì)構(gòu)象的作用力有哪些？ 5. 何謂蛋白質(zhì)的超二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域？ 6. 試述蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)和高級結(jié)構(gòu)與功能的 關(guān)系。 可逆變性 在除去變性因素之后 ，在適宜的條件下 ， 變性的蛋白質(zhì)可以從伸展態(tài)恢復到折疊態(tài) ， 并恢復全部的生物活性的現(xiàn)象 ， 稱之為 復性（ renaturation） 。 以天然蛋白質(zhì)作對照 ， 測定蛋白質(zhì)的 物理變化 ， 觀察蛋白質(zhì)的溶解度是否下 降 ， 是否凝集 、 沉淀等； 測定蛋白質(zhì)化學性質(zhì)的變化； 測定蛋白質(zhì)的比活性 。 變性機理： 破壞了蛋白質(zhì)分子構(gòu)象中的次級鍵。 2. 蛋白質(zhì)的變性與復性 引起變性因素： 物理因素和化學因素。 ★ 兩性解離物質(zhì)所帶靜電荷為零時溶液的 pH。當 α 亞基與氧結(jié)合后，發(fā)生三級結(jié)構(gòu)的變化，此變化使相鄰的 β 亞基發(fā)生三級結(jié)構(gòu)的變化，與氧結(jié)合使血紅蛋白結(jié)合氧的能力在短時間內(nèi)迅速上升，從，而使曲線程 S 形。 （二）蛋白質(zhì)構(gòu)象與功能的關(guān)系 血紅蛋白 β 亞基 α亞基 （ α subunit） 血紅素 （ haem） 血紅蛋白的變構(gòu)現(xiàn)象（變構(gòu)時的亞基移動） 血紅蛋白和肌紅蛋白的氧合曲線不同，前者是 S 形曲線，后者是雙曲線。 如參與蛋白質(zhì)消化的各種蛋白酶、參與血液凝固的凝血酶、凝血因子等。 有些蛋白質(zhì)常以無活性的前體形式產(chǎn)生和貯存。 H b SH b A β 鏈 N 末端序列 V a l H i s Le u T h r P r o Ly sG l u G l uV a l H i s Le u T h r P r o Ly sG l uV a l1 2 3 4 5 6 7 8正常紅細胞和鐮刀狀紅細胞的掃描電鏡圖譜 ？ 一級結(jié)構(gòu)相似，可能會有相同的功能；一級結(jié)構(gòu)有差異，功能會不同。 同源蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的種屬差異與保守性 （ 1）分子病 基因突變 Aa變異 蛋白結(jié)構(gòu)和功能改變引起的遺傳病。 （ 2）有相當大變化的氨基酸殘基，稱為 可變殘基 ，它們的差異體現(xiàn)了 種屬特異性 。 它們的氨基酸序列具有明顯的相似性，這種現(xiàn)象稱為 序列同源 ，有明顯序列同源的蛋白質(zhì)，也稱 同源蛋白質(zhì) 。解離的 TMV外殼亞基和 RNA， 在合適的條件下能自裝配 成完整的 TMV。 涉 及 亞基的種類 、 數(shù)目和亞基的空間排布 ， 包括亞基間的接觸位點和相互作用關(guān)系 ， 但不包括亞基本身的構(gòu)象 。 三級結(jié)構(gòu)是指多肽鏈中所有原子的空間排布 。 結(jié) 構(gòu) 域 之 間 的 這 種 柔性（ flexibility） 有利于如酶和抗體活性的發(fā)揮 。 3. 超二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域 常見的組合形式： αα、 ββ、 βαβ （ 2）結(jié)構(gòu)域 多肽鏈在二級結(jié)構(gòu)或超二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上 ， 進一步卷曲折疊成為相對獨立 、 近似球形的三維實體稱為 結(jié)構(gòu)域（ structure domain） ， 是三級結(jié)構(gòu)的局部折疊區(qū) 。 （ 4）無規(guī)卷曲 沒有規(guī)律性的多肽主鏈骨架的構(gòu)象，就是 無規(guī)卷曲 （ random coil， Φ、 Ψ角度 不定）；球蛋白分子中，往往含有較多的無規(guī)卷曲；無規(guī)卷曲往往 有利于多肽鏈形成靈活的、具有特異生物活性的構(gòu)象。 （ 3） β 轉(zhuǎn)角 蛋白質(zhì)分子中連接不同結(jié)構(gòu)單位的 180o轉(zhuǎn)彎結(jié)構(gòu)稱為 β 轉(zhuǎn)角（ β turn） 。 又稱為β 折疊片（ β pleated sheet） 。它是蛋白質(zhì)主鏈的一種典型結(jié)構(gòu)形式 . 每隔 ，螺旋上升一圈，每圈間距 . 氫鍵環(huán)內(nèi)包括 13個主鏈原子，因此稱這種螺旋為 。 C H C O ) 3( N HC NO HR Pauling 和 Corey于
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