【正文】 蛋白質質量濃度 /（ mg/ml） = 280 260 測定范圍： ～ (七 ) 蛋白質的含量測定 (自學 ) 考馬斯亮藍染色法、紫外吸收法、凱氏定氮法等 參見 p5556 本章總結 1. 蛋白質的分類。 (堿性溶液 ) Cu2+ 紅紫色絡合物 180176。 當蛋白質處于等電點時，加熱凝固最完全和最迅速 . 如： 煮雞蛋 (六 ) 蛋白質的顏色反應 (自學 ) 雙縮脲反應 酚試劑反應 蛋白質定量 、 定性 茚三酮反應 測定常用方法 另外還有： 蛋白黃色反應、米倫氏反應、乙醛酸反應 等。 例如： “ 柿石癥 ” (3)加熱變性沉淀法 幾乎所有的蛋白質都因加熱變性而凝固 。 生物堿試劑一般為 弱酸性物質 ，如單寧酸、苦味酸、三氯乙酸等。 (2)生物堿試劑沉淀法 （條件： pH稍小于 pI） 生物堿 是植物組織中具有顯著生理作用的一類含氮 的堿性物質。 (1)重金屬鹽沉淀 (條件： pH 稍大于 pI為宜 ) 當 pH 稍大于 pI時， 蛋白質顆粒帶負電荷這樣就容易與重金屬離子結合成不溶性鹽而 沉淀。 ?由于沉淀過程發(fā)生了蛋白質的結構和性質的變化，所以又稱為 變性沉淀。 注意： 有機溶液沉淀蛋白質通常在 低溫條件下進行，否則有機溶劑與水互溶產生的溶解熱會使蛋白質產生變性。 酸 酸 堿 堿 堿 酸 溶液中蛋白質的聚沉 (3) 有機溶劑沉淀法 ： 在蛋白質溶液中，加入能與水互溶的有機溶劑如乙醇、丙酮等，蛋白質產生沉淀。 (2)弱酸或弱堿沉淀法 (等電點沉淀） 用弱酸或弱堿調節(jié)蛋白質溶液的 pH處于等電點處 ， 使蛋白質沉淀。 鹽析法是最常用的蛋白質沉淀方法，該方法不會使蛋白質產生變性 。 而 低濃度 的鹽溶液加入蛋白質溶液中，會導致蛋白質的溶解度增加，該現(xiàn)象稱為 鹽溶 。 ? 可逆沉淀是分離和純化蛋白質的基本方法，如 等電點沉淀法、鹽析法和有機溶劑沉淀法 等。 參見 p54 1 可逆沉淀 ?定義： 在 溫和條件下 ，通過改變溶液的pH或電荷 狀況，使蛋白質從膠體溶液中沉淀分離。 如果加入適當的試劑使蛋白質分子處于 等電點狀態(tài) 或 失去水化層 （ 消除相同電荷 ， 除去水膜 ） ， 蛋白質膠體溶液就不再穩(wěn)定并將產生沉淀 。 參見 p54 蛋白質膠體性質的應用 由于膠體溶液中的蛋白質不能通過 半透膜 ，因此可以應用透析法將非蛋白的小分子雜質除去。 使蛋白質顆粒之間相互排斥，保持一定距離，不致互相凝聚而沉淀。 蛋白質的水溶液能形成穩(wěn)定的親水膠體的原因： １、蛋白質多肽鏈上含有許多極性基團。 核糖核酸酶變性與復性作用 天然狀態(tài)，有催化活性 非折疊狀態(tài)，無活性 8 M 尿素 ?巰基乙醇 變性 天然狀態(tài) –SS鍵恢復 而且是正確配對 如：－ NH3＋ 、－ COO－ 、－ OH、 SH、 CONH等，它們都具有高度的親水性，當與水接確時，極易吸附水分子，使蛋白質顆粒外圍形成一層水化膜，將顆粒彼此隔開，不致因互相碰撞凝聚而沉淀。 變性后的蛋白質在結構上雖有改變，但組成成分和相對分子質量不變。 組分和分子量不變。 參見 p52 B、引起蛋白質變性的主要因素： ： 加熱、高壓、紫外線照射、 X射線、超聲波、劇烈振蕩和攪拌等 ： 強酸、強堿、脲、去污劑（ 十二烷基硫酸鈉（ SDS））、重金屬鹽、三氯醋酸、濃乙醇等。 (三 ) 蛋白質的變性與復性 A、蛋白質的變性定義 天然蛋白質因受物理、化學因素的影響，使蛋白質分子的構象發(fā)生了異常變化，從而導致生物活性的喪失以及物理、化學性質的異常變化。 利用蛋白質的電泳現(xiàn)象，可以將不同帶電性質和不同大小、形狀的蛋白質分子進行分離純化。這種現(xiàn)象稱為蛋白質 電泳 — 帶電粒子在電場中移動的現(xiàn)象。 在等電點時， 蛋白質的溶解度最小，在電場中不移動。而肌紅蛋白只有一個亞基，不存在別構效應。 ? 某些蛋白質表現(xiàn)其生物功能時，構象發(fā)生改變，從而改變整個分子的性質，這種現(xiàn)象稱為 別構效應 。此種細胞壁薄，而且脆性大，極易漲破而發(fā)生溶血；再者，發(fā)生鐮變的細胞粘滯加大，易栓塞血管；由于流速較慢，輸氧機能降低，使臟器官供血出現(xiàn)障礙，從而引起頭昏、胸悶而導致死亡。 （ 2）盡管不同生物間親緣關系差別很大，但與細胞色素 C功能密切相關的 AA順序卻有共同之處，即 保守順序 不變 五 蛋白質的結構與功能 不同生物與人的細胞色素 C相比較 AA差異數目 黑猩猩 0 雞、火雞 13 牛豬羊 10 海龜 15 狗驢 11 小麥 35 粗糙鏈孢霉 43 酵母菌 44 生物 與人不同的 AA數目 黑猩猩 0 恒河猴 1 兔 9 袋鼠 10 牛、豬、羊 10 狗 11 馬 12 雞、火雞 13 響尾蛇 14 海龜 15 金槍魚 21 角餃 23 小蠅 25 蛾 31 小麥 35 粗早鏈孢霉 43 酵母 44 不同生物與人的 Cytc的 AA差異數目 根據細胞色素 C的順序種屬差異建立起來的進化樹 圓圈代表分歧點 分子病 —指蛋白質分子中由于 AA排列順序與正常蛋白質不同而發(fā)生的一種遺傳病 (基因突變造成的 )。 （ 2） 血紅蛋白的功能： 存在于動物血液的紅細胞中，具有運輸 O2和 CO2的功能；血紅蛋白還能和 H+結合，從而可以維持體內 pH. 血紅蛋白四級結構 血紅素輔基 化學鍵 共價鍵 次級鍵 肽鍵 二硫鍵 氫鍵 疏水鍵 鹽鍵 范德華力 一級結構 二、三、四級結構 三、四級結構