中國藥典20xx年版微生物限度檢查及發(fā)展趨勢j(參考版)
2025-01-11 01:14本頁面
【正文】 中國藥品生物制品檢定所 42 ?謝謝大家！ 。在藥典現(xiàn)有條件下實際采用 2ml實驗， 1ml測定細(xì)菌數(shù)、 1ml測定霉菌和酵母菌數(shù)，再加合起來作為一個檢驗結(jié)果。 這一標(biāo)準(zhǔn)源于國外，在其需氣菌培養(yǎng)基統(tǒng)一規(guī)定的情況下簡單易行。 中國藥品生物制品檢定所 39 藥材原粉的界定問題 ?生藥原粉； ?動物臟器及臟器提取物。 ? （ 3）抽樣不正確 ? 原料藥微生物檢查的抽樣除了應(yīng)參照相應(yīng)的抽樣原則，還應(yīng)強調(diào)的一點是抽樣的環(huán)境要求和無菌操作要求，不當(dāng)?shù)某闃臃椒ú粌H可以使得樣本對總體沒有代表意義、抽取的樣本被污染，甚至可因抽樣而污染原料。 中國藥品生物制品檢定所 38 原料藥的微生物標(biāo)準(zhǔn)問題 ? （ 1）重視不夠 ? 目前一些企業(yè)對原料藥微生物控制的重要性和意義認(rèn)識不夠，對源頭上的問題解決不好，加之 GMP執(zhí)行流于形式，造成了頻繁的藥品微生物污染事故發(fā)生。 ? 中國藥典規(guī)定，對藥品原輔料藥的微生物檢查參照相應(yīng)用途的藥品進(jìn)行，即用于非滅菌制劑生產(chǎn)的原料藥應(yīng)按相應(yīng)制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行微生物限度控制；而用于滅菌制劑的原料藥一般應(yīng)符合無菌要求。 ? 在嚴(yán)格執(zhí)行藥品 GMP的前提下，國外藥典更為重視原料藥的微生物檢查，尤其是對一些非滅菌制劑，甚至僅僅對原料藥有微生物限度控制要求，而對制劑沒有強制要求。 中國藥品生物制品檢定所 36 微生物限度檢查的幾個問題 ?原料藥的微生物標(biāo)準(zhǔn)問題； ?藥材原粉的界定問題； ?含豆豉、神曲等發(fā)酵成分的中成藥制劑標(biāo)準(zhǔn)問題； ?純化水微生物限度檢查問題； 中國藥品生物制品檢定所 37 原料藥的微生物標(biāo)準(zhǔn)問題 ? 原料藥是藥品生產(chǎn)過程中引入微生物污染的重要來源之一，雖然一些藥品在生產(chǎn)過程或終產(chǎn)品階段可以采取一些滅菌措施殺滅污染微生物，但可能因為由此引入的死菌體、毒素等無法消除而危害患者，而原料藥過高的微生物荷載可能直接挑戰(zhàn)一些滅菌措施的有效性，造成滅菌失敗，使藥品存在更大的安全隱患。 2022年版培養(yǎng)基適用性實驗 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的專屬性 中國藥品生物制品檢定所 31 實驗菌株 實驗用菌液制備 需氧菌計數(shù) 霉菌及酵母菌計數(shù) 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔 CMCC(B)26 003〕 大豆酪胨瓊脂或大豆酪胨肉湯，30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24小時 大豆酪胨瓊脂和大豆酪胨肉湯， ≤100cfu 30～ 35℃ ， ≤3天 銅綠假單胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)〔 CMCC(B)10104〕 大豆酪胨瓊脂或大豆酪胨肉湯，30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24小時 大豆酪胨瓊脂和大豆酪胨肉湯， ≤100cfu 30～ 35℃ ， ≤3天 枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)〔 CMCC（ B）63501〕 大豆酪胨瓊脂或大豆酪胨肉湯，30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24小時 大豆酪胨瓊脂和大豆酪胨肉湯， ≤100cfu 30～ 35℃ ， ≤3天 白色念珠菌 (Candida albicans)〔 CMCC(F)98001〕 沙氏葡萄糖瓊脂或沙氏葡萄糖肉湯， 20～ 25℃ 培養(yǎng) 2～ 3天 大豆酪胨瓊脂， ≤100cfu 30～ 35℃ ， ≤5天 沙氏葡萄糖瓊脂 ≤100cfu， 20～ 25℃ ， ≤5天 黑曲霉 (Aspergillus niger)〔 CMCC(F)98 003〕 沙氏葡萄糖瓊脂或馬鈴薯葡萄糖瓊脂， 20～ 25℃ 培養(yǎng) 5～ 7天，或直到獲得良好的孢子 大豆酪胨瓊脂， ≤100cfu 30～ 35℃ ， ≤5天 沙氏葡萄糖瓊脂 ≤100cfu 20～ 25℃ ， ≤5天 培養(yǎng)基適用性實驗（協(xié)調(diào)案） 中國藥品生物制品檢定所 32 檢查目標(biāo)菌 推薦培養(yǎng)基 特性 測試菌株 * 耐膽鹽革蘭陰性菌 腸道菌增菌肉湯 促生長能力 、 抑制能力 紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂 促生長能力 +指示能力 、 大腸埃希菌 麥康凱肉湯 促生長能力 抑制能力 麥康凱瓊脂 促生長能力 +指示能力 沙門菌 RVS肉湯 促生長能力 S paratyphi B 抑制能力 木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂 促生長能力 +指示能力 S paratyphi B 指示能力 銅綠假單胞菌 溴化十六烷基三甲銨瓊脂 促生長能力 抑制能力 金黃色葡萄球菌 甘露醇鹽瓊脂 促生長能力 +指示能力 抑制能力 梭菌 梭菌增菌培養(yǎng)基 促生長能力 Cl. sporogenes 哥倫比亞瓊脂 促生長能力 Cl. sporogenes 白色念珠菌 沙氏葡萄糖肉湯 促生長能力 沙氏葡萄糖瓊脂 促生長能力 +指示能力 中國藥品生物制品檢定所 33 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的專屬性 ? 圖 15：當(dāng)染菌較多時，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基生長大量的細(xì)菌，給結(jié)果判斷帶來困難。 MUG凝集、效價測定用培養(yǎng)基瓊脂含量過高。 若上述疑似菌為非革蘭陽性菌 ， 顯微鏡未見厚膜孢子 、 假菌絲 、 芽管 ， 判供試品未檢出白色念珠菌 。 取培養(yǎng)物進(jìn)行染色 ， 鏡檢及芽管試驗 。 若平板上無綠色或翠綠色的菌落生長 ， 判供試品未檢出白色念珠菌 。若平板上無菌落生長或生長的菌落與上述菌落形態(tài)特征不符 ， 判供試品未檢出白色念珠菌 。 取上述培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上 ， 培養(yǎng) 24～ 48小時 （ 必要時延長至 72小時 ） 。（如試驗管不出現(xiàn)渾濁、產(chǎn)氣、消化碎肉、臭氣等現(xiàn)象，判供試品未檢出梭菌；否則，應(yīng)）取上述每一培養(yǎng)物 ，分別涂抹接種于含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基平板上，在置厭氧條件下培養(yǎng) 48～ 72小時。被檢培養(yǎng)基中試驗菌生長的菌落形態(tài)、大小、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。 ? 培養(yǎng)基抑制能力檢查 ：劃線接種試驗菌（見表 2）于被檢培養(yǎng)基平板上，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度和時間下培養(yǎng)，試驗菌應(yīng)不得生長。 ? 固體培養(yǎng)基促生長能力檢查 ：取試驗菌各 （ 50～ 100cfu）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板中，每種培養(yǎng)基平行制備 2個平皿，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，計數(shù)。 ? 大腸埃希菌 （ Escherichia coli） 〔 CMCC（ B） 44 102〕 ? 金黃色葡萄球菌 （ Staphylococcus aureus） 〔 CMCC（ B） 26 003〕 ? 乙型付傷寒沙門菌 （ Salmonella paratyphi B） 〔 CMCC（ B） 50 094〕 ? 銅綠假單胞菌 （ Pseudomonas aeruginosa） 〔 CMCC（ B） 10 104〕 ? 生孢梭菌 （ Clostridium sporogenes） 〔 CMCC（ B） 64 941〕 ? 白色念珠菌 （ Candi
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