【正文】 ，對藥品原輔料藥的微生物檢查參照相應(yīng)用途的藥品進(jìn)行，即用于非滅菌制劑生產(chǎn)的原料藥應(yīng)按相應(yīng)制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行微生物限度控制；而用于滅菌制劑的原料藥一般應(yīng)符合無菌要求。 ? （ 3）抽樣不正確 ? 原料藥微生物檢查的抽樣除了應(yīng)參照相應(yīng)的抽樣原則，還應(yīng)強(qiáng)調(diào)的一點(diǎn)是抽樣的環(huán)境要求和無菌操作要求，不當(dāng)?shù)某闃臃椒ú粌H可以使得樣本對總體沒有代表意義、抽取的樣本被污染，甚至可因抽樣而污染原料。 這一標(biāo)準(zhǔn)源于國外，在其需氣菌培養(yǎng)基統(tǒng)一規(guī)定的情況下簡單易行。 中國藥品生物制品檢定所 42 ?謝謝大家！ 。在藥典現(xiàn)有條件下實(shí)際采用 2ml實(shí)驗(yàn)， 1ml測定細(xì)菌數(shù)、 1ml測定霉菌和酵母菌數(shù)，再加合起來作為一個檢驗(yàn)結(jié)果。 中國藥品生物制品檢定所 39 藥材原粉的界定問題 ?生藥原粉； ?動物臟器及臟器提取物。 中國藥品生物制品檢定所 38 原料藥的微生物標(biāo)準(zhǔn)問題 ? （ 1）重視不夠 ? 目前一些企業(yè)對原料藥微生物控制的重要性和意義認(rèn)識不夠，對源頭上的問題解決不好，加之 GMP執(zhí)行流于形式，造成了頻繁的藥品微生物污染事故發(fā)生。 ? 在嚴(yán)格執(zhí)行藥品 GMP的前提下，國外藥典更為重視原料藥的微生物檢查，尤其是對一些非滅菌制劑，甚至僅僅對原料藥有微生物限度控制要求，而對制劑沒有強(qiáng)制要求。 2022年版培養(yǎng)基適用性實(shí)驗(yàn) 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的專屬性 中國藥品生物制品檢定所 31 實(shí)驗(yàn)菌株 實(shí)驗(yàn)用菌液制備 需氧菌計(jì)數(shù) 霉菌及酵母菌計(jì)數(shù) 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔 CMCC(B)26 003〕 大豆酪胨瓊脂或大豆酪胨肉湯，30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24小時 大豆酪胨瓊脂和大豆酪胨肉湯， ≤100cfu 30～ 35℃ ， ≤3天 銅綠假單胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)〔 CMCC(B)10104〕 大豆酪胨瓊脂或大豆酪胨肉湯，30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24小時 大豆酪胨瓊脂和大豆酪胨肉湯， ≤100cfu 30～ 35℃ ， ≤3天 枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)〔 CMCC（ B）63501〕 大豆酪胨瓊脂或大豆酪胨肉湯，30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24小時 大豆酪胨瓊脂和大豆酪胨肉湯， ≤100cfu 30～ 35℃ ， ≤3天 白色念珠菌 (Candida albicans)〔 CMCC(F)98001〕 沙氏葡萄糖瓊脂或沙氏葡萄糖肉湯， 20～ 25℃ 培養(yǎng) 2～ 3天 大豆酪胨瓊脂， ≤100cfu 30～ 35℃ ， ≤5天 沙氏葡萄糖瓊脂 ≤100cfu， 20～ 25℃ ， ≤5天 黑曲霉 (Aspergillus niger)〔 CMCC(F)98 003〕 沙氏葡萄糖瓊脂或馬鈴薯葡萄糖瓊脂， 20～ 25℃ 培養(yǎng) 5～ 7天，或直到獲得良好的孢子 大豆酪胨瓊脂， ≤100cfu 30～ 35℃ ， ≤5天 沙氏葡萄糖瓊脂 ≤100cfu 20～ 25℃ ， ≤5天 培養(yǎng)基適用性實(shí)驗(yàn)（協(xié)調(diào)案） 中國藥品生物制品檢定所 32 檢查目標(biāo)菌 推薦培養(yǎng)基 特性 測試菌株 * 耐膽鹽革蘭陰性菌 腸道菌增菌肉湯 促生長能力 、 抑制能力 紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂 促生長能力 +指示能力 、 大腸埃希菌 麥康凱肉湯 促生長能力 抑制能力 麥康凱瓊脂 促生長能力 +指示能力 沙門菌 RVS肉湯 促生長能力 S paratyphi B 抑制能力 木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂 促生長能力 +指示能力 S paratyphi B 指示能力 銅綠假單胞菌 溴化十六烷基三甲銨瓊脂 促生長能力 抑制能力 金黃色葡萄球菌 甘露醇鹽瓊脂 促生長能力 +指示能力 抑制能力 梭菌 梭菌增菌培養(yǎng)基 促生長能力 Cl. sporogenes 哥倫比亞瓊脂 促生長能力 Cl. sporogenes 白色念珠菌 沙氏葡萄糖肉湯 促生長能力 沙氏葡萄糖瓊脂 促生長能力 +指示能力 中國藥品生物制品檢定所 33 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基的專屬性 ? 圖 15：當(dāng)染菌較多時，玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基生長大量的細(xì)菌，給結(jié)果判斷帶來困難。 若上述疑似菌為非革蘭陽性菌 ， 顯微鏡未見厚膜孢子 、 假菌絲 、 芽管 ， 判供試品未檢出白色念珠菌 。 若平板上無綠色或翠綠色的菌落生長 ， 判供試品未檢出白色念珠菌 。 取上述培養(yǎng)物劃線接種于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上 ， 培養(yǎng) 24～ 48小時 （ 必要時延長至 72小時 ） 。被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌生長的菌落形態(tài)、大小、指示劑反應(yīng)情況等應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致。 ? 固體培養(yǎng)基促生長能力檢查 ：取試驗(yàn)菌各 （ 50～ 100cfu）分別涂布于被檢培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基平板中，每種培養(yǎng)基平行制備 2個平皿，在相應(yīng)控制菌檢查規(guī)定的培養(yǎng)溫度及最短培養(yǎng)時間下培養(yǎng)，計(jì)數(shù)。 檢查項(xiàng)目包括培養(yǎng)基的促生長 、 指示和抑制特性能力 。 以最高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報(bào)告 1g、 1mL或 10cm2供試品中所含的菌數(shù) 。 用 蛋白胨緩沖液稀釋成 1∶ 1∶ 10 1∶ 103等稀釋級 。因此，根據(jù)供試品須符合的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)和菌數(shù)報(bào)告規(guī)則，在不影響檢驗(yàn)結(jié)果判斷的前提下，應(yīng)采用能使微生物生長的更高稀釋級的供試液進(jìn)行方法驗(yàn)證試驗(yàn)。 中國藥品生物制品檢定所 19 2022年版微生物限度檢查法修訂 附錄 109頁，增加：表 1常見干擾物的中和劑或滅活方法 干擾物 可選用的中和劑或滅活方法 戊二醛 亞硫酸氫納 酚類、乙醇、吸附物 稀釋劑 醛類 稀釋劑、甘氨酸、硫代硫酸鹽 季銨類化合物（ QACs）、對羥基苯甲酸酯、 卵磷脂、聚山梨醇酯 汞類制劑 亞硫酸氫納、巰基乙酸鹽、硫代硫酸鹽 雙胍類化合物 卵磷脂 碘酒、洗必泰類 聚山梨醇酯 鹵化物 硫代硫酸鹽 乙二胺四乙酸（ EDTA） 鎂或鈣離子 磺胺類 對氨基苯甲酸 223。 適用性檢查 取大腸埃希菌 、 金黃色葡萄球菌 、 枯草芽孢桿菌各 50～ 100cfu， 分別注入無菌平皿中 ， 立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 ， 每株試驗(yàn)菌平行制備 2個平皿 ， 混勻 ，凝固 ， 置 30～ 35℃ 培養(yǎng) 48hr， 計(jì)數(shù)；取白色念珠菌 、 黑曲霉各 50～ 100cfu， 分別注入無菌平皿中 ， 立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基 ， 每株試驗(yàn)菌平行制備 2個平皿 ，混勻 ， 凝固 ， 置 20～ 25℃ 培養(yǎng) 72hr， 計(jì)數(shù)；取白色念珠菌 50～ 100cfu， 注入無菌平皿中 ， 立即傾注酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 ， 平行制備 2個平皿 ， 混勻 ， 凝固 ， 置 20～ 25℃ 培養(yǎng) 72hr， 計(jì)數(shù) 。 接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中 ， 培養(yǎng) 5～ 7天 ， 加入 3～ 5ml 含 ％ （ v/