20xx年醫(yī)學專題—糖類及蛋白質(zhì)測定(精)-資料下載頁
2024-11-16 04:07本頁面
【正文】 頁，共六十二頁。,二、微量凱氏定氮法 1 測定原理同凱氏定氮法 2 主要(zhǔy224。o)儀器,第五十四頁，共六十二頁。,3 測定方法 （1）樣品處理 精密稱樣（約相當?shù)?0～40mg）→ 100ml定氮瓶 固體樣品0.2～2.0g 半固體樣品2～5g 液體樣品吸取10～20ml 加入催化劑、硫酸 0.2g硫酸銅，3g硫酸鉀、20ml(一般用5ml)硫酸， 硒催化劑1g、5ml硫酸 小心加熱，至無泡沫產(chǎn)生(chǎnshēng) 大火消化，至液體呈藍綠色澄清透明，再繼續(xù)加熱0.5h。 取下放冷，小心加20ml水。轉(zhuǎn)移至100ml容量瓶中，加水定容。 取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸按同一方法做試劑空白試驗。,第五十五頁，共六十二頁。,（2）按裝定氮裝置 水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)裝水至約2/3處，加甲基紅指示液數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸，加入數(shù)粒玻璃珠以防暴沸； 加熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)的水。 （3）蒸餾吸收 接收瓶內(nèi)加入10ml(一般用30ml) 2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下； 吸取10.0ml樣品消化稀釋液由小玻杯流入反應室，并以10ml水洗滌小玻杯使流入反應室內(nèi)，塞緊小玻杯的棒狀玻塞。 將10ml 40%氫氧化鈉溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其緩緩流入反應室，立即(l236。j237。)將玻塞蓋緊，并加水于小玻杯以防漏氣。 夾緊螺旋夾，開始蒸餾。 蒸餾5min，移動接受瓶，使冷凝管下端離開液面，再蒸餾1min。然后用少量水沖洗冷凝管下端外部。,第五十六頁，共六十二頁。,（4）滴定 取下接收瓶，以0.05000mol/L（一般用0.01000 mol/L）鹽酸標準溶液滴定至灰色或藍紫色為終點。 同時吸取10.0ml試劑空白消化液作空白試驗 5 結(jié)果計算 X——樣品中蛋白質(zhì)的含量，%； V1——樣品消耗(xiāoh224。o)鹽酸標準液的體積，ml； V2——試劑空白消耗鹽酸標準液的體積，ml； N——鹽酸標準溶液的當量濃度； 0.014——1mol/L鹽酸標準溶液1ml相當于氮克數(shù)； m——樣品的質(zhì)量(體積)，g(ml)； F——氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)。,第五十七頁，共六十二頁。,優(yōu)點 ①可用于所有食品的蛋白質(zhì)分析中； ②操作相對比較簡單； ③實驗費用較低； ④結(jié)果準確，是一種測定蛋白質(zhì)的經(jīng)典力怯； ⑤用改進方法(微量凱氏定氮法)可測定樣品(y224。ngpǐn)中微量的蛋白質(zhì)。 缺點 ①最終測定的是總有機氮，而不只是蛋白質(zhì)氮； ②實驗時間長(至少需要2h才能完成)； ③精度差，精度低于雙縮脲法； ④所用試劑有腐蝕性。,第五十八頁，共六十二頁。,三、雙縮脲法 1原理 在堿性條件下，銅離子和多肽(至少有兩個(liǎnɡ ɡ232。)肽鍵，如雙縮脲、多肽和所有的蛋白質(zhì))生成的復合物呈紫紅色，吸收波長為540nm，比色所得的吸光度值和樣品中蛋白質(zhì)的含量成正比。 2測定方法 (1)5mL雙縮脲試劑和lmL蛋白質(zhì)溶液(1—10mg蛋白質(zhì)／mL)混勻。試劑包括硫酸銅、氫氧化鈉和酒石酸鉀鈉以穩(wěn)定在堿性溶液中的銅離子； (2)混合液在室溫下放置15min或30min，然后在540nm處比色，讀取吸光度值，并扣去空白； (3)如果反應液不澄清，在測定吸光度前可過濾或離心； (4)用牛血清白蛋白(BSA)建立蛋白質(zhì)濃度與吸光度的標準曲線。,第五十九頁，共六十二頁。,雙縮脲法優(yōu)點 ①該方法比凱氏定氮法費用低，速度快(可在不到30min的時間內(nèi)完成)，是分析蛋白質(zhì)最簡單的方法； ②比福林酚法、紫外吸收法或比濁法更少發(fā)生顏色偏離； ③幾乎沒有物質(zhì)干擾食品中蛋白質(zhì)的雙縮脲反應； ④不需要(xūy224。o)測定非多肽或非蛋白質(zhì)來源的氮。,第六十頁，共六十二頁。,缺點 ①不如福林酚法靈敏，分析時至少(zh236。shǎo)需要2~4mg蛋白質(zhì)； ②如果存在膽汁素，則吸光度會虛假增加； ③高濃度的胺鹽會干擾反應； ④不同蛋白質(zhì)其最終反應產(chǎn)物的顏色不同，如明膠的雙縮脲反應產(chǎn)生紅紫色； ⑤如果有高濃度的脂或碳水化合物存在時，最終的反應溶液中可能會呈乳白色； ⑥此方法不是一個測量絕對值的方法，必須用已知濃度的蛋白質(zhì)(如BSA)或經(jīng)凱氏定氮法校正。,第六十一頁，共六十二頁。,內(nèi)容(n232。ir243。ng)總結(jié),糖類 蛋白質(zhì)測定。果糖含有游離酮基，乳糖、麥芽糖含有游離的潛醛基。準確吸取甲液5mL、乙液5mL加入錐形瓶?！吧攀忱w維”比“粗纖維”更能客觀、準確地反映食物的可利用率。（5）乙醇洗滌、乙醚洗滌。如水解簡單蛋白質(zhì)只得到氨基酸，但結(jié)合類蛋白質(zhì)還含有非氨基酸成分。牛肉(腌制、干牛肉)。氮基酸總量測定通常(tōngch225。ng)采用酸堿滴定法，目前HPLC、氮基酸分析儀也已得到廣泛使用。①最終測定的是總有機氮，而不只是蛋白質(zhì)氮,第六十二頁，共六十二頁
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