23基因工程載體-人工染色體載體xxxx09-資料下載頁(yè)
2025-02-23 23:09本頁(yè)面
【正文】 點(diǎn)等 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 （ 1）供體：遺傳背景與 DNA特點(diǎn)等，其中包括染色體 DNA大小，基因大小與結(jié)構(gòu)，堿基組成，目的基因的產(chǎn)物特點(diǎn)以及遺傳物質(zhì)的傳遞方式等。 （ 2）受體：各種中間宿主與終宿主的遺傳背景，如遺傳物質(zhì)的傳遞方式 (包括人為的方法 )， DNA限制修飾系統(tǒng)， DNA重組基因特點(diǎn)，基因產(chǎn)物修飾系統(tǒng)，即轉(zhuǎn)錄與翻譯后修飾系統(tǒng)。 實(shí)驗(yàn)對(duì)象 如常用于基因工程的宿主菌 ，菌株不同，基因型亦不同，不同載體要求不同菌株。如： DH DH5α 、 E .coliDH5α F’ 1） 三者均有限制 修飾系統(tǒng)和重組基因缺陷，外源 DNA可存活，且不發(fā)生重組 2） DH5α 和 DH5α F’都具有一個(gè)可供遺傳標(biāo)記 lacZα 檢測(cè)的遺傳背景 3） DH5α F’可供 M13mp系列載體配套使用， M13病毒的感染需要 F’的存在 ? 1．當(dāng)一 DNA片段插入終止子探針型載體 pBU10的 HindⅢ克隆位點(diǎn)后，重組質(zhì)粒仍可轉(zhuǎn)化 (CmlsTcs) 為CmlrTcr ，為什么 ? 可設(shè)計(jì)什么實(shí)驗(yàn)證明其假設(shè) ? ? 2．當(dāng)一 DNA片段插入 pUC18后，在 xgal平板上出現(xiàn)兩類菌落，蘭色菌落和白色菌落。從白色菌落中分離純化的質(zhì)粒經(jīng)電泳檢查，均比原載體 DNA分子大；但從蘭色菌落隨機(jī)分離的質(zhì)粒 DNA卻有兩類，其中一類與載體大小相同，另一類卻與白色菌落中分離的質(zhì)粒大小相同。如何解釋這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ? 可設(shè)計(jì)何種實(shí)驗(yàn)證明你的解釋是正確的 ? ? 3．當(dāng)把一外源 DNA插入一克隆載體后，重組 DNA分子轉(zhuǎn)化 細(xì)胞所獲得的重組子分子可根據(jù)其限制酶圖譜分為兩類，即這兩類轉(zhuǎn)化子中所含的重組 DNA分子的限制酶圖譜不一樣，從這兩類轉(zhuǎn)化細(xì)胞中分離到的重組DNA分子可用限制酶回收插入的片段。而從這兩類轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液所分離到的 DNA卻 ? 不能用限制酶回收該片段。當(dāng)把同類轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液所分離到的 DNA進(jìn)行復(fù)性分析時(shí)， DNA分子間不會(huì)發(fā)生復(fù)性，但把從不同類轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)液分離到的 DNA進(jìn)行同樣的實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)在電鏡下可觀察到十分類似于 8字形的結(jié)構(gòu)。如何解釋上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ? 可利用圖示法解釋。 ? 4. 由于分子克隆載體的大小決定外源 DNA插入片段的大小，兩者呈反比關(guān)系，因而在建立載體時(shí)千方百計(jì)地減小載體分子量。對(duì)于穿梭載體，因?yàn)閺?fù)制起點(diǎn)和標(biāo)記基因具有生物特異性，所以載體上需要同時(shí)具有兩個(gè)以上的復(fù)制起點(diǎn)和標(biāo)記基因。已知不同生物的某些基因啟動(dòng)子可以在，問(wèn)可以采取一些什么方法減小穿梭載體的分子量 ? 質(zhì)粒 * 受體細(xì)胞 結(jié)構(gòu) 插入片斷 舉例 環(huán)狀 〈 8* pUC18/19 , T載體pGEM 3z等 λ 噬菌體 線狀 9 24kb EMBL系列， Λ gt系列 絲狀噬菌體及噬菌粒 環(huán)狀 〈 10 kb M13mp系列 粘粒載體 環(huán)狀 35 45kb pJB8,c2RB, pcoslEMBL, pWE15/16, pCV BAC (Bacterial Artificial Chromosome) 環(huán)狀 ≈300 kb Pel oBAC系列 PAC (P1derived Artificial chromosome) 環(huán)狀 100 2023 kb PCYPAC1 YAC (Yeast Artificial chromosome ) 酵母細(xì)胞 線性染色體 100 2023 kb MAC (Mammalian Artificial Chromosome) 哺乳類細(xì)胞 線性染色體 〉 1000 kb 病毒載體 動(dòng)物細(xì)胞 環(huán)狀 SV40 載體，昆蟲(chóng) 桿狀病毒載體 穿梭載體 動(dòng)物細(xì)胞 和細(xì)菌 環(huán)狀 pSVK3質(zhì)粒， PBV, Ti質(zhì)粒 載體的種類和特征 （重點(diǎn)） 載體容量 ? M13mp載體 4 kb ? 細(xì)菌質(zhì)粒載體 10kb ? λ 載體 23kb ? cos質(zhì)粒載體 48kb ? P1載體 95 kb ? pYAC載體 ∽1000 kb 演講完畢，謝謝觀看！
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