染色體工程-資料下載頁
2025-01-07 20:40本頁面
【正文】 鑒定 一、細胞同步化與染色體的分離 二、中期染色體的轉(zhuǎn)移 三、 導(dǎo)入基因的受體細胞的分離與鑒定 ? 分離：利用選擇性培養(yǎng)基進行篩選。 ? 鑒定： 染色體轉(zhuǎn)移技術(shù)的應(yīng)用前景 染色體轉(zhuǎn)移技術(shù)的應(yīng)用前景 第五節(jié) 人工染色體 ? 染色體要確保在細胞分裂中保持穩(wěn)定，必須要能夠自我復(fù)制和向子細胞中平均分配。它需要 3個關(guān)鍵序列，包括自主復(fù)制 DNA序列（ autonomously replicating sequence，ARS）、著絲粒 DNA序列（ centromere DNA sequence， CEN)和端粒 DNA序列（ telomere DNA sequence, TEL）。 將 3個關(guān)鍵序列用分子生物學(xué)方法拼接起來就得到人造微小染色體（ artificial minichromosome），在大片段 DNA分子的克隆、基因組分析、基因功能鑒定、基因治療以及研究染色體結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系等研究中得到了廣泛的應(yīng)用，具有極為重要的價值。目前，正在研究或應(yīng)用的有： ? 酵母人工染色體 (yeast artificial chromosome,YAC) ? 細菌人工染色體（ bacterial artificial chromosome,BAC） ? 哺乳動物人工染色體 (mammalian artificial chromosome)。 基于 ARS、 CEN、 TEL是線性染色體穩(wěn)定的功能序列 ,人們利用這些序列構(gòu)建載體 , 重組后的 DNA以線性狀態(tài)存在 , 這樣不僅穩(wěn)定 ,而且大大提高了插入外源基因的能力 , 并且可以像天然染色體一樣在寄主細胞中穩(wěn)定復(fù)制和遺傳，稱為人工染色體。如利用從酵母染色體上分離的 ARS、 CEN、 TEL序列構(gòu)建載體，然后用這種載體構(gòu)建的染色體即稱為酵母人工染色體。 酵母人工染色體的構(gòu)建 是基于大腸桿菌的 F 質(zhì)粒構(gòu)建的，高通量低拷貝的質(zhì)粒載體。每個環(huán)狀 DNA 分子中攜帶一個抗生素抗性標記，一個來源于大腸桿菌 F 因子（致育因子）的嚴謹型控制的復(fù)制子 oriS （ Shizuya et al. 1992 ），一個易于 DNA 復(fù)制的由 ATP 驅(qū)動的解旋酶（ （ RepE） 以及三個確保低拷貝質(zhì)粒精確分配至子代細胞的基因座 （ parA , parB , 和 parC ） 。
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