23基因工程載體-人工染色體載體xxxx09-預覽頁
【正文】 ） 具有兩個質粒 —— 穿梭質粒和 Ti質粒。 發(fā)根農桿菌侵染后植物細胞產生許多不定根，這種不定根生長迅速，不斷分枝成毛狀，故稱之為毛狀根，也稱為發(fā)狀根，分別簡稱為毛根或發(fā)根， Ri質粒為根誘導質粒。 ?② TLDNA區(qū)。 ags基因在轉化的初期起著重要的作用，是 不定根產生的關鍵 Ri質粒 CaMV克隆載體 ? 含 1個約 8kb的環(huán)狀雙鏈 DNA分子； ? 用于十字花科和少數(shù)非十字花科的植物基因轉移； ? 其感染對植物有害，不能直接做載體； ? CaMV的 DNA在植物細胞中能高水平轉錄 35S RNA，其啟動子是一強啟動子。由于動物細胞的培養(yǎng)和操作較復雜、花費也較多，因而病毒載體構建時一般都把細菌質粒復制起始序列放置其中。猴病毒 40是球形動物病毒，直徑 40nm，呈 20面體，有一個共價閉環(huán)的雙鏈 DNA基因組，全長 5244bp。表明猴腎細胞的拼接系統(tǒng)能有效地處理小鼠 β 珠蛋白的初級轉錄本。近年來，已設計構建成一些缺陷型病毒（ defective virus）使逆轉錄病毒成為有用的基因載體，成功地把抗藥性基因轉入了人體造血前體細胞，并在細胞中表達。用這種缺陷的逆轉錄病毒去感染某種細胞株，這種細胞株包含有輔助病毒（ helper virus）。這時，由于骨髓細胞里面沒有輔助病毒，所以整合進宿主基因組的逆轉錄病毒，不再有外殼蛋白可供包裝，因此也就無法增殖，而只能被“陷”在宿主基因組中，通過細胞分裂而傳給下一代子細胞。如： DH DH5α 、 E .coliDH5α F’ 1） 三者均有限制 修飾系統(tǒng)和重組基因缺陷，外源 DNA可存活，且不發(fā)生重組 2） DH5α 和 DH5α F’都具有一個可供遺傳標記 lacZα 檢測的遺傳背景 3） DH5α F’可供 M13mp系列載體配套使用， M13病毒的感染需要 F’的存在 ? 1．當一 DNA片段插入終止子探針型載體 pBU10的 HindⅢ克隆位點后，重組質粒仍可轉化 (CmlsTcs) 為CmlrTcr ，為什么 ? 可設計什么實驗證明其假設 ? ? 2．當一 DNA片段插入 pUC18后，在 xgal平板上出現(xiàn)兩類菌落，蘭色菌落和白色菌落。當把同類轉化細胞培養(yǎng)液所分離到的 DNA進行復性分析時， DNA分子間不會發(fā)生復性，但把從不同類轉化細胞培養(yǎng)液分離到的 DNA進行同樣的實驗時，發(fā)現(xiàn)在電鏡下可觀察到十分類似于 8字形的結構。已知不同生物的某些基因啟動子可以在，問可以采取一些什么方法減小穿梭載體的分子量 ? 質粒 * 受體細胞 結構 插入片斷 舉例 環(huán)狀 〈 8* pUC18/19 , T載體pGEM 3z等 λ 噬菌體 線狀 9 24kb EMBL系列， Λ gt系列 絲狀噬菌體及噬菌粒 環(huán)狀 〈 10 kb M13mp系列 粘粒載體 環(huán)狀 35 45kb pJB8,c2RB, pcoslEMBL, pWE15/16, pCV BAC (Bacterial Artificial Chromosome) 環(huán)狀 ≈300 kb Pel oBAC系列 PAC (P1derived Artificial chromosome) 環(huán)狀 100 2023 kb PCYPAC1 YAC (Yeast Artificial chromosome ) 酵母細胞 線性染色體 100 2023 kb MAC (Mammalian Artificial Chromosome) 哺乳類細胞 線性染色體 〉 1000 kb 病毒載體 動物細胞 環(huán)狀 SV40 載體，昆蟲 桿狀病毒載體 穿梭載體 動物細胞 和細菌 環(huán)狀 pSVK3質粒， PBV, Ti質粒 載體的種類和特征 （重點） 載體容量 ? M13mp載體 4 kb ? 細菌質粒載體 10kb ? λ 載體 23kb ? cos質粒載體 48kb ? P1載體 95 kb ? pYAC載體 ∽1000 kb 演講完畢，謝謝觀看！
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