23基因工程載體-人工染色體載體xxxx09(已修改)
2025-03-03 23:09 本頁面
【正文】 第三節(jié) 其他載體 其他載體 ? 一、人工染色體 ? 二、植物基因工程載體 ? 三、動(dòng)物基因工程載體 一、人工染色體 人基因組十分龐大，約含 4 109bp，建立和篩選人的基因組文庫，要求有容量更大的載體，酵母人工染色體（yeast artificial chromosome,YAC）載體應(yīng)運(yùn)而生。 YAC含有酵母染色體端粒（telesome）、著絲點(diǎn) (centromere)及復(fù)制起點(diǎn)等功能序列，可插入長度達(dá) 200500kb的外源 DNA，導(dǎo)入酵母細(xì)胞可以隨細(xì)胞分裂周期復(fù)制繁殖供作克隆，成為人基因組研究計(jì)劃的重要 酵母人工染色體 （ yeast artificial chromosome, YAC) 酵母人工染色體 （ yeast artificial chromosome， YAC） ◆ 酵母人工染色體是另一類酵母穿梭載體。具有自主復(fù)制序列、克隆位點(diǎn)以及可在細(xì)菌和酵母菌中選擇的標(biāo)記基因。 ◆ YAC可以接受 1001000 kb的外源 DNA片段，這一特點(diǎn)使 YAC成為人類基因組計(jì)劃及圖位克隆分離基因的重要工具，并促進(jìn)了發(fā)展人類人工染色體 (human artificial chromosome，HAC)的研究。 正常酵母人工染色體含有： * 四膜蟲端粒（ tel) * 酵母自主復(fù)制序列（ARS) * 酵母著絲點(diǎn) (CEN) * 酵母的選擇標(biāo)記 (TRPURA1) YAC載體 the capacity to clone large exogenous DNA fragments (up to 2 Mb) has made YACs a vital tool in physical mapping The functional elements of a yeast chromosome （ 1）著絲粒區(qū)（ CEN） A A GTCACGTG T TGTTTCTGNTTTCCGAAA YAC的組成結(jié)構(gòu) 酵母染色體著絲粒區(qū)的保守序列 : 7886bp I II III 由三個(gè)區(qū)組成 酵母端粒保守序列是 (G4T2)n 重復(fù)序列。 （ 3）復(fù)制起點(diǎn)（ ORI） 約 100bp的自主復(fù)制序列（ ARS）。 （ 2）端粒（ TEL） （真核生物中只有酵母菌有 ARS） 兩個(gè)端粒序列 Tel。 位于 SUP4 基因內(nèi)部。 （ 4）克隆位點(diǎn) 插入失活選擇： SUP4酶失活的酵母菌落呈 紅色； 不失活的菌落是白色。 14 細(xì)菌人工染色體 （ Bacterial artificial chromosome,BAC） 細(xì)菌人工染色體 （ bacterial artificial chromosome， BAC） ◆ BAC載體是基于細(xì)菌的 性因子 (F因子 )質(zhì)粒 的一些特點(diǎn)構(gòu)建的。 F因子在細(xì)菌接合時(shí)轉(zhuǎn)移 1Mb的細(xì)菌染色體片段。將 F因子經(jīng)基因工程改良構(gòu)成的 BAC載體，可用于克隆 100 kb以上的 DNA片段。 ◆ 帶有外源片段的 BAC載體在細(xì)菌細(xì)胞中通常僅單個(gè)拷貝，這一特點(diǎn)有利于保持 DNA大分子，在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定復(fù)制而不發(fā)生重組。 BAC載體本身分子量小 ， 具有氯霉素抗性選擇基因及多克隆位點(diǎn)。 Structure of a bacterial artificial chromosome (BAC), used for cloning large fragments of donor DNA. CMR is a selectable marker for chloramphenicol resistance. oriS, repE, parA, and parB are F genes for replication and regulation of copy number. cosN is the cos site from l phage. HindIII and BamHI are cloning sites at which foreign DNA
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