【正文】 ? 溶血性鏈球菌?？梢鹌つw、皮下組織的化膿性炎癥、呼吸道感染、流行性咽炎的爆發(fā)性流行以及新生兒敗血癥、細菌性心內(nèi)膜炎、猩紅熱和風(fēng)濕熱、腎小球腎炎等變態(tài)反應(yīng)。 第四節(jié) 常見致病菌的測定 第四節(jié) 常見致病菌的測定 溶血性鏈球菌的檢驗程序 （一）實驗內(nèi)容 樣品處理 → 增菌培養(yǎng) → 分離培養(yǎng) → 純化培養(yǎng) → 生化鑒定 → 報告 （二）實驗過程 第四節(jié) 常見致病菌的測定 第一天前半天 預(yù)先準(zhǔn)備并滅菌的器材 規(guī)格名稱 數(shù)量 500mL廣口瓶 2個 13 100mm試管 7支 10mL移液管 1支 5mL移液管 3支 1mL移液管 12支 直徑為 90mm平皿 28套 250mL量筒 1支 第一天 樣品處理和增菌培養(yǎng) 第四節(jié) 常見致病菌的測定 第一天后半天 樣品處理 無菌操作稱取檢樣 25g（ mL)，加入裝有 225mL滅菌生理鹽水的 500mL廣口瓶內(nèi)，固體食品用均質(zhì)器以 800010000r/min打碎 1min，制成混懸液 。 增菌培養(yǎng) 吸取 5mL混懸液接種至 50mL葡萄糖肉浸液肉湯（如檢樣污染嚴(yán)重，可同時接種 5mL至匹克氏肉湯），36177。 1℃ 培養(yǎng) 24h。 分離培養(yǎng) 混懸液直接劃線于血平板 36177。 1℃ 培養(yǎng) 24h。 第四節(jié) 常見致病菌的測定 第二天 接種平板進行分離培養(yǎng) 從肉湯中接種血平板， 36177。 1℃ 培養(yǎng) 24h。 第三天 分純培養(yǎng) 從分離培養(yǎng)的血平板上，挑起乙型溶血圓形突起的細小菌落，在血平板上分純 ， 36177。 1℃ 培養(yǎng) 24h。 血平板上菌落灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直徑約 ~，為圓形突起的細小菌落，乙型溶血鏈球菌。周圍有 2mm~4mm界限分明，無色透明的溶血圈。 第四節(jié) 常見致病菌的測定 第四節(jié) 常見致病菌的測定 第四天 鑒定 革蘭氏染色，陽性， G+鏈狀排列，符合者可做生化鑒定。 生化鑒定 （ 1）鏈激酶試驗（溶纖維蛋白酶試驗） 吸取草酸鉀血漿 ，加 ，混勻，再加入鏈球菌 1824h36177。 1℃ 肉浸液肉湯培養(yǎng)物 %氯化鈣 ，混勻，置于36177。 1℃ 水浴 10min,血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時間，完全溶解為陽性，如 24h后不溶解即為陰性。同時用肉浸液肉湯做陰性對照，用已知的鏈激酶陽性的菌株做陽性對照。 第四節(jié) 常見致病菌的測定 （ 2）桿菌肽敏感試驗 將分純的乙型溶血性鏈球菌接種血平板，在劃線處貼附桿菌肽紙片，36℃ ， 18h，出現(xiàn)抑菌帶為陽性，（可推測為乙型溶血性鏈球菌）。 四、報告 根據(jù)培養(yǎng)后的形態(tài)，菌落特征及生化試驗結(jié)果進行報告。 第四節(jié) 常見致病菌的測定 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ?一、霉菌和酵母計數(shù) ?1 設(shè)備和材料 ?1． 1 溫箱： 25～ 28℃ 。 ?1． 2 振蕩器。 ?1． 3 平天。 ?1． 4 顯微鏡。 ?1． 5 玻塞三角瓶： 300 mL。 ?1． 6 試管： 15 mm 150 mm。 ?1． 7 平皿：直徑 9 cm。 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ?1． 8 吸管： 1 mL 及 10 mL。 ?1． 9 酒精燈。 ?1． 10 載物玻片。 ?1． 11 蓋玻片。 ?1． 12 廣口瓶。 ?1． 13 牛皮紙袋： 121℃ 滅菌 20 min。 ?1． 14 金屬勺、刀等。 ?1． 15 試管架。 ?1． 16 接種針。 ?1． 17 橡皮乳頭。 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ?2 培養(yǎng)基和試劑 ?2． 1 馬鈴薯 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，附加抗菌素，按 GB 中 規(guī)定。 ?2． 2 孟加拉紅培養(yǎng)基：按 GB 中 規(guī)定。 ?2． 3 高鹽察氏培養(yǎng)基：按 GB 中 規(guī)定。 ?2． 4 滅菌蒸餾水。 ?2． 5 乙醇。 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ?檢驗程序 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ?4 操作步驟 ?4． 1 采樣：取樣時須特別注意樣品的代表性和避免采樣時的污染。首先準(zhǔn)備好滅菌容器和采樣工具，如滅菌牛皮紙袋或廣口瓶，金屬刀或勺等。在衛(wèi)生學(xué)調(diào)查基礎(chǔ)上，采取有代表性的樣品。樣品采集后應(yīng)盡快檢驗，否則應(yīng)將樣品放在低溫干燥處。 ?糧食（包括糧庫貯糧，糧店或家庭小量存糧）樣品的采集，可根據(jù)糧囤或糧垛的大小和類型，分層定點取樣，一般可分三層五點，或分層隨機采取不同點的樣品，充分混合后，取 500 g 左右送檢。小量存糧可使用金屬小勺采取上、中、下各部位的混合樣品。 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ?海運進口糧的采樣：每一船倉采取表層、上層、中層及下層四個樣品，每層從五點取樣混合，如船倉盛糧超過 10000 t，則應(yīng)加采一個樣品。必要時采取有疑問的樣品送檢。 ?谷物加工制品（包括熟飯、糕點、面包等） 、發(fā)酵食品、乳及乳制品以及其 ?他液體食品，用滅菌工具采集可疑霉變食品 250 g，裝入滅菌容器內(nèi)送檢。 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ?4． 2 以無菌操作稱取檢樣 25 g（或 25 mL） ，放入含有 225 mL滅菌水的玻塞三角瓶中，振搖 30 min，即為 1： 10 稀釋液。 ?4． 3 用滅菌吸管吸取 1： 10稀釋液 10 mL，注入試管中，另用帶橡皮乳頭的 1 mL滅菌吸管反復(fù)吹吸 50 次，使霉菌孢子充分散開。 ?4． 4 取 1 mL1： 10稀釋液注入含有 9 mL滅菌水的試管中，另換一支 1 mL滅菌吸管吹吸 5 次，此液為 1： 100 稀釋液。 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ?4． 5 按上述操作順序做 10倍遞增稀釋液，再稀釋一次，換用一支 1 mL滅菌吸管，根據(jù)對樣品污染情況的估計，選擇 3 個合適的稀釋度，分別在做 10 倍稀釋的同時，吸取 1 mL 稀釋液于滅菌平皿中，每個稀釋度做 2 個平皿，然后將涼至 45℃ 左右的培養(yǎng)基注入平皿中，待瓊脂凝固后，倒置于 25～ 28℃溫箱中， 3 d后開始觀察，共培養(yǎng)觀察 5 d。 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ?4． 6 計算方法：通常選擇菌落數(shù)在 10～ 150之間的平皿進行計數(shù)，同稀釋度的 2個平皿的菌落平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為每克（或毫升）檢樣中所含霉菌和酵母數(shù)。 ?4． 7 報告：每克（或毫升）食品所含霉菌和酵母數(shù)以個 /g（個 /mL）表示。 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ?二、常見產(chǎn)毒霉菌的鑒定 ?1 設(shè)備和材料 顯微鏡。 目鏡測微計。 物鏡測微計。 溫箱。 冰箱。 無菌接種罩。 放大鏡。 酒精燈。 接種鉤針。 分離針。 滴瓶。 載物玻片。 蓋玻片： 18mm 18mm。 小刀。 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ?2 培養(yǎng)基和試劑 乳酸－苯酚液 察氏培養(yǎng)基 馬鈴薯、葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基 ? 馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基 玉米粉瓊脂培養(yǎng)基 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ?3 操作步驟 菌落的觀察：為了培養(yǎng)完整的巨大菌落以供觀察記錄，可將純培養(yǎng)物點植于平板上。方法是：將平板倒轉(zhuǎn)，向上接種一點或三點，每菌接種兩個平板，倒置于 25～ 28℃ 溫箱中進行培養(yǎng)。當(dāng)剛長出小菌落時，取出一個平皿，以無菌操作，用小刀將菌落連同培養(yǎng)基切下 1cm 2cm的小塊，置菌落一側(cè)，繼續(xù)培養(yǎng)，于 5～ 14d進行觀察。此法代替小培養(yǎng)法，可直接觀察子實體著生狀態(tài)。 斜面觀察：將霉菌純培養(yǎng)物劃線接種 (曲霉、青霉 )或點種 (鏈刀菌或其他菌 )于斜面，培養(yǎng) 5～ 14d，觀察菌落形態(tài)，同時還可以將菌種管置顯微鏡下用低倍鏡直接觀察孢子的形態(tài)和排列。 第五節(jié) 真菌學(xué)檢驗 ? 制片：取載玻片加乳酸－苯酚液一滴，用接種針鉤取一小塊霉菌培養(yǎng)物，置乳酸－苯酚液中，用兩支分離針將培養(yǎng)物撕開成小塊，切忌涂抹，以免破壞霉菌結(jié)構(gòu)。然后加蓋玻片，如有氣泡，可在酒精燈上加熱排除。制片時最好是在接種罩內(nèi)操作，以防孢子飛揚。 鏡檢：觀察霉菌的菌絲和孢子的形態(tài)和特征、孢子的排列等，并做詳細記錄。 報告：根據(jù)菌落形態(tài)及鏡檢結(jié)果，參照以下各種霉菌的形態(tài)描述及檢索表，確定菌種名稱。 謝謝觀看 /歡迎下載 BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES. BY FAITH I BY FAITH