【正文】 in二、致病性沙門氏菌經(jīng)口進入人體以后，在腸道內(nèi)大量繁殖，經(jīng)淋巴系統(tǒng)進入血液，造成一過性菌血癥，即感染過程。隨后，沙門氏菌在腸道和血液中受到機體的抵抗而被裂解、破壞，釋放大量內(nèi)毒素，使人體中毒，出現(xiàn)中毒癥狀。三、主要癥狀? 急性胃腸炎：潛伏期為6～12h，最長可達24h，病人臨床表現(xiàn)為惡心、頭痛、出冷汗、面色蒼白，繼而出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、發(fā)熱，體溫高達38～40℃，大便水樣或帶有膿血、粘液，中毒嚴重者出現(xiàn)寒戰(zhàn)、驚厥、抽搐和昏迷等。此菌中毒死亡率較低。四、流行病學(xué)特點1．季節(jié)性特點：全年皆可發(fā)生，多見于夏、秋兩季。2. 原因食品：主要為動物性食品，特別是畜肉類及其制品，其次為禽肉、蛋類、乳類及其制品，由植物性食品引起者很少。3. 食品中沙門氏菌的來源：(1)家畜、家禽的生前感染和宰后污染；(2)乳中；(3)蛋類；(4)熟制品4. 沙門氏菌食物中毒發(fā)病率較高，占總食物中毒的40％～60％，最高可達90％。五、檢驗食品中沙門氏菌的檢驗方法，應(yīng)按《中華人民共和國國家標準——食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗 沙門氏菌檢驗方法》(GB/ T4789. 4—2003)進行。主要程序： 前增菌和增菌 分離 生化試驗 血清學(xué)分型鑒定(O、H、Vi抗原的鑒定) 結(jié)果報告前增菌:冷凍的肉類、蛋制品、乳制品等加工食品。– 方法是將樣品25g(mL)用緩沖蛋白胨水(BP)225mL勻漿后于37℃培養(yǎng)4h。選擇性增菌——MM(TTB)及SC– 前增菌后的樣品。取10mL加入到100mL選擇性增菌液中培養(yǎng)18～24h。– 鮮肉、鮮蛋、鮮乳或其它未經(jīng)過加工的食品、病人樣品等?？芍苯尤悠?5g(mL)用鹽水混勻，并用MM(TTB)及SC進行選擇性增菌。細菌分離與菌落挑選(或HE、WS或SS)瓊脂平板各一個，經(jīng)37℃培養(yǎng)18～24h(DHL、HE、WS、SS)或40～48h(BS)，觀察菌落形態(tài)?！?個接種于三糖鐵(TSI)瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)18—24h。 表 腸桿菌科各屬在三糖鐵(TSI)上的反應(yīng)結(jié)果 斜面 底層 產(chǎn)氣 H2S 可能的菌屬和種 + +/ + 沙門氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸菌、變形桿菌屬、緩慢愛德華氏菌+ + +/ + 沙門氏菌Ⅲ、弗勞地氏檸檬酸桿菌、普通變形桿菌 + + 沙門氏菌屬、大腸埃希氏菌屬、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬 + 傷寒沙門氏菌、雞沙門氏菌、志賀氏菌屬、大腸埃希氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、摩根氏菌、普羅菲登斯菌屬+ + + 大腸埃希氏菌、腸桿菌屬、克雷伯氏菌屬、沙雷氏菌屬、弗勞地氏檸檬酸桿菌 血清學(xué)鑒定 由于引起人和動物發(fā)病的沙門氏菌絕大多數(shù)分布于A—F群中，所以通常只需做A—F群O抗原成分和H抗原鑒定即可判定沙門氏菌的血清型。(1)O抗原鑒定：首先用市售AF多價抗O血清做玻片凝集試驗。出現(xiàn)凝集后，再用代表6個O群的O因子血清，逐一檢查，以確定待檢菌屬于哪個O群。(2)H抗原鑒定：一般最好使用163種規(guī)格診斷血清中的8個H多價血清來檢查方法,類似于O抗原鑒定(3)Vi抗原鑒定：用Vi因子血清檢查。生化學(xué)鑒定 鑒定沙門氏菌的生化試驗主要有：硝酸鹽還原試驗 鳥氨酸和賴氨酸脫羧酶試驗 靛基質(zhì) ONPG 水楊苷 衛(wèi)矛醇 山梨醇 動力 KCN 丙二酸鹽試驗沙門氏菌的快速檢驗方法：1．熒光抗體法(以前列入進出口檢驗專業(yè)標準) 2．E15快速生化鑒定系統(tǒng)檢查法 3．噬菌體裂解法4．酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、DNA探針技術(shù)、PCR技術(shù)等第三節(jié) 致病性(致瀉性)大腸埃希氏菌及其檢驗Examination of diarrheogenic Escherichia coli? 條件性致病菌(opportunistic pathogen)? 致病性大腸埃希氏菌 是指能使人、動物()感染及人食物中毒的一群大腸桿菌。? 致病性大腸埃希氏菌屬主要分為五大類：產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌(ETEC) 腸道侵襲性大腸埃希氏菌(EIEC)腸道致病性大腸埃希氏菌(EPEC) 腸道出血性大腸埃希氏菌(EHEC) O157:H7腸粘附性大腸埃希氏菌(EAEC)致病大腸埃希菌種類菌株侵襲部位疾病與癥狀致病機制ETEC小腸旅行者腹瀉、嬰幼兒腹瀉、水樣便、腹痛等LT、STEPEC小腸嬰幼兒腹瀉、水樣便發(fā)熱、嘔吐病菌黏附、破壞細胞EIEC結(jié)腸志賀樣腹瀉，膿血便黏附、內(nèi)毒素破壞細胞EHEC結(jié)腸出血性結(jié)腸炎等志賀樣毒素(VERO毒素)EAEC小腸嬰兒腹瀉、水樣便、脫水黏附、毒素? 致病性大腸桿菌與非致病性大腸桿菌在形態(tài)、培養(yǎng)特性及生化特性上是不能區(qū)別的，只有用血清學(xué)方法按抗原性質(zhì)來區(qū)分。致病性大腸埃希氏菌的致病性是一個很復(fù)雜的問題，也并非由某一方面的因素所決定。腸外感染：多為機會感染，表現(xiàn)為泌尿系感染(多見)，膽囊炎、腹膜炎等。腸內(nèi)感染：由致病大腸埃希菌引起，表現(xiàn)為腹瀉。一、生物學(xué)特性1．形態(tài)與染色特性菌體兩端鈍圓，中等大小，桿狀(有時呈卵圓形)；1～3181。m X ；周生鞭毛，能運動；不產(chǎn)生莢膜，無芽孢；革蘭氏陰性。有時兩端著色較濃，要與巴氏桿菌區(qū)分開來。2．培養(yǎng)特性1)需氧及兼性厭氧菌2)對營養(yǎng)要求不高，在普通瓊脂上生長良好，在15～45℃范圍內(nèi)均可生長，最適生長溫度37℃，～。3)在普通瓊脂平板上可形成圓形、凸起、光滑、濕潤、半透明、邊緣整齊、中等大小的菌落。與沙門氏菌菌落較相似，但是，大腸桿菌菌落對光(45角折射)觀察可見熒光。4)在普通肉湯中18～24h均勻渾濁，而后底部出現(xiàn)粘性沉淀物，并伴有臭味。能形成菌膜。5)部分菌落可出現(xiàn)β溶血。6)遠藤瓊脂：帶金屬光澤的紅色菌落7)S．S瓊脂：多不生長，少數(shù)生長的細菌，也因發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸而形成紅色菌落8)伊紅美蘭(EMB)瓊脂：紫黑色菌落，有的有金屬光澤9)麥康凱瓊脂：菌落呈紅色3．生化特性1)可發(fā)酵多種碳水化合物產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不典型菌株不發(fā)酵或遲緩發(fā)酵乳糖。2)對蔗糖，衛(wèi)矛醇、水楊苷發(fā)酵結(jié)果不一致。3)大多數(shù)菌株對賴氨酸、精氨酸和鳥氨酸有脫羧基作用。4)不產(chǎn)生H2S，不液化明膠，不分解尿素。5)不能在氰化鉀培養(yǎng)基上生長，靛基質(zhì)試驗陽性，VP試驗陰性，不利用枸櫞酸鹽。此為典型的大腸埃希氏菌特性。IMViC試驗： I：吲哚(靛基質(zhì))試驗， M：甲基紅試驗，Vi：VP試驗， C：枸櫞酸鹽利用試驗典型大腸桿菌IMViC試驗為+、+、。如IMViC試驗為+、+、，且乳糖發(fā)酵，表明被檢物已有糞便污染，有發(fā)生腸道傳染病的危險，這是衛(wèi)生細菌中常用的檢測指標。表5—20 大腸桿菌的主要生化特性硫化氫 – 賴氨酸脫羧酶 +/–尿素酶 – 鳥氨酸脫羧酶 +/–靛基質(zhì) + 精氨酸雙水解酶 (+)/–MR試驗 + 苯丙氨酸脫氨酶 –VP試驗 – 丙二酸鹽 –水楊苷 d 西蒙氏枸櫞酸鹽利用 –七葉苷 d 葡萄糖 ⊕衛(wèi)矛醇 d 乳糖 +或KCN – 動力 +/–阿拉伯糖 + 山梨醇 +注：+陽性； －陰性； d有不同的生化型； +/多數(shù)陽性，少數(shù)陰性； (+)/多數(shù)遲緩陽性，少數(shù)陰性； 遲緩不規(guī)則陽性或陰性 大腸埃希氏菌的抗原構(gòu)造主要由菌體抗原(O)，鞭毛抗原(H)和莢膜抗原(K)三部分組成。1)O抗原 每一血清型只含有一種O抗原。本菌已發(fā)現(xiàn)有170種O抗原，分別以阿拉伯數(shù)字表示。2)H抗原 一種大腸埃希氏菌只有一種H抗原，無鞭毛則無H抗原。H抗原共有64種。3)K抗原 又稱包膜抗原。共有103種。? 新分離的大腸埃希氏菌70％具有K抗原。根據(jù)耐熱性可把K抗原分為A、B、L三類，B抗原與L抗原均可在煮沸后被破壞，A抗原耐熱性強，可耐受煮沸1小時而不被破壞。致病性大腸埃希氏菌的抗原主要為B抗原，少數(shù)為L抗原。? 根據(jù)O抗原可將大腸埃希氏菌分成若干血清群，再根據(jù)K抗原和H抗原進一步分為若干個血清型或亞型。根據(jù)大腸埃希氏菌抗原的鑒定結(jié)果，寫出其抗原式，如O111：K58(B)H12。一般認為H抗原與致病性無關(guān)，因此，一般不需要進行H抗原的鑒定。 抵抗力中等，各菌型之間存在差異。此菌對青霉素有中等抵抗力，對一般消毒劑都比較敏感。對氯尤為敏感， mg/L時，即可殺死此菌。此菌在土壤中、水中及糞便中可存活數(shù)月以上 。6．毒素特性 有些大腸埃希氏菌產(chǎn)生腸毒素。1)不耐熱腸毒素(heatlabile enterotoxin，LT)：化學(xué)成分為蛋白質(zhì)，分子量較大，具有免疫原性。60℃ 30分破壞?？梢鹉c道分泌增加，出現(xiàn)腹瀉。2)耐熱腸毒素(heatstable enterotoxin，ST)：分子量較小，無抗原性。100℃ 30分鐘仍有活性?？梢鹉c分泌增加。二、中毒機制與主要癥狀1. 中毒機理 腸道內(nèi)感染的機制如下：1)腸毒素型大腸桿菌(ETEC)：主要引起腹瀉(幼畜或雛雞)，約有40個血清型。腸毒素型菌株進入腸道后主要在小腸內(nèi)繁殖，不損害腸上皮細胞。繁殖過程中產(chǎn)生腸毒素。2)腸致病型大腸桿菌(EPEC)：是引起嬰兒腹瀉的主要病原菌，該菌不產(chǎn)腸毒素，也無侵襲力，致病機理不清，約有18個血清型。3)腸侵襲型大腸桿菌(EIEC)：較少見，該菌不產(chǎn)腸毒素，但侵襲大腸腸壁上皮細胞，引起炎癥反應(yīng)，形成潰瘍，約有8個血清型。引起類似痢疾的癥狀。2. 主要癥狀：；腸道外感染主要引起尿路感染，新生兒腦膜炎，敗血癥及其他部位的感染。主要癥狀為急性腸胃炎，潛伏期為12～24h，臨床出現(xiàn)嘔吐、腹瀉、發(fā)熱(一般不超過39℃)、頭痛、腹痛等，病程一般為1～3d。第四節(jié) 副溶血性弧菌及其檢驗Examination of Vibrio parahaemolyticus副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus) 舊稱致病性嗜鹽菌，日本人稱之為腸炎弧菌。弧菌屬(Vibrio)代表種之一。本菌最早由日本的藤野(1951)從大阪一起小沙丁魚干引起的食物中毒病例中分離到，隨后各國相繼有類似報道。各種海魚和貝蛤類帶菌比較普遍。 淡水魚、熟肉類、禽蛋類及其它制品可因交叉污染而帶菌。美國和歐盟強制性要求進口水產(chǎn)品必須檢查本菌，一旦發(fā)現(xiàn)陽性，則予以扣留并銷毀。副溶血性弧菌食物中毒在日本占第1位，我國近年來的中毒事件也日漸增多。本菌引起的食物中毒主要發(fā)生在6～10月間，以6月份最多見。臨床表現(xiàn)為典型的急性胃腸炎：腹疼、腹瀉，繼而惡心、嘔吐、頭疼、發(fā)熱、倦怠等。發(fā)病迅速，病程較短，1～3天可恢復(fù)。一、生物學(xué)特性該菌為G桿菌，稍彎曲成弧狀，～～。散在，一般為端生單鞭毛，運動活潑。無芽孢，無莢膜，兼性厭氧。有嗜鹽性，最適NaCl濃度為3～%，在不含NaCl的環(huán)境中不生長。～(～11)。對酸敏感，在食醋中5分鐘即被殺死；不耐熱，56℃、30min可殺死本菌。在淡水中生存不超過2d，在海水中可存活47d以上。在血平板上本菌菌落較大，灰黃色，致病性菌株由于產(chǎn)生一種特異性溶血素，呈β溶血，并在菌落周圍形成無血球的透明暈環(huán)(神奈川現(xiàn)象)。在SS瓊脂上本菌可形成灰白色不透明、粘稠、不易挑起的菌落。在EMB瓊脂上不易生長。 表 副溶血性弧菌在各種瓊脂的菌落特征 培養(yǎng)基 菌落大小 邊緣 隆起度 透明度 粘稠度 顏色 其它嗜鹽菌選 , 完整 隆起 渾濁 無粘性 無色 濕潤擇性瓊脂 ,直徑2mm 不完整 平坦SS瓊脂 直徑2mm 完整 扁平,有時稍隆起 透明 不易挑起或成絲狀 無色血瓊脂 直徑3mm 完整 隆起 渾濁 無粘性 灰色 濕潤,或有β溶血營養(yǎng)瓊脂 完整,個別不