基因工程育種碩士課程-資料下載頁
2024-09-01 09:30本頁面
【正文】 TCGCAGGTCCGAGGTACTAAAGTGTTTTAAGGTCTAGACTTTTAGGGCTATTGTCGAAGTCACAACATCACGCAATCAAGATTTGACTGAAGCGCGATTATCTATAAAAGGATCAGTTGTGTTTTTCGTCCGCATCTTTTCCTTGTTCCACAACCTTCGATTCTAAATACACTCCAATCCATTGACTGCTTGAATAATCGAATTCCCGCGGTGGAGCTCCAATTCGCCCTATAGTGAGTCGTATTACGCGCGCTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGA 圖 4 表達載體 pgVvsmfc 測序結(jié)果圖 1p V g a f p4 1 68 b pa f p g e neV g p d p r o m o t e rt e r m i n a t o rA m p +S a c IS a c I IN c o IS a l IB s r G IK p n I?表達載體 pvgafp ?草菇原生質(zhì)體的制備與再生 圖 5 草菇 V23原生質(zhì)體含 D甘露醇的 PDA培養(yǎng)基上再生 ?草菇原生質(zhì)體再生菌絲 0℃ 低溫致死時間的確定 致死時間 24h 48h 72h 84h 96h 108h 120h 132h 144h 恢復(fù)生長情況 RG RG RD RD RD RD D D D 表 1 草菇菌絲 0℃ 致死時間的測定 注： RG為 33℃ 培養(yǎng)能恢復(fù)生長； D為 33℃ 培養(yǎng)不能恢復(fù)生長 ?0℃ 低溫篩選獲得草菇擬轉(zhuǎn)化子 圖 6 擬轉(zhuǎn)化子 0℃ 低溫處理后恢復(fù)生長情況 ?草菇擬轉(zhuǎn)化子的 PCR檢測 圖 7 草菇擬轉(zhuǎn)化子基因組 DNA的 PCR擴增結(jié)果 (圖未全附） 陽性質(zhì)粒 V23CK 水對照 ?草菇擬轉(zhuǎn)化子的 Southern雜交鑒定 ? 基因組 DNA的提取 圖 8 草菇轉(zhuǎn)化子基因組 DNA凝膠電泳結(jié)果 ? 基因組 DNA的酶切 圖 9 草菇轉(zhuǎn)化子基因組 DNA的酶切結(jié)果 ? Southern雜交分析 圖 10 轉(zhuǎn)化子基因組 DNA的 Southern 雜交結(jié)果 M為 DNA Marker λHindⅢ ； ck為 轉(zhuǎn)化的草菇 ； ck+為 質(zhì)粒 pgVvsmfc； （ a） 17分別為 TVM23 TVM23 TVM23 TVM231 TVM231 TVM231 TVM2314； （ b） 17分別為 TVM23 TVM23 TVM23 TVM23TVM23 TVM23 TVM239。 （ a） （ b） ?轉(zhuǎn)基因草菇的多功能纖維素酶酶活 圖 11 CMC酶活最大值及其顯著性分析 ?以 CMC為誘導(dǎo)底物 圖 12 FPA酶活最大值及其顯著性分析 ?以稻草為誘導(dǎo)底物 圖 13 CMC酶活最大值及其顯著性分析 圖 14 FPA酶活最大值及其顯著性分析 ?轉(zhuǎn)基因草菇的栽培及其生物學(xué)特性 ?試管中菌絲生長 圖 15 草菇菌絲在試管中的生長情況 ? 轉(zhuǎn)基因草菇的子實體發(fā)育 （ a） （ b） （ c） （ d） 圖 17（ a）為 TVM233 ；（ b）為 TVM239；（ c）為 TVM2314；（ d）為對照 表 5 轉(zhuǎn)基因草菇的增產(chǎn)量 菌種 菇蕾數(shù)目（個） 出菇產(chǎn)量（ g） 增產(chǎn)（ %） V23CK 120 1200 0 TVM233 178 1780 TVM235 180 1800 TVM237 160 1600 TVM238 140 1400 TVM239 220 2200 TVM2313 110 1100 TVM2314 230 2300 ? 轉(zhuǎn)基因草菇的孢子收集 草菇開傘 圖 19 孢子收集裝置 圖 18 草菇正常開傘 擔(dān)孢子濃度（個 /μ L） 3 6 12 24 48 單孢菌落數(shù)（個） 2 8 18 87 200 表 6 單孢分離的草菇擔(dān)孢子在 PDA平板上最佳濃度的測定 12個 /μL ?轉(zhuǎn)基因草菇的單孢分離及其后代遺傳穩(wěn)定性分析結(jié)果 圖 20 單孢萌發(fā)的單菌落圖 ? 單孢分離 ?F1 代轉(zhuǎn)基因草菇的 PCR鑒定 圖 21 F1代轉(zhuǎn)基因草菇 DNA提取 圖 22 F1代轉(zhuǎn)基因草菇 PCR鑒定 C D ?高轉(zhuǎn)化率轉(zhuǎn)基因草菇 左：轉(zhuǎn)基因草菇； 右：對照 ?轉(zhuǎn)基因草菇的安全性評價
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