基因工程育種碩士課程(參考版)
2024-09-03 09:30本頁(yè)面
【正文】 1) 特定的 G:C變 A:T 2) 錯(cuò)配取代 ? 將變異基因送回染色體 1）體內(nèi)自發(fā)的同源重組； 2）定位整合作用 六 . 基因工程育種實(shí)例 耐寒凍轉(zhuǎn)基因草菇的培育 草菇的特點(diǎn)： ，不耐低溫 ,菌絲在 4℃ 低 溫下2d即自溶而死亡； 4℃ 低溫下 24h后即液化、腐爛； 3. 采收后的子實(shí)體容易開(kāi)傘，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值下降，口感差， 商業(yè)價(jià)值低 4. 草菇生物轉(zhuǎn)化率低： 2030% 5. 常規(guī)的雜交育種培育抗寒的草菇菌株十分困難 ? 抗冷凍蛋白基因mRNA RTPCR afp gene pGafp ?mfc基因的克隆 實(shí)驗(yàn)方案 表達(dá)載體 pvgafp 表達(dá)載體 pgVvsmfc PEG介導(dǎo)共轉(zhuǎn)化 草菇菌絲原生質(zhì)體 PCR與 Southern雜交鑒定 含有 mfc基因的轉(zhuǎn)基因草菇 轉(zhuǎn)基因草菇后代遺傳穩(wěn)定性分析 擬轉(zhuǎn)化子的篩選 草菇對(duì) 0℃ 低溫致死時(shí)間的確定 多功能纖維素酶酶活測(cè)定 1p g V v s m f c4 7 8 5 b pm f cg p d V v s p r o m o t e rt e r m i n a t o rA m p +S a c IS a c I IB s r G IS p e IE c o R I?表達(dá)載體（ pgVvsmfc）的構(gòu)建 目的條帶 圖 2 PCR鑒定 圖 3 酶切鑒定 ACCCGCCAAAAAGCACAGAGGGCATGCGCTTGACTGAAGCGTCGACGAATCACTAGTGATTTATGCTGGTTATCTGAGCGGGCCCGTATCCTATCGGCGTTAGAGTGCAGTCGGAGAGCCGCATGTATCACGGAAAGGACTCGAACAGGGAGTTTTATCTATTTTTATTGGTCGATATCAGTCAGATTGTCAGTGCGTCAAAGTTGCATCCATAAGGCTACTACGGTGAAACCGGTGTATCCTGGGATATCATGAAATGGCTGTATGCAGAAGATAAGAATGAGAGTAGTTCTAGAACAACAAACCCAGGCCAGGGAGGAAGCTGTAGCATTTGCAAGACTTTGCAGGGCCTTTCAAAGGCACTTCCATCCAAAGCTCGAGCACGGTTCCAGGCAACCTTAGTCATGGGGCGATAGAACTGAAGAACGTTTGCTGATTGGCAGTCCATCCCAAAGGACTCGGCCAATAAATCCTACCCAATCGCAGGTCCGAGGTACTAAAGTGTTTTAAGGTCTAGACTTTTAGGGCTATTGTCGAAGTCACAACATCACGCAATCAAGATTTGACTGAAGCGCGATTATCTATAAAAGGATCAGTTGTGTTTTTCGTCCGCATCTTTTCCTTGTTCCACAACCTTCGATTCTAAATACACTCCAATCCATTGACTGCTTGAATAATCGAATTCCCGCGGTGGAGCTCCAATTCGCCCTATAGTGAGTCGTATTACGCGCGCTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGA 圖 4 表達(dá)載體 pgVvsmfc 測(cè)序結(jié)果圖 1p V g a f p4 1 68 b pa f p g e neV g p d p r o m o t e rt e r m i n a t o rA m p +S a c IS a c I IN c o IS a l IB s r G IK p n I?表達(dá)載體 pvgafp ?草菇原生質(zhì)體的制備與再生 圖 5 草菇 V23原生質(zhì)體含 D甘露醇的 PDA培養(yǎng)基上再生 ?草菇原生質(zhì)體再生菌絲 0℃ 低溫致死時(shí)間的確定 致死時(shí)間 24h 48h 72h 84h 96h 108h 120h 132h 144h 恢復(fù)生長(zhǎng)情況 RG RG RD RD RD RD D D D 表 1 草菇菌絲 0℃ 致死時(shí)間的測(cè)定 注： RG為 33℃ 培養(yǎng)能恢復(fù)生長(zhǎng)； D為 33℃ 培養(yǎng)不能恢復(fù)生長(zhǎng) ?0℃ 低溫篩選獲得草菇擬轉(zhuǎn)化子 圖 6 擬轉(zhuǎn)化子 0℃ 低溫處理后恢復(fù)生長(zhǎng)情況 ?草菇擬轉(zhuǎn)化子的 PCR檢測(cè) 圖 7 草菇擬轉(zhuǎn)化子基因組 DNA的 PCR擴(kuò)增結(jié)果 (圖未全附） 陽(yáng)性質(zhì)粒 V23CK 水對(duì)照 ?草菇擬轉(zhuǎn)化子的 Southern雜交鑒定 ? 基因組 DNA的提
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