基因工程重組蛋白的分離純化放映-資料下載頁
2025-08-23 09:26本頁面
【正文】 加優(yōu)越，溶解脂的能力強(qiáng)，兼具親水性，在溶解度范圍內(nèi)不會(huì)引起酶的變性失活。 缺點(diǎn)是對(duì)具有生物活性大分子易引起變性失活，操作要求在低溫下進(jìn)行。 總體來說，蛋白質(zhì)的有機(jī)溶劑沉淀法不如鹽析法普遍。 它把兩種聚合物與一種鹽的水溶液混合在一起，由于聚合物與聚合物之間或聚合物與鹽之間的不溶性形成兩相 具有操作條件溫和、處理量大、易連續(xù)操作等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)克服了常規(guī)萃取有機(jī)溶劑對(duì)生物物質(zhì)的變性作用，在粗提過程中保持了生物物質(zhì)的活性及構(gòu)象等優(yōu)勢(shì) 采用雙水相系統(tǒng)濃縮目的蛋白，受聚合物分子量及濃度、溶液 pH、離子強(qiáng)度、鹽類型及濃度的影響 雙水相萃取技術(shù)是一種新型的分離技術(shù) 反膠團(tuán)萃取 指膠團(tuán)內(nèi)可溶解少量水而形成微型水池，利用膠團(tuán)對(duì)外界有機(jī)溶劑的屏蔽作用，實(shí)現(xiàn)生物物質(zhì)的溶解和分離 具有選擇性高、萃取過程簡(jiǎn)單，正萃、反萃同時(shí)進(jìn)行，能有效防止大分子失活、變性 普通離子型表面活性劑可能對(duì)產(chǎn)品產(chǎn)生污染 。 常用的離子型表面活性劑容易造成蛋白質(zhì)的變性和失活，雖然活性損失較少 反膠團(tuán)萃取法還可提取蛋白質(zhì)、酶、核酸、氨基酸和多肽。 鹽溶法及鹽析法 鹽溶和鹽析主要是通過影響蛋白質(zhì)分子表面的電荷而分離、純化蛋白質(zhì) 硫酸鈉具有化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、溶解度大等優(yōu)點(diǎn)，現(xiàn)在所指的鹽析法實(shí)際上多為硫酸銨鹽析法 該法受蛋白質(zhì)濃度、離子強(qiáng)度、鹽的性質(zhì)、 pH 及溫度等因素影響 上述兩種方法分離純化蛋白質(zhì)后，都要采用凝膠過濾或透析除鹽 離子交換層析 在某一 pH 條件下，載體帶有正電荷或負(fù)電荷，當(dāng)待分離蛋白質(zhì)分子通過載體時(shí)，離子交換使蛋白質(zhì)分子分離純化 機(jī)械強(qiáng)度大、柱效高、孔徑和顆粒大小易于控制，但應(yīng)用范圍窄 不能進(jìn)行快速淋洗，且分離時(shí)間長(zhǎng)，易造成生物分子的變性、失活 離子交換層析是發(fā)展最早的層析技術(shù)之一，目前已成為蛋白質(zhì)分離純化最常用的手段 電泳技術(shù) 電泳技術(shù)作為分離純化蛋白質(zhì)的手段之一，可分為變性電泳、常規(guī)電泳、等電聚焦電泳和毛細(xì)管電泳。 無論是單向凝膠電泳還是雙向凝膠電泳，分離度都是極高的。 毛細(xì)管電泳中蛋白質(zhì)易被石英毛細(xì)管表面所吸附，且一次只能測(cè)一個(gè)試樣。 獲得分離的蛋白質(zhì)，均可用電洗脫或電轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上直接進(jìn)行序列分析 親和層析 優(yōu)點(diǎn)：只需要一步處理即可使某種待分離的蛋白質(zhì)從復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物中分離出來 ,達(dá)到千倍以上的純化 ,并保持較高的活性 親和層析技術(shù)是基于蛋白質(zhì)可與另一種稱做配體的分子能發(fā)生特異的可逆結(jié)合 如果目的蛋白作為藥品，處理后的產(chǎn)品中存在微量染料或金屬都會(huì)對(duì)機(jī)體造成損害 基于對(duì)配體親和力差異的分離技術(shù) 疏水層析 利用固定相載體上偶聯(lián)的疏水性配基與流動(dòng)相中的一些疏水分子發(fā)生可逆性結(jié)合的特性進(jìn)行分離。 優(yōu)點(diǎn)：與離子交換層析應(yīng)用互補(bǔ)，可以作用于分離離子交換很難或不能分離的物質(zhì)。 該方法具有使蛋白質(zhì)變性、僅適合部分蛋白質(zhì)等缺點(diǎn) 方法 原理 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn) 特點(diǎn) 其他方法 反相高效液相色譜法 一種以疏水作用為基礎(chǔ)的色譜分離法 具有分辨率高 、 重復(fù)性好 、 回收率高等優(yōu)點(diǎn) 操作繁瑣 、 難放大 、 成本高 ， 在工業(yè)化生產(chǎn)中的應(yīng)用受到限制 分子印跡 一種識(shí)別聚合物特殊結(jié)合位點(diǎn)的技術(shù) ， 是將生物大分子從凝膠轉(zhuǎn)移到固定基質(zhì)的過程 。 制備容易 ， 成本低廉 ， 強(qiáng)穩(wěn)定性 模板易流失 隨著分離蛋白質(zhì)印跡聚合物的成功合成 ，蛋白質(zhì)印跡技術(shù)已成為研究熱點(diǎn) 高效毛細(xì)管電泳 是 20 世紀(jì) 80 年代問世的一種高效液相分離技術(shù) ， 是經(jīng)典電泳技術(shù)與現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物 。 目前 ， 它已成為分析科學(xué)中最具活力的方法之一 其分離效率高 、 分析速度快 、 樣品用量少 、 抗污染能力強(qiáng)和易自動(dòng)化等特點(diǎn) 儀器設(shè)備精密 ， 成本高 被廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué) 、 醫(yī)學(xué) 、 藥學(xué)以及高分子等多個(gè)領(lǐng)域 柱層析 通常采用固定床間歇操作方式 柱層析具有很高的分離效率 ， 且操作簡(jiǎn)單 但存在著載體利用率低和過程效率低的問題 是蛋白質(zhì)產(chǎn)品分離純化的主流技術(shù)之一 連續(xù)逆流操作層析 基于液液分配機(jī)理 ， 可采用專門的逆流層析裝置 。 分離效率和產(chǎn)率均有提高 操作量不大 ， 過程慢 對(duì)于難分離體系 ， 逆流層析過程是一種有效分離手段
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