【正文】 胞中DNA與組蛋白和大量非組蛋白結(jié)合，并有核膜將其與細胞質(zhì)隔離，結(jié)果真核細胞的轉(zhuǎn)錄和翻譯在時間上和空間上都是分離的，而原核細胞的基因轉(zhuǎn)錄和翻譯是同步的；⑷真核生物的基因是不連續(xù)的，中間存在不被翻譯的內(nèi)含子序列，而原核生物幾乎每一個基因都是完整的連續(xù)的DNA片段；⑸真核生物基因組中非編碼序列遠多于編碼序列；⑹真核生物基因組存在重復序列，重復次數(shù)從幾次到幾百萬次不等；⑺真核生物基因組的復制起點多，缺少明顯的操縱子結(jié)構(gòu)，而原核生物基因組一般是一個復制子；⑻真核生物與原核基因組中存在轉(zhuǎn)座因子。？與順式作用元件結(jié)合部位的結(jié)構(gòu)形式有哪些？答：是指能直接或間接的識別或結(jié)合在各類順式作用元件核心序列上參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的蛋白質(zhì)。大多數(shù)真核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子由某一基因表達后，可通過另一基因的特異的順式作用元件相互作用，從而激活另一基因的轉(zhuǎn)錄，這種調(diào)節(jié)蛋白稱反式作用因子。其DNA結(jié)構(gòu)域的常見形式有：鋅指結(jié)構(gòu)、堿性亮氨酸拉鏈、堿性螺旋環(huán)螺旋。？常見的順式作用元件有哪些？答：基因中能影響基因表達，但不編碼 RNA 和蛋白質(zhì)的 DNA 序列。順式作用元件主要包括啟動子、增強子、負調(diào)控元件等。？答：PCR，Sanger雙脫氧鏈終止法，等電聚焦，Southern 雜交，Northern 雜交。？答：是以斑點雜交為基礎(chǔ)建立的高通量檢測基因表達的一種方法，它是通過某些特殊的微加工技術(shù)將大量已知序列的寡核苷酸或cDNA探針有序的固定于固相支持物表面作為探針，然后與標記的待測核酸進行雜交，通過對雜交信號的檢測分析，獲得待測核酸的各種序列及表達信息。？答：基本原理是以待擴增的DNA分子為模板，以一對人工合成的、分別與模板的5’端及3’端互補的單鏈寡核苷酸作為引物，在耐熱DNA聚合酶的催化下，按照半保留復制的原則合成兩個子代DNA；接著以子代DNA為模板，再次進行合成，如此反復循環(huán)數(shù)十次，最終將原是模板放大數(shù)百萬倍。?答：DNA合成是在DNA聚合酶的催化下，以單鏈或雙鏈DNA模板，以四種2’脫氧核苷三磷酸(dNTP)為底物，在引物或新和成子鏈的3’OH末端依次連接上新的脫氧核苷一磷酸，使新生鏈不斷延長。DNA分子中核苷酸是通過3’,5’磷酸二酯鍵相互連接。如果在底物中加入2’,3’雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。那么當ddNTP摻入到新生鏈中時，由于ddNTP沒有3’OH，不能與其他dNTP上的磷酸集團形成磷酸二酯鍵，DNA新鏈的合成就會終止，此即為雙脫氧末端終止法測序的基本原理。四、論述題1． 雙脫氧末端終止法測序的基本步驟包括哪些？答：1)分離待測核酸模板，模板可以是DNA，也可以是RNA，可以是雙鏈，也可以是單鏈。2)在4只試管中加入適當?shù)囊?、模板?種dNTP(包括放射性標記dATP，例如?32 PdATP和DNA聚合酶（如以RNA為模板，則用反轉(zhuǎn)錄酶），再在上述4只管中分別加入一種一定濃度的ddNTP(雙脫氧核苷酸)。3)與單鏈模板（如以雙鏈作模板，要作變性處理)結(jié)合的引物，在DNA聚合酶作用下從5’端向3’端進行延伸反應(yīng)，32P隨著引物延長摻入到新合成鏈中。當ddNTP摻入時，由于它在3’位置沒有羥基，故不與下一個dNTP結(jié)合，從而使鏈延伸終止。ddNTP在不同位置摻入，因而產(chǎn)生一系列不同長度的新的DNA鏈。4)用變性聚丙烯酰胺凝膠電泳同時分離4只反應(yīng)管中的反應(yīng)產(chǎn)物，由于每一反應(yīng)管中只加一種ddNTP(如ddATP)，則該管中各種長度的DNA都終止于該種堿基(如A)處。所以凝膠電泳中該泳道不同帶的DNA 3’ 末端都為同一種雙脫氧堿基。5)放射自顯影。根據(jù)四泳道的編號和 每個泳道中DNA帶的位置直接從自顯影圖譜上讀出與模板鏈互補的新鏈序列。2． 真核 mRNA 選擇性剪接的方式有那些？舉例說明其基本生物學意義是什么？答：（1）選擇性剪接的方式有: ①外顯子遺漏。 ②3ˊ端剪切位點的變化。 ③ 5ˊ端剪切位點的變 化；④ 內(nèi)含子保留。（2）轉(zhuǎn)錄后選擇性剪接在高等生物細胞的高度異質(zhì)性中起重要作用。由于選擇性剪接的 多樣化，一個基因在轉(zhuǎn)錄后通過 mRNA 前體（hnRNA）的剪接加工而產(chǎn)生兩個或更多的蛋 白質(zhì)，不同的蛋白可能發(fā)揮著不同的生物學效應(yīng)。（3）如 bax 基因的編碼產(chǎn)物是與細胞凋亡有關(guān)的分子。該基因的原始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物經(jīng)過選擇 性剪接形成幾種（α、β、γ 等）不同類型的蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)上的差異主要源于 mRNA 前體 的選擇性剪接。3． 論述小 RNA 分子在基因表達調(diào)控中意義。答：反義RNA是指能與特定mRNA互補結(jié)合的RNA片段，反義RNA由反義基因轉(zhuǎn)錄而來。天然的具有功能的反義RNA分子一般為200個堿基以下的小分子RNA。反義RNA在原核生物翻譯水平上有三種作用方式：（1）反義RNA根據(jù)堿基互補配對原則與mRNA 5ˊ端非翻譯區(qū)包括SD序列相結(jié)合。SD序列是mRNA與核糖體小亞基結(jié)合的部位，反義RNA與SD序列結(jié)合后，阻止了mRNA與核糖體小亞基結(jié)合，直接抑制了翻譯。（2）反義RNA與mRNA 5ˊ端編碼區(qū)起始密碼子AUG結(jié)合，從而抑制mRNA翻譯起始。（3）反義RNA與mRNA的非編碼區(qū)互補結(jié)合，使mRNA構(gòu)象改變，影響其與核糖體結(jié)合，間接抑制了mRNA的翻譯。4． 簡述真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機制。答：主要通過反式作用因子與順式作用元件和 RNA 聚合酶（RNA polymerase, RNA pol）的 相互作用完成。（1）順式作用元件(cisacting element)指某些能影響基因表達但不編碼新的蛋白質(zhì)和 RNA的 DNA 序列，按照功能分為啟動子、增強子、負調(diào)控元件（沉默子等）。（2）反式作用因子(transacting factor)指能直接或間接地識別或結(jié)合在各順式作用元件 8～12bp 核心序列上，參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的一組蛋白質(zhì)，也稱序列特異性DNA結(jié)合蛋白(sequence specific DNA binding protein，SDBP)，這是一類細胞核內(nèi)蛋白質(zhì)因子。在結(jié)構(gòu)上含有與DNA 結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。（3）反式作用因子的調(diào)控機制①反式作用因子的活性調(diào)節(jié)：真核基因轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)節(jié)，首先表現(xiàn)為反式作用因子的功 能調(diào)節(jié)，即特定的反式作用因子被激活后，可以啟動特定基因的轉(zhuǎn)錄。反式作用因子的激活方式如下:表達式調(diào)節(jié)。共價修飾。配體結(jié)合。蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用②反式作用因子作用方式：成環(huán)；扭曲；滑動；Oozing③反式作用因子的組合式調(diào)控：基因表達的調(diào)控不是由單一的反式作用因子完成而是幾 種因子組合，發(fā)揮特定的作用。5． 熒光定量 PCR 可以實現(xiàn)模板數(shù)的定量，其原理是什么？答：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；剛開始時, 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上。PCR擴增時，Tap酶的5’端－3’端外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步?；谝韵碌睦碚?1. ，所以,如果結(jié)果X循環(huán),那產(chǎn)物就是2的（x1),那產(chǎn)物就是2的（x+1）次方,就可以計算出起始模板的量